| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-12页 |
| 第一章 前言 | 第12-16页 |
| 第二章 材料、试剂和仪器 | 第16-22页 |
| ·主要试剂 | 第16-17页 |
| ·细胞培养试剂 | 第16页 |
| ·细菌培养试剂 | 第16页 |
| ·克隆目的基因主要试剂 | 第16-17页 |
| ·Oligonucleotide pull-down 主要试剂 | 第17页 |
| ·Western blot 主要试剂 | 第17页 |
| ·细胞 | 第17页 |
| ·菌株 | 第17页 |
| ·质粒 | 第17-18页 |
| ·引物 | 第18-19页 |
| ·DNA 测序 | 第19页 |
| ·主要试剂的配制 | 第19-20页 |
| ·主要仪器 | 第20-22页 |
| 第三章 试验方法与步骤 | 第22-36页 |
| ·克隆目的基因构建载体 | 第22-28页 |
| ·采用Trizol 法提取细胞总RNA | 第22页 |
| ·细胞总RNA 完整性的鉴定 | 第22-23页 |
| ·逆转录合成cDNA 第一链 | 第23页 |
| ·PCR 扩增 | 第23-24页 |
| ·PCR 产物回收与纯化（离心柱法） | 第24-25页 |
| ·回收PCR 产物与载体进行连接反应 | 第25页 |
| ·克隆目的基因 | 第25-27页 |
| ·鉴定转化子 | 第27-28页 |
| ·测序 | 第28页 |
| ·MTT 法测定药物Nutlin-3 对细胞增殖的影响 | 第28页 |
| ·逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测相关基因的表达 | 第28-30页 |
| ·Trizol 法提取细胞总RNA | 第28-29页 |
| ·细胞总RNA 完整性的鉴定 | 第29页 |
| ·逆转录合成cDNA 第一链 | 第29页 |
| ·聚合酶链反应检测胶质瘤细胞系U87，A172和U251中p53及其靶基因MDM2、P21、BAX mRNA 表达水平的改变 | 第29-30页 |
| ·Western-blot 方法检测相关蛋白的表达 | 第30-33页 |
| ·总蛋白的提取 | 第30-31页 |
| ·考马斯亮蓝G250 法测定细胞蛋白浓度 | 第31页 |
| ·Western blot 具体步骤 | 第31-33页 |
| ·Oligonulceotide pull-down 实验 | 第33-34页 |
| ·细胞核蛋白提取 | 第33页 |
| ·生物素标记引物处理 | 第33页 |
| ·特异性p53 DNA 结合反应 | 第33-34页 |
| ·统计学分析 | 第34-36页 |
| 第四章 结果 | 第36-50页 |
| ·TP53 基因突变检测 | 第36-37页 |
| ·RT-PCR 扩增目的基因TP53 | 第36页 |
| ·重组质粒的PCR 鉴定 | 第36-37页 |
| ·TP53 基因突变测序图 | 第37页 |
| ·MTT 比色法分析药物对胶质瘤细胞增殖的影响 | 第37-43页 |
| ·MDM2 抑制剂Nutlin-3 对细胞增殖的影响 | 第37-40页 |
| ·PI3K 抑制剂LY294002 对细胞增殖的影响 | 第40-42页 |
| ·MDM2 抑制剂和PI3K 抑制剂联合应用对细胞增殖的影响 | 第42-43页 |
| ·RT-PCR 分析药物处理后TP53 及其靶基因mRNA 的表达 | 第43-46页 |
| ·Western-blot 检测p53 蛋白、多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶（PARP）和核增殖抗原（PCNA）用药前后量的变化 | 第46-48页 |
| ·特异性的p53 DNA 结合活性检测 | 第48-50页 |
| 结论 | 第50-52页 |
| 讨论 | 第52-54页 |
| 参考文献 | 第54-56页 |
| 文献综述 | 第56-66页 |
| 参考文献 | 第64-66页 |
| 附录 | 第66-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第68-69页 |
