| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 1 引言 | 第9-21页 |
| ·胚胎干细胞的生物学特性 | 第9页 |
| ·胚胎干细胞系的建立 | 第9-10页 |
| ·胚胎干细胞分离和培养的技术路线 | 第10-11页 |
| ·胚胎干细胞自我更新的分子机制 | 第11页 |
| ·影响胚胎干细胞分离的因素 | 第11-14页 |
| ·饲养层 | 第12页 |
| ·血清 | 第12-13页 |
| ·生长因子 | 第13页 |
| ·微环境(niche)对干细胞的影响 | 第13-14页 |
| ·胚胎干细胞的鉴定 | 第14-17页 |
| ·形态学鉴定 | 第14页 |
| ·碱性磷酸酶活性(AKP) | 第14-15页 |
| ·胚胎阶段特异性表面抗原的检测 | 第15页 |
| ·核型分析 | 第15页 |
| ·体内分化实验 | 第15-16页 |
| ·体外分化实验 | 第16页 |
| ·四倍体和嵌合体实验 | 第16-17页 |
| ·研究ES细胞的意义 | 第17-20页 |
| ·发育生物学 | 第18页 |
| ·新药开发 | 第18页 |
| ·组织工程 | 第18页 |
| ·生产克隆动物 | 第18-19页 |
| ·生产转基因动物 | 第19页 |
| ·研究胚胎发育的基因调控 | 第19页 |
| ·用于制作嵌合体 | 第19页 |
| ·用于疾病的治疗 | 第19-20页 |
| ·本研究的目的、意义及主要内容 | 第20-21页 |
| 2 材料和方法 | 第21-29页 |
| ·实验动物 | 第21页 |
| ·主要设备 | 第21-22页 |
| ·主要溶液配制方法 | 第22-24页 |
| ·DMEM的配制 | 第22页 |
| ·2-细胞电融和液配制 | 第22页 |
| ·小鼠ES细胞培养基 | 第22页 |
| ·0.25%Trypsin-EDTA消化液的配制 | 第22-23页 |
| ·PBS的配制 | 第23页 |
| ·丝裂霉素-C | 第23页 |
| ·培养基配制 | 第23-24页 |
| ·实验方法 | 第24-29页 |
| ·实验动物处理 | 第24-25页 |
| ·小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)及饲养层的制备 | 第25页 |
| ·囊胚收集和早期培养 | 第25页 |
| ·小鼠ES细胞的建立 | 第25-26页 |
| ·ES细胞的常规培养 | 第26页 |
| ·ES细胞的冻存和复苏 | 第26页 |
| ·ES细胞的体内分化 | 第26-27页 |
| ·2-细胞胚胎收集及四倍体胚胎的制备 | 第27页 |
| ·ES细胞团与四倍体胚胎聚合 | 第27-28页 |
| ·输卵管内胚胎移植 | 第28页 |
| ·子宫内胚胎移植 | 第28-29页 |
| 3 结果与分析 | 第29-36页 |
| ·(C57BL/6J×129/Sv)F1和(C57BL/6J×DBA/2)F1×129/Sv囊胚贴壁、ICM增殖及ES细胞分离 | 第29-30页 |
| ·畸胎瘤形成 | 第30-31页 |
| ·聚合法制备源于杂合遗传背景的ES小鼠 | 第31-35页 |
| ·正常二倍体胚胎与四倍体胚胎发育能力比较 | 第31-32页 |
| ·四倍体胚胎的电融和、发育以及嵌合体的制备 | 第32-35页 |
| ·ES小鼠的出生重和生活力 | 第35-36页 |
| 4 讨论 | 第36-40页 |
| ·影响小鼠胚胎干细胞分离效率的因素 | 第36页 |
| ·ES细胞的畸胎瘤简便制备技术 | 第36-37页 |
| ·聚合法制备源于杂合遗传背景的ES小鼠的影响因素 | 第37-39页 |
| ·正常二倍体胚胎与四倍体胚胎发育能力比较 | 第37页 |
| ·影响制备ES小鼠的因素 | 第37-39页 |
| ·ES小鼠的生活力 | 第39页 |
| ·ES小鼠的应用前景 | 第39-40页 |
| 5 结论 | 第40-41页 |
| 参考文献 | 第41-49页 |
| 作者简历 | 第49-51页 |
| 致谢 | 第51-52页 |
| 附录 | 第52-57页 |