人工栽培黄花蒿青蒿素含量的株间差异及遗传多态性分析
| 摘要 | 第1-5页 |
| 英文摘要 | 第5-13页 |
| 第一部分 文献综述 | 第13-37页 |
| 1 黄花蒿的生物学特性与青蒿素含量 | 第13-15页 |
| ·黄花蒿的生物学特性 | 第13-14页 |
| ·黄花蒿的遗传多样性与青蒿素含量 | 第14-15页 |
| 2 青蒿素的理化性质 | 第15-16页 |
| ·分子结构 | 第15页 |
| ·青蒿素理化性质 | 第15-16页 |
| ·过氧基团反应 | 第15页 |
| ·显色反应 | 第15-16页 |
| ·酸碱反应 | 第16页 |
| 3 青蒿素的检测方法 | 第16-18页 |
| ·定性分析 | 第16-17页 |
| ·定量分析 | 第17-18页 |
| ·含量较高的定量分析 | 第17页 |
| ·含量较低的定量分析 | 第17-18页 |
| 4 青蒿素的生物合成途径研究 | 第18-23页 |
| ·青蒿素的生物学合成途径 | 第18-19页 |
| ·青蒿素生物合成途径中的已知关键酶 | 第19-21页 |
| ·逆境对青蒿素合成的影响 | 第21-23页 |
| 5 青蒿素及其衍生物的药理作用研究 | 第23-27页 |
| ·最早发现并正在广泛加以应用的抗疟疾作用 | 第24页 |
| ·具有重大开发应用前景的抗肿瘤作用 | 第24-26页 |
| ·已经受到广泛关注的治疗寄生虫病 | 第26页 |
| ·其它重要作用 | 第26-27页 |
| 6. 植物的人工诱变技术及其应用 | 第27-30页 |
| ·人工诱变的种类 | 第27-28页 |
| ·各种诱变方法的比较与诱变剂的选择 | 第28页 |
| ·EMS 作用机制 | 第28-30页 |
| ·EMS 诱变的特点 | 第30页 |
| ·人工诱变育种技术的成功应用与展望 | 第30页 |
| 7 DNA 多态性分析及技术进展 | 第30-36页 |
| ·DNA 多态性分析的意义 | 第30-31页 |
| ·常用的DNA 多态性分子标记 | 第31-35页 |
| ·RFLP 标记 | 第32页 |
| ·RAPD 标记 | 第32-33页 |
| ·SSR 标记 | 第33页 |
| ·STS 标记 | 第33-34页 |
| ·SCAR 标记 | 第34页 |
| ·AFLP 标记 | 第34-35页 |
| ·针对 AFLP 标记方法局限性的技术改进 | 第35-36页 |
| ·Sau-PCR | 第35页 |
| ·TE-AFLP | 第35-36页 |
| ·PstI-AFLP | 第36页 |
| 8 本课题的研究目的与意义 | 第36-37页 |
| 第二部分 研究内容与实验方案 | 第37-71页 |
| 第一章 黄花蒿的材料培植及诱变 | 第37-39页 |
| 1 播种育苗 | 第37页 |
| 2 幼苗移栽 | 第37页 |
| 3 田间管理 | 第37页 |
| 4 样品采集与处理 | 第37-38页 |
| 5 对黄花蒿种子的诱变处理 | 第38-39页 |
| ·诱变材料 | 第38页 |
| ·诱变剂 | 第38页 |
| ·处理方法 | 第38页 |
| ·处理结果 | 第38-39页 |
| 第二章 黄花蒿单株小样的青蒿素含量检测 | 第39-46页 |
| 1 材料、设备 | 第39-40页 |
| ·实验材料 | 第39页 |
| ·主要试剂 | 第39页 |
| ·仪器设备 | 第39-40页 |
| 2 实验方法 | 第40-42页 |
| ·青蒿素含量标准曲线的制备 | 第40-41页 |
| ·仅用 1g 黄花蒿干叶的小样分析条件优化 | 第41-42页 |
| ·提取工艺 | 第41页 |
| ·样液的处理 | 第41页 |
| ·样品溶液的测定 | 第41-42页 |
| ·不同制样方法的对比实验 | 第42页 |
| 3 优化工艺可靠性实验 | 第42-43页 |
| ·仪器精准度测验 | 第42页 |
| ·稳定性试验 | 第42页 |
| ·重现性试验 | 第42-43页 |
| 4 实验结果 | 第43-44页 |
| ·不同制样方法对青蒿素含量测量影响 | 第43页 |
| ·黄花蒿干叶中青蒿素含量测定的优化方法 | 第43-44页 |
| ·黄花蒿单株小量样品的青蒿素含量测定 | 第44页 |
| 5 讨论 | 第44-46页 |
| 第三章 黄花蒿干样与鲜样的DNA 提取方法比较 | 第46-52页 |
| 1 材料、设备及分析方法 | 第46页 |
| ·实验材料 | 第46页 |
| ·主要试剂 | 第46页 |
| ·仪器设备 | 第46页 |
| 2 实验方法 | 第46-49页 |
| ·黄花蒿基因组 DNA 的提取 | 第46-49页 |
| ·干样的SDS 提取法 | 第46-47页 |
| ·改良的CTAB 提取法 | 第47-49页 |
| ·琼脂糖胶电泳检测 | 第49页 |
| 3 结果与分析 | 第49-50页 |
| ·不同 DNA 提取方法的结果比较 | 第49-50页 |
| 4 讨论 | 第50-52页 |
| 第四章 黄花蒿单株含量多态性的PCR 扩增 | 第52-71页 |
| 1 实验材料、设备 | 第52-53页 |
| ·实验材料 | 第52页 |
| ·主要试剂 | 第52-53页 |
| ·仪器设备 | 第53页 |
| 2 已知关键酶基因的PCR 引物设计与扩增 | 第53-56页 |
| ·引物设计 | 第53-55页 |
| ·倍半萜环化酶的引物设计 | 第53-54页 |
| ·二烯合酶的引物设计 | 第54页 |
| ·鲨烯合酶的引物设计 | 第54页 |
| ·8-epi-柏木脑醇合酶的引物设计 | 第54-55页 |
| ·扩增反应体系与程序 | 第55页 |
| ·扩增反应的体系 | 第55页 |
| ·扩增反应的程序 | 第55页 |
| ·PCR 产物的酶切与浓缩 | 第55-56页 |
| ·PCR 产物的酶切 | 第55页 |
| ·酶切产物的浓缩 | 第55-56页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第56页 |
| 3 逆境响应元件锚定的AFLP 扩增方法 | 第56-63页 |
| ·接头与引物的设计 | 第56-57页 |
| ·AFLP 接头的设计 | 第56页 |
| ·AFLP 选择性引物的设计 | 第56页 |
| ·逆境响应元件引物的设计 | 第56-57页 |
| ·扩增方案 | 第57-59页 |
| ·扩增方案可行性的实验验证与条件优化 | 第59-62页 |
| ·DNA 模板的酶切体系 | 第59页 |
| ·AFLP 接头的退火 | 第59-60页 |
| ·接头的连接 | 第60页 |
| ·LPA 与 CPA 短引物的分步预扩增 | 第60-61页 |
| ·SPA－1 选择性扩增可行性验证 | 第61页 |
| ·SPA－2 的选择性扩增可行性验证 | 第61-62页 |
| ·黄花蒿群体单株的 AFLP 扩增 | 第62页 |
| ·扩增产物的琼脂糖凝胶电泳 | 第62-63页 |
| 4 结果与分析 | 第63-68页 |
| ·关键酶基因的 PCR 结果 | 第63页 |
| ·PCR 产物的酶切结果 | 第63-64页 |
| ·AFLP 扩增方案的可行性的实验验证结果 | 第64-66页 |
| ·DNA 模板的酶切体系可行性验证结果 | 第64-65页 |
| ·+1 碱基的选择性扩增可行性验证结果 | 第65页 |
| ·+3 碱基的选择性扩增引物可行性验证 | 第65-66页 |
| ·黄花蒿群体单株的 AFLP 扩增结果 | 第66-68页 |
| 5 讨论 | 第68-71页 |
| 第三部分 课题总结 | 第71-73页 |
| 1 黄花蒿单株小样的青蒿素含量检测 | 第71-72页 |
| 2 黄花蒿不同青蒿素含量的遗传多态性分析 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-81页 |
| 致谢 | 第81-82页 |
| 附图 | 第82页 |
