| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 第1章 引言 | 第11-26页 |
| 1. 肿瘤细胞代谢的特点——Warburg效应 | 第11-17页 |
| ·肿瘤细胞的Warburg效应 | 第11-13页 |
| ·Warburg效应的调节 | 第13-17页 |
| 2. 硒蛋白P | 第17-19页 |
| ·硒蛋白 | 第17-18页 |
| ·硒蛋白P的分子结构 | 第18页 |
| ·硒蛋白P的功能 | 第18页 |
| ·SECIS(SElenoCysteine Insertion Sequence)功能元件 | 第18-19页 |
| 3. CCDC152(Coiled-coil Domain Containing Protein 152) | 第19-21页 |
| ·Coiled-coil Domains(结构域) | 第19-20页 |
| ·CCDC152 | 第20-21页 |
| 4. Natural Antisense Transcripts (NATs) | 第21-24页 |
| ·NATs的结构 | 第21-22页 |
| ·NATs的表达调控机制 | 第22-24页 |
| ·NATs在疾病发展中的作用 | 第24页 |
| 5. 本论文的研究意义 | 第24-26页 |
| 第2章 CCDC152调节硒蛋白P表达的NATs机制 | 第26-50页 |
| 1. 材料和试剂 | 第26-28页 |
| ·细胞 | 第26页 |
| ·主要试剂 | 第26-27页 |
| ·主要仪器 | 第27页 |
| ·主要试剂配制 | 第27-28页 |
| 2. 实验方法 | 第28-39页 |
| ·实验方案 | 第28-29页 |
| ·硒蛋白P、CCDC152基因的克隆及其表达、转录载体的构建 | 第29-30页 |
| ·RNA酶保护打点杂交实验 | 第30-34页 |
| ·Western Blot检测CCDC152对硒蛋白P的调节作用 | 第34-36页 |
| ·实时定量PCR方法分析各种硒蛋白在CCDC152细胞中的表达 | 第36-38页 |
| ·细胞甲状腺素脱碘酶-1(DIO1),甲状腺素(Thyronxin,T4)、三碘甲状腺原氨酸(Triiodothyronine,T3)含量的测定 | 第38页 |
| ·转录组差异表达基因深度分析(DEG分析) | 第38页 |
| ·统计学分析 | 第38-39页 |
| 3. 实验结果及分析 | 第39-48页 |
| ·CCDC152 3’-UTR与硒蛋白P基因形成尾对尾的天然反义转录 | 第39-40页 |
| ·CCDC152 3’-UTR的表达通过NAT机制抑制硒蛋白P的合成 | 第40-41页 |
| ·CCDC152抑制硒蛋白P的合成导致细胞内硒在硒蛋白的再分配 | 第41-42页 |
| ·DEG分析,数字表达谱分析 | 第42-47页 |
| ·结论 | 第47-48页 |
| 4. 讨论 | 第48-50页 |
| 第3章 CCDC152调节肿瘤细胞Warburg效应的机制 | 第50-58页 |
| 1. 材料和试剂 | 第50-51页 |
| ·细胞 | 第50页 |
| ·主要试剂 | 第50页 |
| ·主要仪器 | 第50-51页 |
| ·主要试剂的配制 | 第51页 |
| 2. 实验方法 | 第51-54页 |
| ·实验方案 | 第51页 |
| ·基因的克隆及其表达载体的构建 | 第51-52页 |
| ·细胞转染 | 第52页 |
| ·Warburg效应测定 | 第52页 |
| ·Real-time PCR检测mRNA水平基因的表达 | 第52-53页 |
| ·Western blot分析硒蛋白P、AMPKα、P-AMPKα的表达 | 第53页 |
| ·免疫组织化学法研究CCDC152在组织水平对硒蛋白P表达的影响 | 第53页 |
| ·油红-O脂类染色法研究CCDC152细胞内脂肪的积累 | 第53-54页 |
| ·统计学分析 | 第54页 |
| 3. 实验结果及分析 | 第54-56页 |
| ·CCDC152 3’-UTR的表达增强细胞的Warburg效应及脂肪堆积 | 第54-56页 |
| ·CCDC152在肿瘤组织中高表达 | 第56页 |
| ·结论 | 第56页 |
| 4. 讨论 | 第56-58页 |
| 第4章 CCDC152基因的表达调控 | 第58-68页 |
| 1. 材料和试剂 | 第58页 |
| ·细胞 | 第58页 |
| ·主要试剂 | 第58页 |
| ·主要仪器 | 第58页 |
| 2. 实验方法 | 第58-63页 |
| ·实验方案 | 第58-59页 |
| ·p53、CCDC152启动子、Smad2/3载体的构建 | 第59页 |
| ·细胞转染及处理 | 第59-60页 |
| ·荧光素酶报告基因检测 | 第60页 |
| ·CCDC152、p53和硒蛋白P基因在肿瘤组织的表达 | 第60-63页 |
| ·统计学分析 | 第63页 |
| 3. 实验结果及分析 | 第63-67页 |
| ·TGF-β和p53对CCDC152基因启动子活性的调控 | 第63-65页 |
| ·TGF-β和p53对内源性CCDC152的表达调控 | 第65-66页 |
| ·硒蛋白P、CCDC152、p53在胰腺癌中表达情况 | 第66-67页 |
| ·结论 | 第67页 |
| 4. 讨论 | 第67-68页 |
| 第5章 总结 | 第68-70页 |
| 参考文献 | 第70-84页 |
| 致谢 | 第84页 |
