| 中文摘要 | 第1-6页 |
| 英文摘要 | 第6-12页 |
| 1 前言 | 第12-31页 |
| 1．1 研究目的及意义 | 第12-13页 |
| 1．2 农作物基因工程研究进展 | 第13-15页 |
| 1．2．1 农作物基因工程研究现状 | 第13页 |
| 1．2．2 转基因技术在防治病虫害上的应用 | 第13-15页 |
| 1．3 农杆菌载体介导转化法 | 第15-18页 |
| 1．3．1 根癌农杆菌和发根农杆菌 | 第15-16页 |
| 1．3．2 Ti质粒的结构和功能 | 第16页 |
| 1．3．3 Ri质粒 | 第16-18页 |
| 1．3．3．1 Ri质粒结构和功能 | 第16-17页 |
| 1．3．3．2 Vir区的基因结构与功能 | 第17页 |
| 1．3．3．3 侵染植株产生的病症过程 | 第17页 |
| 1．3．3．4 转化植株的特征 | 第17-18页 |
| 1．3．3．5 Ri质粒优于Ti质粒 | 第18页 |
| 1．4 抗植物病毒基因及其应用 | 第18-22页 |
| 1．4．1 外壳蛋白基因 | 第19页 |
| 1．4．2 病毒复制酶基因 | 第19页 |
| 1．4．3 核酶（ribozymes）基因 | 第19-20页 |
| 1，4．4 核糖体失活蛋白基因 | 第20页 |
| 1．4．5 毒蛋白基因 | 第20页 |
| 1．4．6 利用反义RNA阻断病毒复制 | 第20-21页 |
| 1．4．7 干扰素基因 | 第21页 |
| 1．4．8 利用作物自身编码的抗病基因 | 第21页 |
| 1．4．9 病毒卫星RNA利用 | 第21页 |
| 1．4．10 缺陷干扰颗粒的利用 | 第21-22页 |
| 1．5 芸苔属蔬菜转基因研究进展 | 第22-27页 |
| 1．5．1 目前芸苔属研究的几种植物基因及其应用 | 第22-25页 |
| 1．5．2 大白菜转基因研究现状 | 第25页 |
| 1．5．3 转基因技术应用及存在的问题 | 第25-27页 |
| 1．5．3．1 细胞工程育种 | 第25-26页 |
| 1．5．3．2 蔬菜转基因技术在应用上存在的问题 | 第26-27页 |
| 1．6 植物转基因工程潜在的应用问题 | 第27-31页 |
| 1．6．1 转基因食品安全性问题 | 第27-29页 |
| 1．6．2 植物基因工程与常规育种结合，保护农业资源遗传多样性 | 第29页 |
| 1．6．3 植物基因工程与病虫抗药性及环境生态平衡 | 第29-31页 |
| 2 材料与方法 | 第31-46页 |
| 2．1 材料 | 第31-32页 |
| 2．1．1 植物受体材料 | 第31页 |
| 2．1．2 载体质粒和菌种 | 第31页 |
| 2．1．2．1 载体质粒 | 第31页 |
| 2．1．2．2 菌种 | 第31页 |
| 2．1．3 主要试剂 | 第31-32页 |
| 2．1．4 主要仪器设备 | 第32页 |
| 2．2 试验方法 | 第32-45页 |
| 2．2．1 大白菜离体再生培养 | 第32页 |
| 2．2．2 大白菜遗传转化的研究 | 第32-38页 |
| 2．2．2．1 农杆菌转化 | 第32-35页 |
| 2．2．2．1．1 质粒DNA的提取 | 第33页 |
| 2．2．2．1．2 农杆菌感受态细胞的制备 | 第33-34页 |
| 2．2．2．1．3 冻融法转化农杆菌 | 第34页 |
| 2．2．2．1．4 转化子的检测 | 第34-35页 |
| 2．2．2．2 大白菜遗传转化 | 第35-38页 |
| 2．2．2．2．1 培养无菌苗 | 第35页 |
| 2．2．2．2．2 大白菜Km敏感性试验 | 第35页 |
| 2．2．2．2．3 共培养时间的确定 | 第35页 |
| 2．2．2．2．4 大白菜遗传转化中主要因素的探讨 | 第35-36页 |
| 2．2．2．2．5 试验所采取的正交表 | 第36页 |
| 2．2．2．2．6 不同菌株对转化的影响 | 第36页 |
| 2．2．2．2．7 大白菜子叶和下胚轴的遗传转化 | 第36-37页 |
| 2．2．2．2．8 花药的遗传转化 | 第37页 |
| 2．2．2．2．9 整体植株转化 | 第37-38页 |
| 2．2．3 转基因植株的检测 | 第38-44页 |
| 2．2．3．1 转基因植株的Km抗性检测 | 第38页 |
| 2．2．3．2 植物总DNA提取 | 第38-39页 |
| 2．2．3．3 转基因植株DNA的PCR检测 | 第39-40页 |
| 2．2．3．4 PCR-Southern杂交检测 | 第40-42页 |
| 2．2．3．4．1 质粒的DNA的回收 | 第40页 |
| 2．2．3．4．2 探针的标记 | 第40页 |
| 2．2．3．4．3 PCR-Southern杂交 | 第40-42页 |
| 2．2．3．5 转基因植株的RT-PCR检测 | 第42-44页 |
| 2．2．3．5．1 总RNA的提取 | 第42-43页 |
| 2．2．3．5．2 DNasel去除RNA样品中的基因组DNA污染 | 第43页 |
| 2．2．3．5．3 RT-PCR扩增 | 第43-44页 |
| 2．2．4 芜菁花叶病毒抗病性鉴定 | 第44-45页 |
| 2．2．4．1 毒源 | 第44页 |
| 2．2．4．2 鉴定方法 | 第44-45页 |
| 2．3 统计分析方法 | 第45-46页 |
| 3 结果与分析 | 第46-65页 |
| 3．1 植株再生体系的建立 | 第46-50页 |
| 3．1．1 不同激素浓度及配比对诱导不定芽的影响 | 第46-47页 |
| 3．1．2 不同外植体诱导不定芽的比较 | 第47页 |
| 3．1．3 基因型对不定芽诱导的影响 | 第47-48页 |
| 3．1．4 AgNO_3对诱导不定芽的影响 | 第48-49页 |
| 3．1．5 不同苗龄的子叶对不定芽产生的影响 | 第49页 |
| 3．1．6 IBA对大白菜不定芽诱导生根的影响 | 第49-50页 |
| 3．2 大白菜遗传转化体系的建立 | 第50-56页 |
| 3．2．1 冻融法转化农杆菌的转化子鉴定 | 第50页 |
| 3．2．1．1 Km抗性筛选 | 第50页 |
| 3．2．1．2 质粒DNA的提取 | 第50页 |
| 3．2．1．3 质粒DNA的PCR扩增 | 第50页 |
| 3．2．2 抑菌剂的选择和筛选剂的适宜浓度的确定 | 第50-54页 |
| 3．2．2．1 抑菌剂选择和浓度的确定 | 第50-51页 |
| 3．2．2．2 筛选剂适宜浓度的确定 | 第51-54页 |
| 3．2．3 影响遗传转化中主要因素探讨 | 第54-55页 |
| 3．2．4 共培养时间的确定 | 第55页 |
| 3．2．5 不同菌株对产生抗性芽的影响 | 第55-56页 |
| 3．3 转基因植株的检测 | 第56-62页 |
| 3．3．1 转基因植株当代（T_0）的检测 | 第56-60页 |
| 3．3．1．1 km抗性筛选 | 第56页 |
| 3．3．1．2 转基因植株当代（T_0代）的PCR检测 | 第56-59页 |
| 3．3．1．3 PCR-Southern杂交检测 | 第59页 |
| 3．3．1．4 RT-PCR扩增检测 | 第59-60页 |
| 3．3．2 转基因植株后代（T1）的检测 | 第60-62页 |
| 3．3．2．1 m抗性筛选 | 第60-61页 |
| 3．3．2．2 PCR扩增检测 | 第61页 |
| 3．3．3．3 PCR-Southern杂交检测 | 第61-62页 |
| 3．4 转基因T_1代TuMV抗性鉴定 | 第62-65页 |
| 4 讨论 | 第65-74页 |
| 5 结论 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-87页 |
| 致谢 | 第87-88页 |
| 图版说明 | 第88-91页 |
| 图版 | 第91-101页 |
| 附录 | 第101-102页 |
