摘要 | 第1-6页 |
Abstract | 第6-13页 |
第一章 引言 | 第13-29页 |
1 家蚕性别遗传 | 第13-17页 |
·家蚕性染色体 | 第13页 |
·家蚕的性别决定 | 第13-14页 |
·家蚕性别遗传方式 | 第14-17页 |
·家蚕的性别差异与生产应用 | 第17页 |
2 家蚕茧色研究进展 | 第17-19页 |
·家蚕天然彩色茧茧丝特性 | 第18-19页 |
·家蚕黄茧色决定基因 | 第19页 |
3 高通量基因表达谱分析技术 | 第19-26页 |
·微阵列(Microarray)技术 | 第20页 |
·小RNA(miRNA)表达谱 | 第20-21页 |
·基因表达序列分析(SAGE)技术 | 第21-26页 |
·家蚕数据库 | 第26页 |
4 研究目标与研究策略 | 第26-29页 |
第二章 基于EST 的家蚕基因电子表达谱平台的构建及应用 | 第29-39页 |
1 材料与方法 | 第30-31页 |
·数据获取 | 第30页 |
·apEST 软件包的构建 | 第30页 |
·软件的应用 | 第30页 |
·apEST 的验证 | 第30-31页 |
·蛋白注解和基因本体论(GO)分类 | 第31页 |
2 结果与分析 | 第31-37页 |
·家蚕EST 数据库的构建 | 第31页 |
·EST 数据库分析 | 第31-33页 |
·apEST 的应用 | 第33-34页 |
·电子表达谱的比较与验证 | 第34-37页 |
·蛋白质注释和GO 分类 | 第37页 |
3 结论与讨论 | 第37-39页 |
第三章 常用实验材料 | 第39-46页 |
1 常用材料与试剂 | 第39-42页 |
2 主要仪器设备 | 第42-43页 |
3 基本实验方法 | 第43-46页 |
第四章 家蚕茧色限性品种雌雄的丝腺 与中肠 LongSAGE 文库的构建与分析 | 第46-68页 |
第一节 SAGE 文库的构建 | 第46-51页 |
1 材料与方法 | 第46-47页 |
·生物材料与仪器 | 第46页 |
·SAGE 库的构建 | 第46-47页 |
·SAGE 标签的注释 | 第47页 |
·RT-PCR 验证 | 第47页 |
·高表达标签的分析 | 第47页 |
2 结果与分析 | 第47-50页 |
·SAGE 建库过程 | 第47-48页 |
·家蚕Ysh品种雌雄LongSAGE 基本信息 | 第48-49页 |
·RT-PCR 验证 | 第49-50页 |
·高表达标签的分析 | 第50页 |
3 结论与讨论 | 第50-51页 |
第二节 家蚕LongSAGE 文库鉴定及延长标签的改进GLGI 方法 | 第51-56页 |
1 材料与方法 | 第51-52页 |
·材料 | 第51页 |
·方法 | 第51-52页 |
2 结果与分析 | 第52-55页 |
·双链cDNA 合成及酶切 | 第52页 |
·GLGI 扩增结果 | 第52-53页 |
·序列分析 | 第53-55页 |
3 结论与讨论 | 第55-56页 |
第三节 SAGE 文库中差异表达基因的分析 | 第56-67页 |
1 材料与方法 | 第56-57页 |
·差异表达标签的筛选与注释 | 第56页 |
·差异表达基因的筛选 | 第56页 |
·差异基因的Real-time PCR | 第56-57页 |
·功能注释分析 | 第57页 |
2 结果与分析 | 第57-65页 |
·差异表达标签的注释结果 | 第57页 |
·差异表达基因的比较 | 第57-63页 |
·Real-time PCR的结果 | 第63-65页 |
·基因功能注释分析 | 第65页 |
3 结论与讨论 | 第65-67页 |
第四节 结论与讨论 | 第67-68页 |
第五章 家蚕幼虫雌雄表达差异的丝氨酸蛋白酶(SPs)与丝氨酸蛋白酶抑制剂(Serpins)研究 | 第68-98页 |
第一节 家蚕SPs 和Serpins 基因表达谱 | 第70-76页 |
1 材料与方法 | 第70-71页 |
·生物材料 | 第70页 |
·调查基因 | 第70页 |
·电子表达谱查询 | 第70-71页 |
·实验调查方法 | 第71页 |
2 结果与分析 | 第71-74页 |
·电子表达谱 | 第71-72页 |
·RT-PCR 表达谱结果 | 第72-74页 |
3 结论与讨论 | 第74-76页 |
第二节 昆虫激素处理对家蚕幼虫SPs 基因和Serpins 基因表达的影响 | 第76-82页 |
1 材料与方法 | 第76-78页 |
·实验材料与试剂 | 第76-77页 |
·处理方法 | 第77页 |
·调查基因与方法 | 第77-78页 |
2 结果与分析 | 第78-80页 |
·形态变化 | 第78页 |
·基因表达变化 | 第78-80页 |
3 结论与讨论 | 第80-82页 |
第三节 限食处理对家蚕幼虫SPs 基因和Serpins 基因表达的影响 | 第82-84页 |
1 材料与方法 | 第82页 |
·实验材料与处理方法 | 第82页 |
·调查基因与方法 | 第82页 |
2 结果与分析 | 第82页 |
3 结论与讨论 | 第82-84页 |
第四节 家蚕幼虫总蛋白酶和胰蛋白酶活性的测定 | 第84-88页 |
1 材料与方法 | 第84-85页 |
·实验材料 | 第84页 |
·试剂 | 第84页 |
·总蛋白提取及浓度测定 | 第84页 |
·总蛋白酶活性的测定 | 第84页 |
·胰蛋白酶活性测定 | 第84-85页 |
2 结果与分析 | 第85-86页 |
·总蛋白酶活性的测定 | 第85页 |
·胰蛋白酶活性的测定 | 第85-86页 |
3 结论与讨论 | 第86-88页 |
第五节 SPP 和 SPI1 在蛋白水平上的鉴定 | 第88-96页 |
1 材料与方法 | 第88-91页 |
·抗体制备 | 第88页 |
·免疫组化 | 第88-90页 |
·Western blotting | 第90-91页 |
2 结果与分析 | 第91-94页 |
·HE 切片 | 第91-92页 |
·免疫组化检测结果 | 第92-93页 |
·western blotting 检测结果 | 第93-94页 |
3 结论与讨论 | 第94-96页 |
第六节 本章结论与讨论 | 第96-98页 |
第六章 家蚕推测表皮蛋白基因(CPH45)和保幼激素甲基转移酶基因(JHAMT2)的研究 | 第98-120页 |
第一节 推测表皮蛋白基因(MCPH)的克隆和功能研究 | 第98-112页 |
1 材料与方法 | 第99-101页 |
·实验材料 | 第99-100页 |
·全长cDNA 克隆 | 第100页 |
·CPH45 序列分析和蛋白结构分析 | 第100-101页 |
·CPH45 表达谱分析 | 第101页 |
·激素处理和限食处理后CPH45 的调查 | 第101页 |
·CPH45 的siRNA 的研究 | 第101页 |
2 结果与分析 | 第101-108页 |
·CPH45 基因全长cDNA 克隆 | 第101-103页 |
·家蚕CPH45 基因的时空表达谱分析 | 第103-104页 |
·昆虫激素处理后家蚕幼虫CPH45 基因的表达变化 | 第104-105页 |
·限食处理后家蚕CPH45 基因的表达变化 | 第105-106页 |
·CPH45 基因的干涉结果 | 第106-108页 |
3 结论与讨论 | 第108-112页 |
第二节 保幼激素甲基转移酶基因(JHAMT2)的克隆与研究 | 第112-119页 |
1 材料与方法 | 第112-113页 |
·JHAMT2 的基因克隆 | 第112-113页 |
·JHAMT2 序列分析和蛋白结构分析 | 第113页 |
·JHAMT2 的表达谱和激素处理后调查 | 第113页 |
·JHAMT 的通路研究 | 第113页 |
2 结果与分析 | 第113-118页 |
·家蚕JHAMT2 基因全长cDNA 克隆 | 第113-114页 |
·昆虫JHAMT 序列的同源性与进化树分析 | 第114-115页 |
·JHAMT2 基因的时空表达谱分析 | 第115-116页 |
·激素处理后JHAMT2 的表达变化 | 第116-117页 |
·JHAMT 的路径分析 | 第117-118页 |
3 结论与讨论 | 第118-119页 |
第三节 讨论 | 第119-120页 |
综合结论与创新点 | 第120-122页 |
1 综合结论 | 第120-121页 |
2 主要创新点 | 第121页 |
3 进一步要研究的内容 | 第121-122页 |
附录 | 第122-131页 |
附件1 通过apEST 得到的MSG 和PSG 中的蛋白注释 | 第122-123页 |
附件2 30 个tag 的GLGI 测序结果 | 第123-125页 |
附件3 LongSAGE 文库中最高表达量的100 个标签注释 | 第125-129页 |
附件4 文中所用缩略语一览表 | 第129-131页 |
参考文献 | 第131-141页 |
攻读学位期间公开发表的论文、专利 | 第141-142页 |
攻读学位期间主持和参与的科研项目 | 第142-143页 |
致谢 | 第143-144页 |