| 中文摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-14页 |
| 1 前言 | 第14-34页 |
| ·RNA 沉默 | 第14-18页 |
| ·RNA 沉默的发现 | 第14-15页 |
| ·RNA 沉默分子机制 | 第15-17页 |
| ·参与 RNA 沉默的相关酶及其它组分 | 第17-18页 |
| ·病毒编码的 RNA 沉默抑制子 | 第18-24页 |
| ·RNA 沉默抑制子的一般特征 | 第18-22页 |
| ·RNA 沉默抑制子的作用机制 | 第22-24页 |
| ·RNA 沉默的应用前景 | 第24-25页 |
| ·RNA 沉默在植物抗病毒育种中的应用 | 第24-25页 |
| ·RNA 沉默在植物基因功能分析中的应用 | 第25页 |
| ·RNA 沉默应用于基因治疗 | 第25页 |
| ·病毒编码的 RNA 沉默抑制子的应用 | 第25-27页 |
| ·病毒抑制子可用做 RNA 沉默途径的解析工具 | 第25-26页 |
| ·利用病毒沉默抑制子调节基因的表达水平 | 第26页 |
| ·利用病毒沉默抑制子提高外源蛋白的表达 | 第26-27页 |
| ·本研究涉及的几种沉默抑制蛋白 | 第27-32页 |
| ·双生病毒科 AC2、AC4 蛋白 | 第27-28页 |
| ·A 型禽类流感病毒 NS1 蛋白 | 第28-29页 |
| ·番茄丛矮病毒 p19 蛋白 | 第29-31页 |
| ·火鸡疱疹病毒编码的 HVT063 蛋白 | 第31-32页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第32-34页 |
| 2 材料与方法 | 第34-54页 |
| ·实验材料 | 第34-35页 |
| ·植物、动物材料与病毒 | 第34页 |
| ·菌株与质粒 | 第34页 |
| ·酶与各种生化试剂 | 第34页 |
| ·实验仪器 | 第34-35页 |
| ·引物 | 第35页 |
| ·实验方法 | 第35-54页 |
| ·TYLCV-SDTA 病毒的繁殖 | 第35-36页 |
| ·病毒基因组的提取 | 第36-37页 |
| ·基因的克隆和载体构建 | 第37-40页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备和转化 | 第40页 |
| ·大肠杆菌中质粒的提取 | 第40-42页 |
| ·阳性克隆筛选 | 第42页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备和转化 | 第42-43页 |
| ·农杆菌介导的瞬时表达系统及沉默现象观察 | 第43-44页 |
| ·蛋白的原核表达与纯化 | 第44-47页 |
| ·多克隆抗体制备及效价检测 | 第47-49页 |
| ·HVT063 蛋白的亚细胞定位 | 第49-51页 |
| ·AC2、NS1 及其各个突变体与 siRNA 互作研究 | 第51-54页 |
| 3 结果与分析 | 第54-76页 |
| ·候选沉默抑制蛋白沉默抑制功能鉴定 | 第54-58页 |
| ·TYLCV-SDTA 病毒 AC2、AC4 基因的扩增 | 第54-55页 |
| ·TYLCV-SDTA 病毒 AC2、AC4 基因的载体构建与鉴定 | 第55-56页 |
| ·MDV 病毒 MDV068 蛋白基因的扩增及载体构建 | 第56-57页 |
| ·AC2、AC4、MDV068 蛋白的沉默抑制功能鉴定 | 第57-58页 |
| ·AC2、NS1 及其各突变体表达纯化 | 第58-65页 |
| ·AC2 蛋白原核表达载体的构建及表达 | 第58-59页 |
| ·NS1 蛋白及 NS1 各突变体蛋白原核表达载体的构建及诱导表达 | 第59-62页 |
| ·AC2、NS1 及 NS1 各突变体蛋白纯化 | 第62-65页 |
| ·p19 蛋白的表达与抗体制备 | 第65-67页 |
| ·p19 蛋白原核表达载体的构建 | 第65-66页 |
| ·p19 蛋白的原核表达及 SDS-PAGE 电泳 | 第66-67页 |
| ·p19 蛋白的抗体制备 | 第67页 |
| ·AC2、NS1 及 NS1 各突变体与 siRNA 互作分析 | 第67-70页 |
| ·NS1 及 NS1 各突变体在植物细胞中抑制局部性沉默现象观察 | 第67-68页 |
| ·AC2、NS1 及 NS1 各突变体蛋白与 siRNA 结合实验 | 第68-70页 |
| ·HVT063 蛋白亚细胞定位及空间结构预测分析 | 第70-76页 |
| ·HVT063 与 GFP 蛋白融合载体的构建 | 第70-73页 |
| ·HVT063 融合蛋白在洋葱细胞中的定位 | 第73-74页 |
| ·HVT063 融合蛋白在本生烟细胞中的定位 | 第74-75页 |
| ·HVT063 蛋白空间结构预测 | 第75-76页 |
| 4 讨论 | 第76-81页 |
| ·来自番茄黄化曲叶病毒山东泰安分离物的 AC2 蛋白具有弱的 RNA 沉默抑制活性 | 第76页 |
| ·沉默抑制蛋白原核表达及纯化 | 第76-77页 |
| ·NS1 及其各突变体蛋白 siRNA 的结合能力分析 | 第77-78页 |
| ·HVT063 蛋白三维空间结构模拟与亚细胞定位 | 第78-80页 |
| ·p19 蛋白抗体的应用 | 第80-81页 |
| 5 结论 | 第81-82页 |
| 参考文献 | 第82-92页 |
| 致谢 | 第92-93页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第93页 |
