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β-arrestin2调控前列腺素受体EP2在芍药苷抑制成纤维样滑膜细胞异常增殖的作用

英文缩略词对照第1-11页
中文摘要第11-16页
英文摘要第16-23页
1 前言第23-26页
2 实验材料第26-30页
   ·动物第26页
   ·人滑膜组织第26页
   ·药物与试剂第26-29页
   ·仪器第29-30页
3 实验方法第30-44页
   ·FLS的分离培养第30-31页
     ·大鼠FLS的培养第30页
     ·人FLS的培养第30页
     ·人FLS鉴定第30-31页
   ·FLS增殖反应第31页
     ·不同浓度PGE_2刺激大鼠FLS不同时间增殖实验第31页
     ·不同浓度Butaprost刺激人FLS不同时间增殖实验第31页
     ·Pae对PGE_2诱导大鼠FLS增殖作用的检测第31页
   ·流式细胞术检测FLS细胞表面EP2的表达第31-32页
   ·β-arrestin2胞膜和总表达以及EP2、Gαs的总表达第32-34页
     ·细胞样品制备及蛋白质提取第32页
     ·蛋白质定量(Lowry法)第32-33页
     ·western blot的操作步骤第33-34页
   ·Gαs活性检测第34-36页
     ·样品制备第35页
     ·阳性和阴性对照的体外GTPγS/GDP蛋白上样第35页
     ·测定步骤第35-36页
   ·FLS内cAMP浓度检测第36-37页
   ·人FLS β-arrestin2和EP2 mRNA水平的检测第37-41页
     ·细胞总RNA的提取第37-38页
     ·RNA逆转成cDNA第38页
     ·人FLS β-arrestin2和EP2 mRNA水平的检测第38-41页
   ·激光共聚焦显微镜法检测人FLS中EP2受体胞膜表达第41页
   ·人FLS β-arrestin2的siRNA沉默第41-43页
     ·siRNA沉默方法第41-42页
     ·转染效率的鉴定第42页
     ·合成的siRNA序列第42-43页
   ·统计学分析第43-44页
4 结果第44-71页
   ·β-arrestin2对EP2受体内吞的调控及人FLS异常增殖的影响第44-57页
     ·人FLS的培养第44-45页
     ·人FLS的鉴定第45页
     ·Butaprost刺激人FLS异常增殖的浓度和时间依赖实验第45-46页
     ·Butaprost刺激人FLS后不同时间点EP2受体胞膜表达变化第46-48页
     ·Butaprost刺激人FLS后不同时间点EP2受体和β-arrestin2胞膜表达变化第48-49页
     ·Butaprost刺激人FLS后不同时间点EP2受体细胞膜分布情况第49-51页
     ·Butaprost刺激人FLS后不同时间点细胞内cAMP水平变化第51-52页
     ·人FLSβ-arrestin2基因沉默siRNA序列的选择和鉴定第52-54页
     ·β-arrestin2基因沉默对PGE_2诱导的人FLS细胞增殖能力的影响第54-55页
     ·β-arrestin2基因沉默人FLS在Butaprost刺激后不同时间点细胞膜EP2受体的变化情况第55-57页
   ·Pae通过调节β-arrestin2和EP2受体信号抑制FLS的异常增殖第57-71页
     ·PGE_2诱导大鼠FLS异常增殖的浓度和时间依赖性实验第57-58页
     ·Pae对PGE_2诱导的大鼠FLS增殖能力的影响第58页
     ·Pae对PGE_2诱导的大鼠FLS细胞内cAMP水平的影响第58-59页
     ·Pae对PGE_2作用下FLS细胞膜EP2受体表达的影响第59-61页
     ·Pae对PGE_2诱导的大鼠FLS细胞总β-arrestin2和EP2、细胞膜β-arrestin2表达的影响第61-62页
     ·Pae体外给药对PGE_2诱导人FLS增殖能力的影响第62-63页
     ·Pae对诱导人FLS中EP2mRNA水平的影响第63-65页
     ·Pae对PGE_2诱导人FLS总EP2和细胞膜EP2表达的影响第65-66页
     ·Pae对PGE_2诱导的人FLSβ-arrestin2 mRNA表达水平的影响第66-67页
     ·Pae对PGE_2诱导的人FLSβ-arrestin2总表达和细胞膜表达水平的影响第67-68页
     ·Pae对PGE_2诱导的人FLS Gas表达水平的影响第68-69页
     ·Pae对PGE_2诱导的人FLS Gas活性的影响第69-71页
5 讨论第71-77页
6 结论第77-79页
7 创新之处第79-80页
8 本研究的不足及今后工作展望第80-81页
9 参考文献第81-92页
附录第92-95页
致谢第95-97页
综述:β-arrestin在受体调控和信号转导中的作用第97-111页
 参考文献第105-111页

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