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家蚕黄茧限性品种雌雄SAGE文库的构建及其差异表达基因的研究

摘要第1-6页
Abstract第6-13页
第一章 引言第13-29页
 1 家蚕性别遗传第13-17页
   ·家蚕性染色体第13页
   ·家蚕的性别决定第13-14页
   ·家蚕性别遗传方式第14-17页
   ·家蚕的性别差异与生产应用第17页
 2 家蚕茧色研究进展第17-19页
   ·家蚕天然彩色茧茧丝特性第18-19页
   ·家蚕黄茧色决定基因第19页
 3 高通量基因表达谱分析技术第19-26页
   ·微阵列(Microarray)技术第20页
   ·小RNA(miRNA)表达谱第20-21页
   ·基因表达序列分析(SAGE)技术第21-26页
   ·家蚕数据库第26页
 4 研究目标与研究策略第26-29页
第二章 基于EST 的家蚕基因电子表达谱平台的构建及应用第29-39页
 1 材料与方法第30-31页
   ·数据获取第30页
   ·apEST 软件包的构建第30页
   ·软件的应用第30页
   ·apEST 的验证第30-31页
   ·蛋白注解和基因本体论(GO)分类第31页
 2 结果与分析第31-37页
   ·家蚕EST 数据库的构建第31页
   ·EST 数据库分析第31-33页
   ·apEST 的应用第33-34页
   ·电子表达谱的比较与验证第34-37页
   ·蛋白质注释和GO 分类第37页
 3 结论与讨论第37-39页
第三章 常用实验材料第39-46页
 1 常用材料与试剂第39-42页
 2 主要仪器设备第42-43页
 3 基本实验方法第43-46页
第四章 家蚕茧色限性品种雌雄的丝腺 与中肠 LongSAGE 文库的构建与分析第46-68页
 第一节 SAGE 文库的构建第46-51页
  1 材料与方法第46-47页
   ·生物材料与仪器第46页
   ·SAGE 库的构建第46-47页
   ·SAGE 标签的注释第47页
   ·RT-PCR 验证第47页
   ·高表达标签的分析第47页
  2 结果与分析第47-50页
   ·SAGE 建库过程第47-48页
   ·家蚕Ysh品种雌雄LongSAGE 基本信息第48-49页
   ·RT-PCR 验证第49-50页
   ·高表达标签的分析第50页
  3 结论与讨论第50-51页
 第二节 家蚕LongSAGE 文库鉴定及延长标签的改进GLGI 方法第51-56页
  1 材料与方法第51-52页
   ·材料第51页
   ·方法第51-52页
  2 结果与分析第52-55页
   ·双链cDNA 合成及酶切第52页
   ·GLGI 扩增结果第52-53页
   ·序列分析第53-55页
  3 结论与讨论第55-56页
 第三节 SAGE 文库中差异表达基因的分析第56-67页
  1 材料与方法第56-57页
   ·差异表达标签的筛选与注释第56页
   ·差异表达基因的筛选第56页
   ·差异基因的Real-time PCR第56-57页
   ·功能注释分析第57页
  2 结果与分析第57-65页
   ·差异表达标签的注释结果第57页
   ·差异表达基因的比较第57-63页
   ·Real-time PCR的结果第63-65页
   ·基因功能注释分析第65页
  3 结论与讨论第65-67页
 第四节 结论与讨论第67-68页
第五章 家蚕幼虫雌雄表达差异的丝氨酸蛋白酶(SPs)与丝氨酸蛋白酶抑制剂(Serpins)研究第68-98页
 第一节 家蚕SPs 和Serpins 基因表达谱第70-76页
  1 材料与方法第70-71页
   ·生物材料第70页
   ·调查基因第70页
   ·电子表达谱查询第70-71页
   ·实验调查方法第71页
  2 结果与分析第71-74页
   ·电子表达谱第71-72页
   ·RT-PCR 表达谱结果第72-74页
  3 结论与讨论第74-76页
 第二节 昆虫激素处理对家蚕幼虫SPs 基因和Serpins 基因表达的影响第76-82页
  1 材料与方法第76-78页
   ·实验材料与试剂第76-77页
   ·处理方法第77页
   ·调查基因与方法第77-78页
  2 结果与分析第78-80页
   ·形态变化第78页
   ·基因表达变化第78-80页
  3 结论与讨论第80-82页
 第三节 限食处理对家蚕幼虫SPs 基因和Serpins 基因表达的影响第82-84页
  1 材料与方法第82页
   ·实验材料与处理方法第82页
   ·调查基因与方法第82页
  2 结果与分析第82页
  3 结论与讨论第82-84页
 第四节 家蚕幼虫总蛋白酶和胰蛋白酶活性的测定第84-88页
  1 材料与方法第84-85页
   ·实验材料第84页
   ·试剂第84页
   ·总蛋白提取及浓度测定第84页
   ·总蛋白酶活性的测定第84页
   ·胰蛋白酶活性测定第84-85页
  2 结果与分析第85-86页
   ·总蛋白酶活性的测定第85页
   ·胰蛋白酶活性的测定第85-86页
  3 结论与讨论第86-88页
 第五节 SPP 和 SPI1 在蛋白水平上的鉴定第88-96页
  1 材料与方法第88-91页
   ·抗体制备第88页
   ·免疫组化第88-90页
   ·Western blotting第90-91页
  2 结果与分析第91-94页
   ·HE 切片第91-92页
   ·免疫组化检测结果第92-93页
   ·western blotting 检测结果第93-94页
  3 结论与讨论第94-96页
 第六节 本章结论与讨论第96-98页
第六章 家蚕推测表皮蛋白基因(CPH45)和保幼激素甲基转移酶基因(JHAMT2)的研究第98-120页
 第一节 推测表皮蛋白基因(MCPH)的克隆和功能研究第98-112页
  1 材料与方法第99-101页
   ·实验材料第99-100页
   ·全长cDNA 克隆第100页
   ·CPH45 序列分析和蛋白结构分析第100-101页
   ·CPH45 表达谱分析第101页
   ·激素处理和限食处理后CPH45 的调查第101页
   ·CPH45 的siRNA 的研究第101页
  2 结果与分析第101-108页
   ·CPH45 基因全长cDNA 克隆第101-103页
   ·家蚕CPH45 基因的时空表达谱分析第103-104页
   ·昆虫激素处理后家蚕幼虫CPH45 基因的表达变化第104-105页
   ·限食处理后家蚕CPH45 基因的表达变化第105-106页
   ·CPH45 基因的干涉结果第106-108页
  3 结论与讨论第108-112页
 第二节 保幼激素甲基转移酶基因(JHAMT2)的克隆与研究第112-119页
  1 材料与方法第112-113页
   ·JHAMT2 的基因克隆第112-113页
   ·JHAMT2 序列分析和蛋白结构分析第113页
   ·JHAMT2 的表达谱和激素处理后调查第113页
   ·JHAMT 的通路研究第113页
  2 结果与分析第113-118页
   ·家蚕JHAMT2 基因全长cDNA 克隆第113-114页
   ·昆虫JHAMT 序列的同源性与进化树分析第114-115页
   ·JHAMT2 基因的时空表达谱分析第115-116页
   ·激素处理后JHAMT2 的表达变化第116-117页
   ·JHAMT 的路径分析第117-118页
  3 结论与讨论第118-119页
 第三节 讨论第119-120页
综合结论与创新点第120-122页
 1 综合结论第120-121页
 2 主要创新点第121页
 3 进一步要研究的内容第121-122页
附录第122-131页
 附件1 通过apEST 得到的MSG 和PSG 中的蛋白注释第122-123页
 附件2 30 个tag 的GLGI 测序结果第123-125页
 附件3 LongSAGE 文库中最高表达量的100 个标签注释第125-129页
 附件4 文中所用缩略语一览表第129-131页
参考文献第131-141页
攻读学位期间公开发表的论文、专利第141-142页
攻读学位期间主持和参与的科研项目第142-143页
致谢第143-144页

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