| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 缩略语表（Abbreviation） | 第8-12页 |
| 1 前言 | 第12-26页 |
| ·多基因表达系统的研究意义 | 第12-13页 |
| ·杆状病毒多基因表达系统研究概况 | 第13-15页 |
| ·杆状病毒表达载体系统 | 第15-24页 |
| ·杆状病毒表达载体系统的优点 | 第16-17页 |
| ·杆状病毒表达载体系统的不足 | 第17-18页 |
| ·杆状病毒表达载体的构建策略 | 第18-21页 |
| ·杆状病毒表达载体系统的应用 | 第21-24页 |
| ·立题依据和研究意义 | 第24-26页 |
| 2 实验材料和方法 | 第26-46页 |
| ·实验材料 | 第26-29页 |
| ·质粒、菌株、酶、试剂 | 第26页 |
| ·培养细胞以及免疫动物 | 第26-27页 |
| ·引物 | 第27页 |
| ·主要仪器 | 第27-28页 |
| ·溶液的配制 | 第28-29页 |
| ·分子生物学试验方法[88] | 第29-34页 |
| ·质粒的提取 | 第29-30页 |
| ·限制性酶消化 | 第30-31页 |
| ·PCR 反应常规体系 | 第31页 |
| ·DNA 片段回收（参照AxyPrep DNA 凝胶回收试剂盒） | 第31-32页 |
| ·DNA 片段和载体的连接 | 第32-33页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第33-34页 |
| ·质粒DNA 的转化 | 第34页 |
| ·菌种的保存 | 第34页 |
| ·Bac-Bac 技术 | 第34-35页 |
| ·转座 | 第34页 |
| ·重组Bacmid DNA 的提取 | 第34-35页 |
| ·昆虫细胞培养实验技术 | 第35-39页 |
| ·培养细胞的玻璃器皿的清洗与消毒 | 第35页 |
| ·细胞培养基的配制（以Grace 为例） | 第35-36页 |
| ·细胞传代培养 | 第36页 |
| ·细胞计数 | 第36-37页 |
| ·细胞转染（脂质体转染） | 第37-38页 |
| ·病毒的增殖 | 第38页 |
| ·病毒的滴度测定[89] | 第38-39页 |
| ·蛋白质分析技术 | 第39-46页 |
| ·总蛋白含量的测定和标准曲线的绘制 | 第39页 |
| ·SDS－PAGE 不连续垂直板电泳 | 第39-41页 |
| ·多克隆EGFP 兔抗体的制备 | 第41-42页 |
| ·荧光蛋白标准曲线的绘制 | 第42-43页 |
| ·Western Blot（免疫印记） | 第43-46页 |
| 3 结果和分析 | 第46-74页 |
| ·基因克隆 | 第46-48页 |
| ·HgS 和SgH 目的基因的扩增 | 第46页 |
| ·HgS 和SgH 基因的T 载体克隆及方向的鉴定 | 第46-48页 |
| ·转移载体的构建 | 第48-51页 |
| ·单拷贝转移载体的构建 | 第48-49页 |
| ·多拷贝转移载体的构建 | 第49-51页 |
| ·含不同gfp 拷贝数的重组杆状病毒穿梭载体的构建 | 第51-53页 |
| ·Tn7 重组获得三个重组杆状病毒穿梭载体pAcMultiBac-p10-gfp 、pAcMultiBac-ph-gfp 和pAcMultiBac-2p10-2ph-49fp | 第51页 |
| ·Loxp 位点特异性重组获重组杆状病毒穿梭载体pAcMultiBac-p10-ph-29fp | 第51-52页 |
| ·Tn7 和 Loxp 位点重组获得重组杆状病毒病毒穿梭载体pAcMultiBac-p10-2ph-39fp 和pAcMultiBac-2p10-ph-39fpp，AcMultiBac-3p10-3ph-6 | 第52-53页 |
| ·多克隆EGFP 兔抗体的制备 | 第53-56页 |
| ·egfp 目的基因的扩增 | 第53页 |
| ·pet32a-egfp 载体的构建及验证 | 第53-54页 |
| ·目的蛋白EGFP 的表达 | 第54页 |
| ·透析袋电洗脱回收目的蛋白 | 第54-55页 |
| ·Western Blot 检测EGFP 兔抗体的表达 | 第55-56页 |
| ·重组杆状病毒介导的不同拷贝数目的GFP 表达与检测 | 第56-74页 |
| ·细胞转染及病毒扩增 | 第56-57页 |
| ·病毒滴度测定结果 | 第57-61页 |
| ·总蛋白标准曲线和荧光蛋白标准曲线的绘制 | 第61-63页 |
| ·Western Blot 结果 | 第63-64页 |
| ·相同拷贝数不同启动子控制下GFP 的表达水平的比较 | 第64-67页 |
| ·不同拷贝数gfp 重组病毒的表达水平的比较 | 第67-74页 |
| 4 讨论 | 第74-78页 |
| 结论 | 第78-80页 |
| 参考文献 | 第80-86页 |
| 附录 | 第86-88页 |
| 致谢 | 第88-90页 |
| 攻读学位期间发表论文目录 | 第90-91页 |
