利用cDNA-AFLP技术分离木薯干旱胁迫响应相关基因
| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-11页 |
| 1 引言 | 第11-20页 |
| ·干旱胁迫与植物抗旱 | 第11-16页 |
| ·干旱胁迫对植物的影响 | 第11-13页 |
| ·生长抑制 | 第11页 |
| ·生物量的积累与分配 | 第11-12页 |
| ·气孔行为和光合作用 | 第12页 |
| ·活性氧氧化伤害 | 第12页 |
| ·呼吸作用异常 | 第12页 |
| ·物质代谢失调 | 第12页 |
| ·能量代谢失调 | 第12-13页 |
| ·植物干旱胁迫适应相关研究 | 第13-16页 |
| ·抗旱相关转录因子 | 第13页 |
| ·胁迫信号转导相关蛋白激酶 | 第13-14页 |
| ·功能蛋白和渗透调节因子 | 第14-16页 |
| ·木薯概述 | 第16-17页 |
| ·木薯概况 | 第16页 |
| ·木薯抗旱研究进展 | 第16-17页 |
| ·cDNA-AFLP技术 | 第17-19页 |
| ·cDNA-AFLP技术简介 | 第17-18页 |
| ·cDNA-AFLP技术的应用 | 第18-19页 |
| ·主要研究内容 | 第19页 |
| ·目的与意义 | 第19页 |
| ·技术路线 | 第19-20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-36页 |
| ·仪器设备 | 第20页 |
| ·实验材料培养与处理 | 第20-21页 |
| ·cDNA-AFLP分析 | 第21-28页 |
| ·总RNA的提取与检测 | 第21页 |
| ·器皿处理 | 第21页 |
| ·木薯叶片总RNA提取 | 第21页 |
| ·DNA酶消化 | 第21-23页 |
| ·DNA酶消化 | 第21-22页 |
| ·RNA质量检测 | 第22-23页 |
| ·双链cDNA的合成 | 第23-25页 |
| ·第一链cDNA的合成 | 第23页 |
| ·双链cDNA的合成 | 第23-24页 |
| ·双链cDNA的纯化 | 第24-25页 |
| ·双链cDNA的限制性双酶切 | 第25页 |
| ·双链cDNA的限制性双酶切产物与接头连接 | 第25-26页 |
| ·接头的退火 | 第25页 |
| ·接头的连接 | 第25-26页 |
| ·cDNA-AFLP预扩增 | 第26-27页 |
| ·cDNA-AFLP选择性扩增 | 第27-28页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳及银染显色 | 第28-29页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶的制备 | 第28页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第28-29页 |
| ·凝胶银染显色 | 第29页 |
| ·多态性片段的回收、纯化、测序 | 第29-32页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶差异条带DNA回收 | 第29-30页 |
| ·煮沸法 | 第29-30页 |
| ·直取法 | 第30页 |
| ·回收条带的二次PCR扩增 | 第30页 |
| ·二次扩增产物的纯化 | 第30页 |
| ·DNA的克隆 | 第30-31页 |
| ·转化 | 第31页 |
| ·阳性克隆鉴定 | 第31-32页 |
| ·测序 | 第32页 |
| ·差异表达序列的生物信息学分析 | 第32-33页 |
| ·两步法RT-PCR反应 | 第33-34页 |
| ·荧光定量PCR验证 | 第34-36页 |
| ·标准曲线的制作 | 第34-35页 |
| ·相对定量PCR反应 | 第35-36页 |
| 3 结果与分析 | 第36-53页 |
| ·木薯干旱胁迫处理结果 | 第36-37页 |
| ·干旱胁迫处理方法 | 第36页 |
| ·各采样时间点的植株表型 | 第36-37页 |
| ·总RNA的提取 | 第37-39页 |
| ·双链cDNA的合成 | 第39页 |
| ·cDNA-AFLP结果 | 第39-41页 |
| ·预扩增结果检测 | 第39页 |
| ·选择性扩增结果检测 | 第39-41页 |
| ·特异表达基因片段的回收及二次PCR扩增 | 第41-42页 |
| ·特异表达基因片段的克隆 | 第42页 |
| ·测序结果分析 | 第42-47页 |
| ·应答干旱胁迫逆境特异表达基因的功能分组 | 第47-50页 |
| ·RT-PCR结果分析 | 第50页 |
| ·荧光定量PCR结果分析 | 第50-53页 |
| 4 讨论 | 第53-63页 |
| ·干旱胁迫样品的处理和材料的选择 | 第53-54页 |
| ·关于cDNA-AFLP实验体系 | 第54-58页 |
| ·木薯RNA的提取 | 第54-55页 |
| ·关于酶切 | 第55页 |
| ·关于DNA片段分析 | 第55-56页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶DNA回收 | 第56-57页 |
| ·DNA片段克隆方法比较 | 第57-58页 |
| ·荧光定量PCR引物的设计 | 第58页 |
| ·木薯干旱胁迫响应差异表达条带的分析 | 第58-59页 |
| ·木薯干旱胁迫响应相关基因的生物学意义 | 第59-62页 |
| ·Ⅰ型表达的TDFs | 第59-60页 |
| ·Ⅱ型表达的TDFs | 第60页 |
| ·Ⅲ型表达的TDFs | 第60-61页 |
| ·Ⅳ型表达的TDFs | 第61-62页 |
| ·下一步工作 | 第62-63页 |
| 5 结论 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-71页 |
| 附录 | 第71-78页 |
| 附录一:缩略词表(Abbreviation) | 第71-72页 |
| 附录二:相关试剂的配制 | 第72-74页 |
| 附录三:18对TDFs的荧光定量引物 | 第74-75页 |
| 附录四:18个TDFs的荧光定量PCR分析结果 | 第75-78页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第78-79页 |
| 致谢 | 第79页 |
