副猪嗜血杆菌的分离鉴定及其MLST分型研究以及aroA基因自杀性质粒的构建
| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-12页 |
| 第一篇 文献综述 副猪嗜血杆菌的研究进展 | 第12-24页 |
| 1 病原学 | 第12-13页 |
| 2 病理学 | 第13页 |
| 3 毒力因子 | 第13-16页 |
| ·外膜蛋白 | 第14-15页 |
| ·神经氨酸酶 | 第15页 |
| ·三聚体自转运蛋白 | 第15页 |
| ·细胞致死性肿胀毒素 | 第15-16页 |
| ·脂多糖 | 第16页 |
| 4 诊断方法 | 第16-18页 |
| ·病原菌的分离 | 第16-17页 |
| ·抗体诊断 | 第17页 |
| ·免疫组织化学技术 | 第17页 |
| ·分子生物学手段鉴定 | 第17-18页 |
| ·PCR | 第18页 |
| ·原位杂交技术 | 第18页 |
| 5 分型 | 第18-22页 |
| ·血清分型 | 第18-19页 |
| ·多位点酶电泳图谱分型法 | 第19页 |
| ·基因分型 | 第19-22页 |
| 6 免疫和防治 | 第22-24页 |
| 第二篇 实验部分 | 第24-66页 |
| 第一章 副猪嗜血杆菌的分离与鉴定 | 第24-36页 |
| 摘要 | 第24-25页 |
| 1 材料和方法 | 第25-29页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第25页 |
| ·溶液配制 | 第25-26页 |
| ·病料来源 | 第26页 |
| ·参考菌种 | 第26页 |
| ·引物 | 第26页 |
| ·病料采集和病原菌分离方法 | 第26-27页 |
| ·革兰氏染色及镜检 | 第27页 |
| ·副猪嗜血杆菌基因组DNA提取 | 第27-28页 |
| ·病原菌的PCR鉴定 | 第28-29页 |
| ·Hps的血清分型 | 第29页 |
| 2 结果与分析 | 第29-33页 |
| ·临床表现和剖检变化 | 第29-30页 |
| ·病原菌分离结果 | 第30-31页 |
| ·革兰氏染色镜检结果 | 第31页 |
| ·PCR鉴定结果 | 第31-32页 |
| ·Hps血清分型的结果 | 第32-33页 |
| 4 讨论 | 第33-36页 |
| 第二章 副猪嗜血杆菌广东分离株MLST分型研究 | 第36-48页 |
| 摘要 | 第36页 |
| 1 材料和方法 | 第36-39页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第36页 |
| ·溶液配制 | 第36-37页 |
| ·参考菌种 | 第37页 |
| ·引物 | 第37-38页 |
| ·DNA电泳检测 | 第38页 |
| ·DNA紫外分光光度法纯度测定 | 第38页 |
| ·7个看家基因的PCR扩增及纯化 | 第38-39页 |
| ·DNA测序与比对 | 第39页 |
| ·统计分析 | 第39页 |
| 2 结果与分析 | 第39-45页 |
| ·7个看家基因的PCR扩增结果 | 第39-40页 |
| ·DNA测序与比对及ST分析 | 第40-43页 |
| ·位点多态性分析 | 第43页 |
| ·基于ST型的菌群分析 | 第43-44页 |
| ·基因型和血清型的关系 | 第44-45页 |
| 3 讨论 | 第45-48页 |
| 第三章 aroA基因自杀性质粒的构建 | 第48-66页 |
| 摘要 | 第48页 |
| 1 材料与方法 | 第48-58页 |
| ·质粒载体与菌株及其培养条件 | 第49页 |
| ·酶、抗生素及试剂盒 | 第49页 |
| ·主要仪器 | 第49-50页 |
| ·培养基及抗生素、试剂的配置配制 | 第50-51页 |
| ·引物 | 第51页 |
| ·Hps的增殖及其基因组的提取 | 第51-52页 |
| ·核酸物质的胶回收纯化 | 第52页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备(氯化钙法) | 第52-53页 |
| ·连接产物的转化 | 第53页 |
| ·质粒的制备 | 第53-54页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第54-55页 |
| ·菌株H10 PCR鉴定 | 第55页 |
| ·菌株H10 aroA基因的鉴定 | 第55页 |
| ·菌株H10 aroA基因前后壁的克隆与鉴定 | 第55-56页 |
| ·中间转移质粒pMD18-T-△aroA的构建 | 第56-57页 |
| ·重组自杀性质粒pEM△aroA的构建 | 第57-58页 |
| 2 结果与分析 | 第58-62页 |
| ·菌株H10的PCR鉴定 | 第58页 |
| ·aroA基因前后臂片段的扩增 | 第58-59页 |
| ·aroA基因前后臂片段的克隆与测序 | 第59-60页 |
| ·中间转移质粒pMD18-T-△aroA的构建 | 第60-61页 |
| ·自杀性质粒pMD18-T-△aroA的构建 | 第61-62页 |
| 3 讨论 | 第62-66页 |
| 参考文献 | 第66-76页 |
| 致谢 | 第76页 |
