| 中文摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-12页 |
| 目录 | 第12-16页 |
| 第一章 前言 | 第16-29页 |
| 1.Rhox基因簇简介 | 第16-18页 |
| ·同源异型框基因家族 | 第16页 |
| ·Rhox基因簇的发现 | 第16-17页 |
| ·Rhox基因簇的表达模式 | 第17-18页 |
| 2.Rhox5的研究进展 | 第18-21页 |
| ·Rhox5基因的发现及命名 | 第18页 |
| ·Rhox5基因的结构及其表达调控 | 第18-19页 |
| ·Rhox5基因的表达产物及表达模式 | 第19-21页 |
| 3.鞘脂激活蛋白原(prosaposin)的研究进展 | 第21-27页 |
| ·prosaposin基因及其选择性剪切 | 第21-22页 |
| ·prosaposin表达的时间和空间特异性 | 第22-23页 |
| ·prosaposin蛋白 | 第23-24页 |
| ·prosaposin的生理功能 | 第24-27页 |
| 4.研究目的、研究意义及创新点 | 第27-29页 |
| ·研究目的 | 第27页 |
| ·研究意义及创新点 | 第27-29页 |
| 第二章 实验仪器与材料 | 第29-38页 |
| 1.主要仪器 | 第29-30页 |
| 2.实验材料 | 第30-38页 |
| ·细胞、菌种及质粒 | 第30-31页 |
| ·主要试剂 | 第31-32页 |
| ·主要溶液的配制 | 第32-38页 |
| 第三章 Rhox5的原核表达、抗体制备及其亚细胞定位分析 | 第38-61页 |
| 1.前言 | 第38-39页 |
| 2.实验方法 | 第39-51页 |
| ·pET22b-Rhox5原核表达载体的构建 | 第39-43页 |
| ·Rhox5-6His重组蛋白的诱导表达和鉴定 | 第43-45页 |
| ·Rhox5-6His重组蛋白的纯化 | 第45-47页 |
| ·Rhox5多克隆抗血清的制备及其特异性检测 | 第47-50页 |
| ·小鼠Rhox5蛋白亚细胞定位分析 | 第50-51页 |
| 3.实验结果及讨论 | 第51-60页 |
| ·重组质粒pET22b-Rhox5的构建与鉴定 | 第51-52页 |
| ·Rhox5-6His融合蛋白的诱导表达 | 第52-56页 |
| ·Rhox5-6His重组蛋白的纯化 | 第56-58页 |
| ·Rhox5多克隆抗血清的鉴定 | 第58-59页 |
| ·Rhox5蛋白的亚细胞定位 | 第59-60页 |
| 4.小结 | 第60-61页 |
| 第四章 Rhox5蛋白可以直接与Prosaposin相互作用 | 第61-93页 |
| 1.前言 | 第61页 |
| 2.实验方法 | 第61-78页 |
| ·pGBKT7-1-14和pGADT7-Rhox5重组质粒的构建 | 第61-67页 |
| ·p6BKT7-Psap和pGADT7-Psap重组质粒的构建 | 第67-69页 |
| ·pcDNA-Rhox5-HA及pcDNA-Psap-Myc重组质粒的构建 | 第69-73页 |
| ·双向酵母双杂交实验鉴定蛋白质间的相互作用 | 第73-75页 |
| ·GST-pull down实验 | 第75-77页 |
| ·间接免疫荧光实验 | 第77页 |
| ·免疫共沉淀实验 | 第77-78页 |
| ·生物信息学方法 | 第78页 |
| 3 实验结果 | 第78-89页 |
| ·Rhox5蛋白与No-1-14在酵母细胞内可以相互作用 | 第78-81页 |
| ·Rhox5蛋白与No-1-14的物理性相互作用 | 第81-82页 |
| ·No.1-14为prosaposin蛋白的C末端 | 第82-83页 |
| ·Rhox5蛋白与prosaposin(without exon8)在酵母细胞内可以相互作用 | 第83-84页 |
| ·Rhox5蛋白与prosaposin(without exon8)的物理性相互作用 | 第84-85页 |
| ·Rhox5蛋白与prosaposin共定位于细胞核中 | 第85-87页 |
| ·哺乳动物细胞中Rhox5蛋白与prosaposin存在直接的相互作用 | 第87-89页 |
| 4 讨论 | 第89-93页 |
| 第五章 Rhox5与Prosaposin相互作用的关键结构 | 第93-127页 |
| 1.前言 | 第93页 |
| 2.实验方法 | 第93-103页 |
| ·pGBKT7-Psap(with exon8)和pGADT7-Psap(with exon8)重组质粒的构建 | 第93-96页 |
| ·PCR扩增不同prosaposin突变体 | 第96-100页 |
| ·PCR扩增不同Rhox5突变体 | 第100-101页 |
| ·酵母双杂交实验所需重组质粒的构建思路 | 第101页 |
| ·双向酵母双杂交实验 | 第101页 |
| ·GST-Rhox5 A和GST-Rhox5 B蛋白的诱导表达 | 第101-103页 |
| ·GST-pull down实验 | 第103页 |
| 3.实验结果 | 第103-119页 |
| ·Rhox5蛋白与prosaposin(with exon8)在酵母细胞内及体外的相互作用 | 第103-106页 |
| ·双向酵母双杂交实验检测与Rhox5蛋白结合的prosaposin的关键结构域 | 第106-113页 |
| ·双向酵母双杂交实验检测与prosaposin蛋白结合的Rhox5的关键结构域 | 第113-116页 |
| ·GST-Rhox5 A和GST-Rhox5 B的表达与纯化 | 第116-117页 |
| ·GST-pull down证实Rhox5蛋白与prosaposin相互作用的关键结构 | 第117-119页 |
| 4.讨论 | 第119-125页 |
| ·外显子8的存在不影响prosaposin与Rhox5的结合 | 第119-121页 |
| ·Rhox5蛋白的同源异型域是其与prosaposin蛋白结合的关键结构 | 第121-122页 |
| ·Prosaposin蛋白中与Rhox5蛋白结合的关键结构 | 第122-125页 |
| 5.小结 | 第125-127页 |
| 第六章 Rhox5/Prosaposin的相互作用及其与PI3K/Akt信号通路 | 第127-155页 |
| 1.前言 | 第127页 |
| 2.实验方法 | 第127-137页 |
| ·NIH3T3细胞G418和潮霉素B敏感性筛查 | 第127-128页 |
| ·稳定细胞系的构建 | 第128-129页 |
| ·稳定细胞系的鉴定 | 第129-133页 |
| ·四种细胞不同处理条件下细胞增殖情况 | 第133页 |
| ·无血清诱导条件下四种细胞凋亡情况 | 第133-134页 |
| ·PI3K/Akt信号通路磷酸化水平改变的检测 | 第134-135页 |
| ·PI3K/Akt信号通路下游调控基因表达水平的检测 | 第135-137页 |
| 3.实验结果 | 第137-148页 |
| ·过表达Rhox5、prosaposin及Rhox5/prosaposin稳定细胞系的建立 | 第137-139页 |
| ·Rhox5/prosaposin的单独作用及其协同作用对细胞增殖的影响 | 第139-141页 |
| ·Rhox5/prosaposin的单独作用及其协同作用对细胞凋亡的影响 | 第141-142页 |
| ·Rhox5/prosaposin的单独作用及其协同作用对PI3K/Akt信号通路的影响 | 第142-144页 |
| ·Rhox5/prosaposin对PI3K/Akt下游靶分子表达水平的影响 | 第144-148页 |
| 4.讨论 | 第148-153页 |
| 5.小结 | 第153-155页 |
| 第七章 全文总结 | 第155-159页 |
| 参考文献 | 第159-168页 |
| 附录 | 第168-179页 |
| 缩写词中英文对照 | 第179-182页 |
| 在学期间发表论文清单 | 第182-183页 |
| 致谢 | 第183页 |
