| 中文摘要 | 第1-9页 |
| 英文摘要 | 第9-11页 |
| 研究背景(第一部分) | 第11-17页 |
| 一、引言 | 第11-12页 |
| 二、Kv4钾离子通道的研究概况 | 第12-15页 |
| 三、木课题的研究意义 | 第15-17页 |
| 蛋白的表达与纯化(第一部分) | 第17-42页 |
| 一、引言 | 第17-19页 |
| 1.表达片段的设计思路: | 第17-18页 |
| 2.表达标签的选择与组合 | 第18页 |
| 3.表达及纯化实验流程示意图(图1-2-1): | 第18-19页 |
| 二、实验材料及仪器 | 第19-20页 |
| 1.菌株和载体: | 第19页 |
| 2.试剂和工具酶: | 第19页 |
| 3.仪器与服务: | 第19-20页 |
| 三、试验方法及流程 | 第20-27页 |
| 1.基因的亚克隆 | 第20-23页 |
| 2.蛋白的表达与纯化 | 第23-27页 |
| 四、实验结果及分析 | 第27-42页 |
| 1.Kv4.3-KChIP1复合体体外共转化的重组筛选: | 第28页 |
| 2.各种组合的表达和亲和纯化结果:(图1-2-3～图1-2-9) | 第28-33页 |
| ·L表达体系下复合体的大量纯化(图1-2-10～图1-2-25) | 第33-42页 |
| 晶体的生长与结构的解析(第一部分) | 第42-72页 |
| 一、Kv4.3N-KChIP1蛋白复合物的晶体生长 | 第42-47页 |
| 1.蛋白质晶体的概念与性质 | 第42页 |
| 2.蛋白质结晶的原理 | 第42-43页 |
| 3.蛋白质晶体的培养及优化 | 第43-46页 |
| 4.复合物晶体的衍射初试及晶体优化 | 第46-47页 |
| 二、Kv4.3N-KChIP1蛋白复合物结构测定与描述 | 第47-64页 |
| (一) 晶体衍射的原理 | 第47-51页 |
| (二) 晶体衍射及结构解析中的方法和应用 | 第51-58页 |
| (三) 结构模型的建立和修正 | 第58-60页 |
| (四) 实验过程 | 第60-64页 |
| 三、结构描述 | 第64-72页 |
| 1.复合物的整体结构 | 第64-68页 |
| 2.Kv4.3N分子与KChIP1分子结合区域的结构 | 第68-72页 |
| 复合物的结构与功能(第一部分) | 第72-82页 |
| 一、引言 | 第72页 |
| 二、实验思路 | 第72-73页 |
| 1.突变的设计思路 | 第72页 |
| 2.对Kv4.3的KBD结构域与KChIP1结合区的突变 | 第72-73页 |
| 3.对Kv4.3的T1结构域与KChIP1结合区的突变 | 第73页 |
| 三、实验方法与原理 | 第73-76页 |
| 1.定点突变法 | 第73-75页 |
| 2.检测蛋白间相互作用 | 第75-76页 |
| 四、实验结果与分析 | 第76-81页 |
| 1.对Kv4.3的KBD结构域的突变 | 第76-77页 |
| 2.对KChIP1疏水沟的突变 | 第77-78页 |
| 3.KChIP1稳定了Kv4.3N的四聚体结构 | 第78-79页 |
| 4.电生理学角度验证KChIP1与Kv4.3结合位点的功能 | 第79-81页 |
| 五、总结 | 第81-82页 |
| 参考文献(第一部分) | 第82-85页 |
| 研究背景(第二部分) | 第85-89页 |
| 一、宿主的免疫应答与病原微生物的逃逸 | 第85-86页 |
| 二、宿主免疫信号的主要分子通路 | 第86-87页 |
| 三、病原体对免疫信号的干扰与苏氨酸磷酸裂解酶的发现 | 第87-88页 |
| 四、本课题的研究意义 | 第88-89页 |
| 蛋白的表达纯化与晶体的生长(第二部分) | 第89-102页 |
| 一、引言 | 第89-91页 |
| 1.底物的选择与共结晶策略 | 第89-90页 |
| 2.表达策略与表达标签的选择 | 第90-91页 |
| 二、基因的亚克隆与蛋白的表达纯化和分析 | 第91-100页 |
| 1.基因的亚克隆 | 第91-92页 |
| 2.蛋白的表达纯化 | 第92-100页 |
| 三、蛋白的结晶 | 第100-102页 |
| 结构的解析与分析(第二部分) | 第102-112页 |
| 一、数据的收集与结构的解析 | 第102-105页 |
| 1.数据的收集处理 | 第102-103页 |
| 2.相位的确定和模型的构建和修正 | 第103-105页 |
| 3.结构模型参数 | 第105页 |
| 二、结构描述与分析 | 第105-112页 |
| 1.Spvc与底物肽段的整体结构 | 第105-108页 |
| 2.Spvc对底物肽段的识别特异性 | 第108-110页 |
| 3.Spvc在结合底物时活性中心的构象变化 | 第110-112页 |
| 磷酸苏氨酸裂解酶的酶活机制的研究(第二部分) | 第112-122页 |
| 一、引言 | 第112-114页 |
| 二、实验方法 | 第114页 |
| 1.蛋白的定点突变 | 第114页 |
| 2.SpvC酶活分析 | 第114页 |
| 三、实验结果及分析 | 第114-121页 |
| 1.活性中心的结构与机制分析 | 第114-119页 |
| 2.突变及生化分析 | 第119-121页 |
| 四、总结 | 第121-122页 |
| 参考文献(第二部分) | 第122-124页 |
| 附录(文章发表情况) | 第124-125页 |
| 致谢 | 第125页 |
