| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 缩略词表 | 第9-12页 |
| 1 文献综述 | 第12-20页 |
| 1.1 基因编辑技术 | 第12-13页 |
| 1.2 锌指核酸酶(ZFNS)技术 | 第13页 |
| 1.3 转录激活样效应物核酸酶(TALENS)技术 | 第13-14页 |
| 1.4 CRISPR/Cas9 基因编辑技术 | 第14-18页 |
| 1.4.1 CRISPR/Cas9 技术的发展 | 第14页 |
| 1.4.2 CRISPR/Cas9 技术的结构 | 第14-15页 |
| 1.4.3 CRISPR/Cas9 技术的作用机制 | 第15-16页 |
| 1.4.4 CRISPR/Cas9 技术在植物上的应用 | 第16-17页 |
| 1.4.5 CRISPR/Cas9 技术发展现存在的不足 | 第17-18页 |
| 1.5 靶基因 | 第18页 |
| 1.6 原生质体瞬时转化 | 第18-19页 |
| 1.7 芥蓝介绍 | 第19页 |
| 1.8 研究目的及意义 | 第19-20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-24页 |
| 2.1 材料 | 第20页 |
| 2.2 菌株和质粒 | 第20页 |
| 2.3 试剂 | 第20页 |
| 2.4 培养基 | 第20页 |
| 2.5 引物设计 | 第20-21页 |
| 2.6 方法 | 第21-24页 |
| 2.6.1 CRISPR/Ca9 载体的构建 | 第21-22页 |
| 2.6.2 质粒的提取 | 第22页 |
| 2.6.3 原生质体的制备 | 第22页 |
| 2.6.4 芥蓝CRISPR/Cas9 瞬时转化 | 第22-23页 |
| 2.6.5 芥蓝原生质体基因组DNA的提取 | 第23页 |
| 2.6.6 芥蓝CRISPR/Cas9 瞬时转化体系诱导的突变检测 | 第23页 |
| 2.6.7 根癌农杆菌介导的遗传转化 | 第23-24页 |
| 2.6.8 转基因植株Hyg抗性基因检测 | 第24页 |
| 2.6.9 转基因植株突变检测及表型分析 | 第24页 |
| 3 结果与分析 | 第24-40页 |
| 3.1 芥蓝CRISPR/Cas9 瞬时转化体系的建立 | 第24-28页 |
| 3.1.1 Ba ZDS基因靶位点的选择及CRISPR/Cas9 载体的构建 | 第24-25页 |
| 3.1.2 瞬时转化BaZDS基因突变率统计 | 第25-26页 |
| 3.1.3 瞬时转化BaZDS基因突变情况分析 | 第26-27页 |
| 3.1.4 瞬时转化BaZDS基因突变类型分析 | 第27-28页 |
| 3.2 芥蓝单基因CRISPR/Cas9 稳定遗传体系的建立 | 第28-32页 |
| 3.2.1 稳定遗传BaZDS基因转化效率统计 | 第28-29页 |
| 3.2.2 稳定遗传BaZDS基因突变效率统计 | 第29-30页 |
| 3.2.3 稳定遗传BaZDS基因突变情况分析 | 第30-31页 |
| 3.2.4 稳定遗传BaZDS基因突变株类型分析 | 第31-32页 |
| 3.2.5 稳定遗传BaZDS基因突变株的表型 | 第32页 |
| 3.3 芥蓝多基因CRISPR/Cas9 稳定遗传体系的建立 | 第32-40页 |
| 3.3.1 Ba PDSs基因靶位点的选择及CRISPR/Cas9 载体的构建 | 第32-33页 |
| 3.3.2 稳定遗传BaPDSs基因转化效率统计 | 第33-34页 |
| 3.3.3 稳定遗传BaPDSs基因突变效率统计 | 第34-35页 |
| 3.3.4 稳定遗传BaPDSs基因突变情况分析 | 第35-37页 |
| 3.3.5 稳定遗传BaPDSs基因突变情况统计 | 第37页 |
| 3.3.6 稳定遗传BaPDSs基因突变类型分析 | 第37-38页 |
| 3.3.7 稳定遗传BaPDSs基因沉默的表型 | 第38-39页 |
| 3.3.8 稳定遗传BaPDSs基因脱靶效应分析 | 第39-40页 |
| 4 讨论 | 第40-45页 |
| 4.1 芥蓝CRISPR/Cas9 瞬时转化体系的建立 | 第40-41页 |
| 4.2 芥蓝单基因CRISPR/Cas9 稳定遗传体系的建立 | 第41-42页 |
| 4.3 芥蓝多基因CRISPR/Cas9 稳定遗传体系的建立 | 第42-45页 |
| 5 结论及展望 | 第45-47页 |
| 5.1 结论 | 第45-46页 |
| 5.2 展望 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
| 作者简历 | 第58-59页 |
