产PUFAs转基因株的构建
| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 1 绪论 | 第11-32页 |
| ·多不饱和脂肪酸(PUFAs) | 第11-24页 |
| ·PUFAs的分类与功能 | 第11-13页 |
| ·PUFAs的生物资源 | 第13-15页 |
| ·PUFAs的生物合成途径 | 第15-18页 |
| ·PUFAs生物合成相关基因 | 第18-24页 |
| ·PUFAs的生产 | 第24-30页 |
| ·利用微生物发酵生产PUFAs的进展 | 第24-25页 |
| ·转基因生物生产PUFAs的研究进展 | 第25-30页 |
| ·PUFAs生产的未来方向 | 第30页 |
| ·本研究的内容及意义 | 第30-32页 |
| 2 产PUFAs重组酵母的构建 | 第32-70页 |
| ·材料 | 第32-34页 |
| ·材料、载体和菌种 | 第32-33页 |
| ·溶液及培养基的配制 | 第33-34页 |
| ·仪器设备 | 第34页 |
| ·方法 | 第34-59页 |
| ·总RNA的提取及cDNA第一链合成 | 第34-35页 |
| ·引物设计与目标基因cDNA序列的获得 | 第35-37页 |
| ·目的片段的克隆与测序 | 第37-40页 |
| ·酵母表达载体的构建 | 第40-49页 |
| ·表达载体对毕赤酵母的转化 | 第49-53页 |
| ·Southern杂交鉴定重组酵母中基因的拷贝数 | 第53-56页 |
| ·重组酵母的诱导表达 | 第56页 |
| ·诱导表达的mRNA的半定量检测 | 第56-58页 |
| ·重组酵母的脂肪酸分析 | 第58-59页 |
| ·结果 | 第59-68页 |
| ·目标基因的获得 | 第59-60页 |
| ·酵母表达载体的构建 | 第60-62页 |
| ·酵母转化子的筛选及鉴定 | 第62-64页 |
| ·半定量RT-PCR | 第64-65页 |
| ·脂肪酸分析 | 第65-68页 |
| ·讨论 | 第68-70页 |
| 3 产PUFAs植株的构建 | 第70-90页 |
| ·材料 | 第70-71页 |
| ·材料、载体和菌种 | 第70页 |
| ·溶液及培养基的配制 | 第70-71页 |
| ·仪器设备 | 第71页 |
| ·方法 | 第71-81页 |
| ·napin启动子的克隆 | 第71-72页 |
| ·目标基因的获得 | 第72-73页 |
| ·单价中间表达载体的构建 | 第73-74页 |
| ·三价种子特异表达载体的构建 | 第74-78页 |
| ·表达载体pC1303D6E6D5对农杆菌的转化 | 第78-79页 |
| ·三价表达载体对拟南芥及甘蓝型油菜的转化 | 第79-80页 |
| ·转基因植株的鉴定 | 第80-81页 |
| ·转基因拟南芥脂肪酸分析 | 第81页 |
| ·结果 | 第81-88页 |
| ·napin启动子的克隆与中间载体的构建 | 第81-83页 |
| ·三价载体的构建 | 第83-85页 |
| ·对拟南芥及甘蓝型油菜的转化 | 第85-86页 |
| ·转基因植株的鉴定 | 第86-87页 |
| ·转基因拟南芥的脂肪酸分析 | 第87-88页 |
| ·讨论 | 第88-90页 |
| 4 总结与展望 | 第90-92页 |
| ·总结 | 第90-91页 |
| ·本论文的创新之处 | 第91页 |
| ·展望 | 第91-92页 |
| 致谢 | 第92-93页 |
| 参考文献 | 第93-108页 |
| 附录 攻读博士期间发表、拟发表文章和专利 | 第108页 |
