| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-9页 |
| 前言 | 第9-12页 |
| 第一部分 文献综述 | 第12-25页 |
| 第一节 SSCs研究进展 | 第12-19页 |
| 1 SSCs的起源 | 第12页 |
| 2 SSCs的表型标记 | 第12-14页 |
| 3 SSCs的应用 | 第14-16页 |
| 4 影响SSCs增殖的因素 | 第16-19页 |
| 第二节 Bmil基因研究进展 | 第19-23页 |
| 1 Broil的结构和作用原理 | 第19-20页 |
| 2 Broil对细胞增殖的影响 | 第20-21页 |
| 3 Bmil信号通路 | 第21-23页 |
| 第三节 Piwi基因研究进展 | 第23-25页 |
| 1 Piwi基因的结构 | 第23页 |
| 2 Piwi基因的功能 | 第23-24页 |
| 3 Piwi基因的表达 | 第24-25页 |
| 第二部分 SSCs自增殖分子机制研究 | 第25-94页 |
| 第一节 Bmil和Piwi基因的克隆及生物信息学分析 | 第25-42页 |
| 1 材料 | 第25-26页 |
| 2 方法 | 第26-32页 |
| 3 结果 | 第32-39页 |
| ·基因的克隆及定位分析 | 第32-33页 |
| ·同源性分析及系统进化树的构建 | 第33页 |
| ·信号肽剪切位点及潜在修饰位点分析 | 第33-34页 |
| ·基本理化性质分析及空间结构预测 | 第34-38页 |
| ·亚细胞定位预测 | 第38-39页 |
| ·序列提交 | 第39页 |
| 4 讨论 | 第39-42页 |
| ·构建系统进化树的意义 | 第39-40页 |
| ·PROSITE数据库在生物信息学分析中的作用 | 第40页 |
| ·生物信息学分析的意义 | 第40-42页 |
| 第二节 BMI1原核表达及抗体制备 | 第42-58页 |
| 1 材料 | 第42-43页 |
| 2 方法 | 第43-49页 |
| 3 结果 | 第49-52页 |
| ·重组原核表达载体的鉴定 | 第49页 |
| ·BMI1表达的检测 | 第49-50页 |
| ·表达条件的优化 | 第50页 |
| ·包涵体的制备与纯化 | 第50页 |
| ·多抗血清效价的检测 | 第50页 |
| ·多克隆抗体的特异性检测 | 第50-52页 |
| 4 讨论 | 第52-58页 |
| ·原核表达系统的选择 | 第52-53页 |
| ·影响表达的因素 | 第53-54页 |
| ·包涵体纯化的方法 | 第54-55页 |
| ·多抗血清的制备的原理 | 第55-56页 |
| ·检测多克隆抗体的手段 | 第56-58页 |
| 第三节 BMI1的表达研究 | 第58-71页 |
| 1 材料 | 第58-59页 |
| 2 方法 | 第59-65页 |
| 3 结果 | 第65-69页 |
| ·睾丸组织切片的HE染色及原位杂交检测结果 | 第65页 |
| ·BMI1的免疫组织化学检测结果 | 第65页 |
| ·BMI1与Thy-1的免疫荧光共定位检测结果 | 第65页 |
| ·睾丸上皮细胞的流式分选结果 | 第65页 |
| ·BMI1在不同细胞系及器官中表达的检测结果 | 第65-69页 |
| 4 讨论 | 第69-71页 |
| ·SSCs的表面分子标记 | 第69页 |
| ·小鼠睾丸固定条件的优化 | 第69-70页 |
| ·Bmil基因在其它细胞中的表达 | 第70页 |
| ·Bmil基因表达于SSCs | 第70-71页 |
| 第四节 Bmil基因对SSCs体外增殖的影响 | 第71-87页 |
| 1 材料 | 第71-72页 |
| 2 方去 | 第72-77页 |
| 3 结果 | 第77-82页 |
| ·RNAi载体的构建及筛选 | 第77页 |
| ·转染SSCs后BMI1表达的检测 | 第77页 |
| ·G418对STO的最小致死剂量 | 第77页 |
| ·Bmil基因对SSCs增殖的影响 | 第77-82页 |
| 4 讨论 | 第82-87页 |
| ·睾丸生精上皮细胞的解离方法 | 第82-83页 |
| ·不同培养液的对SSCs增殖的影响 | 第83页 |
| ·饲养层细胞的必要性 | 第83-84页 |
| ·RNAi的原理 | 第84-85页 |
| ·SSCs体外转染的适宜方法 | 第85页 |
| ·Bmil基因对SSCs体外增殖的调控 | 第85-87页 |
| 第五节 Piwi基因对SSCs体外增殖的影响 | 第87-94页 |
| 1 材料 | 第87页 |
| 2 方法 | 第87-92页 |
| 3 结果 | 第92-93页 |
| ·Piwi基因真核表达载体的鉴定 | 第92页 |
| ·Piwi基因在STO细胞中表达的检测 | 第92页 |
| ·Piwi基因在不同小鼠器官及细胞群中的表达检测结果 | 第92页 |
| ·Piwi基因对SSCs体外增殖的影响 | 第92-93页 |
| 4 讨论 | 第93-94页 |
| ·Piwi基因在睾丸中的表达 | 第93页 |
| ·Piwi基因的亚细胞定位 | 第93页 |
| ·Piwi基因对SSCs的体外增殖有促进作用 | 第93-94页 |
| 结论 | 第94-95页 |
| 参考文献 | 第95-106页 |
| 致谢 | 第106-107页 |
| 攻读博士期间撰写的论文 | 第107-108页 |
| 发表论文 | 第108-114页 |