| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-11页 |
| 文献综述 | 第11-21页 |
| 第一章 布鲁氏菌诊断学的研究进展 | 第11-21页 |
| ·布鲁氏菌病的概述 | 第11-15页 |
| ·布鲁氏菌病诊断学研究进展 | 第15-17页 |
| ·细菌学诊断现状 | 第15页 |
| ·血清学诊断现状 | 第15页 |
| ·试管凝集试验（SAT） | 第15-16页 |
| ·虎红平板凝集试验(RBPT) | 第16页 |
| ·补体结合试验(CFr) | 第16页 |
| ·全乳环状试验(CYT) | 第16-17页 |
| ·酶联免疫吸附试验(ELISA) | 第17页 |
| ·分子生物学诊断现状 | 第17-19页 |
| ·布鲁氏菌外膜蛋白的研究进展 | 第19-20页 |
| ·展望 | 第20-21页 |
| 试验研究 | 第21-58页 |
| 第二章 布鲁氏菌多重PCR 检测方法的建立及应用 | 第21-29页 |
| ·材料 | 第21-22页 |
| ·菌株 | 第21页 |
| ·样品来源 | 第21页 |
| ·主要试剂 | 第21页 |
| ·主要仪器 | 第21-22页 |
| ·方法 | 第22-24页 |
| ·引物设计 | 第22页 |
| ·模板制备 | 第22-23页 |
| ·单引物PCR 扩增及鉴定 | 第23页 |
| ·单引物PCR 敏感性试验 | 第23页 |
| ·多重PCR 引物浓度优化组合及特异性和敏感性试验 | 第23页 |
| ·牛乳中感染布鲁氏菌模型的制备及DNA 的提取 | 第23-24页 |
| ·临床样品检测 | 第24页 |
| ·结果 | 第24-27页 |
| ·单引物PCR 扩增及鉴定结果 | 第24页 |
| ·单引物PCR 敏感性试验结果 | 第24页 |
| ·多重PCR 检测方法的建立 | 第24-25页 |
| ·多重PCR 特异性及敏感性试验结果 | 第25-26页 |
| ·PCR 稳定性试验结果 | 第26页 |
| ·临床样品检测结果 | 第26-27页 |
| ·三种基因产物测序结果 | 第27页 |
| ·讨论 | 第27-28页 |
| ·小结 | 第28-29页 |
| 第三章 布鲁氏菌外膜蛋白BP26、OMP10、OMP25 的表达纯化及鉴定 | 第29-47页 |
| ·材料 | 第29-33页 |
| ·菌株和质粒 | 第29页 |
| ·血清与抗体 | 第29页 |
| ·主要试剂与溶液配制 | 第29-33页 |
| ·主要仪器 | 第33页 |
| ·方法 | 第33-37页 |
| ·布鲁氏菌外膜蛋白bp26、omp10、omp25 基因的克隆 | 第33-35页 |
| ·布鲁氏菌重组原核表达载体的构建及鉴定 | 第35页 |
| ·重组蛋白bp26、omp10、omp25 的诱导表达 | 第35-36页 |
| ·重组融合蛋白的SDS-PAGE 检测 | 第36页 |
| ·重组蛋白表达产物的可溶性分析 | 第36页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第36-37页 |
| ·纯化蛋白的SDS-PAGE 检测 | 第37页 |
| ·纯化蛋白的Western blot 检测 | 第37页 |
| ·结果 | 第37-46页 |
| ·bp26、omp10、omp25 基因的PCR 扩增结果 | 第37-38页 |
| ·重组克隆质粒的PCR 和酶切鉴定结果 | 第38-40页 |
| ·基因序列测定分析 | 第40页 |
| ·重组原核表达质粒的酶切鉴定结果 | 第40-41页 |
| ·重组质粒测序分析 | 第41页 |
| ·表达产物的检测 | 第41-46页 |
| ·讨论 | 第46页 |
| ·小结 | 第46-47页 |
| 第四章 布鲁氏菌病间接ELISA 检测方法的建立及应用 | 第47-58页 |
| ·材料 | 第47-48页 |
| ·主要仪器、血清和试剂 | 第47页 |
| ·主要工作液的配制 | 第47-48页 |
| ·方法 | 第48-50页 |
| ·间接ELISA 的操作步骤 | 第48页 |
| ·ELISA 最佳工作条件的确定 | 第48-49页 |
| ·ELISA 方法的初步建立 | 第49页 |
| ·特异性实验 | 第49-50页 |
| ·敏感性实验 | 第50页 |
| ·重复性实验 | 第50页 |
| ·判定标准的确定 | 第50页 |
| ·临床样品的初步检测及对比性试验 | 第50页 |
| ·结果 | 第50-55页 |
| ·最佳抗原包被浓度和最佳血清稀释度的确定结果 | 第50页 |
| ·抗原最佳包被条件的确定结果 | 第50-51页 |
| ·酶标二抗最佳工作浓度的确定结果 | 第51页 |
| ·ELISA 阴阳性临界值的确定结果 | 第51-53页 |
| ·特异性试验结果 | 第53页 |
| ·敏感性试验结果 | 第53-54页 |
| ·重复性试验结果 | 第54页 |
| ·临床样品检测结果 | 第54-55页 |
| ·讨论 | 第55-57页 |
| ·小结 | 第57-58页 |
| 结论 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-66页 |
| 附录 | 第66-74页 |
| 缩略词表 | 第74-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
| 作者简介 | 第76页 |
