| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-18页 |
| 第一章 绪论 | 第18-34页 |
| ·大豆异黄酮-染料木甙 | 第18-22页 |
| ·染料木甙的基本结构 | 第18-19页 |
| ·染料木甙的理化性质 | 第19页 |
| ·大豆异黄酮的生理功能及应用 | 第19-20页 |
| ·大豆异黄酮的生产来源 | 第20-22页 |
| ·UDP-葡萄糖基转移酶（UGTs） | 第22-26页 |
| ·UDP 葡萄糖转移酶-UGT1 | 第23-24页 |
| ·UDP 葡萄糖转移酶-UGT8 | 第24-25页 |
| ·UDP 葡萄糖基转移酶结构与功能的关系 | 第25-26页 |
| ·枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）表达系统 | 第26-28页 |
| ·枯草芽孢杆菌表达系统的优点 | 第27页 |
| ·枯草芽孢杆菌表达系统的缺点 | 第27页 |
| ·pHT 载体 | 第27-28页 |
| ·大肠杆菌（Escherichia coli）表达载体 | 第28-30页 |
| ·非融合表达载体 | 第28-29页 |
| ·融合表达载体 | 第29页 |
| ·分泌型表达载体 | 第29-30页 |
| ·研究的背景及思路 | 第30-34页 |
| ·研究背景 | 第30-32页 |
| ·研究目的及意义 | 第32-34页 |
| 第二章 基因工程菌 pHT43-GmIF7GT/WB600 和 pHT43-BcGT-1/WB600的构建 | 第34-56页 |
| ·引言 | 第34-35页 |
| ·实验材料 | 第35-36页 |
| ·菌株和质粒 | 第35页 |
| ·仪器、试剂、试剂盒和工具酶 | 第35页 |
| ·PCR 引物 | 第35-36页 |
| ·培养基 | 第36页 |
| ·实验方法 | 第36-45页 |
| ·豆芽 RNA 的提取 | 第36-37页 |
| ·豆芽 RNA 反转录合成 cDNA | 第37-38页 |
| ·ATCC 10987 菌种基因组的获得 | 第38-39页 |
| ·GmIF7GT 基因的扩增 | 第39-40页 |
| ·BcGT-1 基因的扩增 | 第40页 |
| ·pHT43 质粒的提取 | 第40-41页 |
| ·目的基因及载体的酶切 | 第41页 |
| ·目的基因和载体的连接 | 第41-42页 |
| ·pHT43-GmIF7GT 和 pHT43-BcGT-1 重组质粒的构建及验证 | 第42-44页 |
| ·基因工程菌 pHT43-GmIF7GT/WB600 和 pHT43-BcGT-1/WB600 的构建及验证 | 第44-45页 |
| ·实验结果与讨论 | 第45-53页 |
| ·豆芽 RNA 提取的 PCR 验证 | 第45-46页 |
| ·GmIF7GT 基因 PCR 扩增 | 第46页 |
| ·BcGT-1 基因 PCR 扩增 | 第46-47页 |
| ·pHT43 质粒的提取验证 | 第47-48页 |
| ·目的基因及载体的酶切后验证 | 第48-49页 |
| ·pHT43-GmIF7GT 和 pHT43-BcGT-1 阳性克隆的筛选验证 | 第49-52页 |
| ·基因工程菌 pHT43-GmIF7GT/WB600 和 pHT43-BcGT-1/WB600 的构建验证 | 第52-53页 |
| ·本章小结 | 第53-56页 |
| 第三章 GmIF7GT 和 BcGT-1 在枯草芽孢杆菌表达系统中的诱导表达 | 第56-66页 |
| ·引言 | 第56页 |
| ·实验材料 | 第56-57页 |
| ·菌株和质粒 | 第56-57页 |
| ·仪器及试剂 | 第57页 |
| ·实验方法 | 第57-61页 |
| ·基因工程菌 pHT43-GmIF7GT/WB600 和 pHT43-BcGT-1/WB600 的培养与诱导 | 第57页 |
| ·发酵液上清蛋白浓缩 | 第57-58页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE） | 第58-60页 |
| ·粗酶液进行底物转化 | 第60-61页 |
| ·高效液相色谱（HPLC）检测反应产物 | 第61页 |
| ·液质联用（LC-MS）检测反应产物 | 第61页 |
| ·实验结果与讨论 | 第61-63页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳验证 | 第61-62页 |
| ·高效液相色谱验证 | 第62-63页 |
| ·液质联用验证 | 第63页 |
| ·本章小结 | 第63-66页 |
| 第四章 基因工程菌 pETDuet-1-BcGT-1/BL21 、pMAL-c2X-BcGT-1/BL21 、 pETDuet-1-GmIF7GT/BL21 和 pMAL-c2X-GmIF7GT/BL21 的构建 | 第66-82页 |
| ·引言 | 第66-67页 |
| ·实验材料 | 第67-69页 |
| ·菌株和质粒 | 第67-68页 |
| ·仪器、试剂、试剂盒和工具酶 | 第68页 |
| ·PCR 引物 | 第68页 |
| ·培养基 | 第68-69页 |
| ·实验方法 | 第69-76页 |
| ·BcGT-1 基因的扩增 | 第69-70页 |
| ·GmIF7GT 基因的扩增 | 第70-71页 |
| ·pETDuet-1 和 pMAL-c2X 质粒的提取 | 第71页 |
| ·目的基因及载体的酶切 | 第71页 |
| ·目的基因及载体的连接 | 第71-73页 |
| ·pETDuet-1-BcGT-1、pMAL-c2X-BcGT-1、pETDuet-1-GmIF7GT 和 pMAL-c2X-GmIF7GT 重组质粒的构建及验证 | 第73-75页 |
| ·基因工程菌 pETDuet-1-BcGT-1/BL21、pMAL-c2X-BcGT-1/BL21、pETDuet-1-GmIF7GT/BL21 和 pMAL-c2X-GmIF7GT/BL21 的构建及验证 | 第75-76页 |
| ·实验结果与讨论 | 第76-80页 |
| ·BcGT-1 基因 PCR 扩增 | 第76页 |
| ·GmIF7GT 基因 PCR 扩增 | 第76-77页 |
| ·pETDuet-1 和 pMAL-c2X 质粒的提取验证 | 第77-78页 |
| ·目的基因及载体的酶切后验证 | 第78页 |
| ·pETDuet-1-BcGT-1、pMAL-c2X-BcGT-1、pETDuet-1-GmIF7GT 和 pMAL-c2X-GmIF7GT 阳性克隆的筛选 | 第78-80页 |
| ·基因工程菌 pETDuet-1-BcGT-1/BL21、pMAL-c2X-BcGT-1/BL21、pETDuet-1-GmIF7GT/BL21 和 pMAL-c2X-GmIF7GT/BL21 的构建验证 | 第80页 |
| ·本章小结 | 第80-82页 |
| 第五章 GmIF7GT 和 BcGT-1 在大肠杆菌表达系统中的诱导表达 | 第82-100页 |
| ·引言 | 第82页 |
| ·实验材料 | 第82-83页 |
| ·菌株和质粒 | 第82-83页 |
| ·仪器及试剂 | 第83页 |
| ·实验方法 | 第83-86页 |
| ·基因工程菌 pETDuet-1-BcGT-1/BL21、pMAL-c2X-BcGT-1/BL21、pETDuet-1-GmIF7GT/BL21 和 pMAL-c2X-GmIF7GT/BL21 的培养与诱导 | 第83页 |
| ·大肠杆菌中蛋白提取 | 第83-84页 |
| ·总蛋白浓度的测定 | 第84-85页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE） | 第85页 |
| ·粗酶液进行底物转化 | 第85页 |
| ·高效液相色谱（HPLC）检测反应产物 | 第85页 |
| ·液质联用（LC-MS）检测反应产物 | 第85-86页 |
| ·实验结果与讨论 | 第86-98页 |
| ·生长曲线的测定 | 第86-88页 |
| ·总蛋白浓度 | 第88-90页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳验证 | 第90-91页 |
| ·高效液相色谱验证 | 第91-95页 |
| ·液质联用验证 | 第95-97页 |
| ·酶活力及转化率的计算 | 第97-98页 |
| ·本章小结 | 第98-100页 |
| 第六章 结论与展望 | 第100-102页 |
| ·结论 | 第100页 |
| ·展望 | 第100-102页 |
| 参考文献 | 第102-106页 |
| 附录 | 第106-110页 |
| 致谢 | 第110-112页 |
| 研究成果及发表的学术论文 | 第112-114页 |
| 作者与导师简介 | 第114-115页 |
| 附件 | 第115-116页 |
