| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 缩略语表 | 第12-14页 |
| 1 前言 | 第14-42页 |
| ·苏云金芽胞杆菌 | 第14-24页 |
| ·苏云金芽胞杆菌杀虫活性谱 | 第14-15页 |
| ·鞭毛抗原血清型分类 | 第15页 |
| ·杀虫晶体蛋白分类 | 第15-18页 |
| ·苏云金芽胞杆菌的活性因子 | 第18-20页 |
| ·杀虫晶体蛋白 | 第18页 |
| ·苏云金素 | 第18-19页 |
| ·Vip蛋白 | 第19页 |
| ·芽胞 | 第19页 |
| ·几丁质酶 | 第19-20页 |
| ·双效菌素 | 第20页 |
| ·其他活性成分 | 第20页 |
| ·苏云金芽胞杆菌的应用 | 第20-22页 |
| ·外源基因在苏云金芽胞杆菌中的表达 | 第22-23页 |
| ·供氧在苏云金芽胞杆菌发酵过程中的重要意义 | 第23-24页 |
| ·透明颤菌血红蛋白及其研究应用进展 | 第24-40页 |
| ·血红蛋白简介 | 第24-25页 |
| ·透明颤菌概述 | 第25页 |
| ·透明颤菌血红蛋白的结构与特性 | 第25-28页 |
| ·VHb的生理功能 | 第28-30页 |
| ·透明颤菌血红蛋白基因的克隆、调控与表达 | 第30-33页 |
| ·透明颤菌血红蛋白的应用 | 第33-40页 |
| ·VHb在大肠杆菌中的应用 | 第33-34页 |
| ·VHb在芽胞杆菌中的应用 | 第34页 |
| ·VHb在酵母菌中的应用 | 第34-36页 |
| ·VHb对霉菌发酵生产的影响 | 第36页 |
| ·VHb在链霉菌中的作用 | 第36-37页 |
| ·VHb在植物细胞中的表达 | 第37-38页 |
| ·VHb的表达对降解毒害物质的作用 | 第38-39页 |
| ·vgb基因启动子的应用 | 第39-40页 |
| ·研究目的和意义 | 第40-42页 |
| 2 材料与方法 | 第42-56页 |
| ·实验材料 | 第42-47页 |
| ·菌株和质粒 | 第42-43页 |
| ·PCR引物 | 第43-44页 |
| ·培养基、抗生素及培养温度 | 第44-45页 |
| ·试剂 | 第45页 |
| ·抽提液和缓冲液 | 第45-46页 |
| ·实验仪器 | 第46-47页 |
| ·生物测定供试昆虫 | 第47页 |
| ·实验方法 | 第47-51页 |
| ·核酸操作方法 | 第47-49页 |
| ·DNA的体外重组操作 | 第47页 |
| ·大肠杆菌质粒的小量抽提制备 | 第47-48页 |
| ·苏云金芽胞杆菌质粒的小量抽提制备 | 第48页 |
| ·苏云金芽胞杆菌总DNA小量抽提 | 第48页 |
| ·DNA的回收及纯化 | 第48页 |
| ·PCR扩增 | 第48-49页 |
| ·重组质粒的转化 | 第49-50页 |
| ·大肠杆菌感受态制备及常规转化 | 第49页 |
| ·苏云金芽胞杆菌的电转化 | 第49-50页 |
| ·大肠杆菌转化子的快检 | 第50页 |
| ·蛋白质SDS-PAGE | 第50-51页 |
| ·SDS-RAGE样品的制备 | 第50页 |
| ·SDS-PAGE凝胶的制备 | 第50页 |
| ·电泳、染色及脱色 | 第50-51页 |
| ·蛋白质的密度定量 | 第51页 |
| ·几丁质酶活的测定 | 第51页 |
| ·苏云金芽胞杆菌重组菌株的筛选 | 第51-52页 |
| ·苏云金芽胞杆菌基因整合菌株的筛选 | 第51页 |
| ·苏云金芽胞杆菌晶体产生菌株筛选 | 第51-52页 |
| ·血红蛋白一氧化碳差光光谱法检测 | 第52-53页 |
| ·一氧化碳的制备 | 第52页 |
| ·样品处理与扫描 | 第52-53页 |
| ·发酵实验 | 第53-55页 |
| ·分批发酵实验 | 第53页 |
| ·连续发酵实验 | 第53页 |
| ·临界氧浓度测定 | 第53-54页 |
| ·发酵液光密度的测定 | 第54页 |
| ·细胞干重的测定 | 第54页 |
| ·细胞浓度的测定 | 第54页 |
| ·摄氧率的测定 | 第54页 |
| ·呼吸强度的测定 | 第54页 |
| ·还原糖浓度的测定 | 第54-55页 |
| ·对棉铃虫毒力的生物测定 | 第55页 |
| ·发酵中浊度仪的使用 | 第55-56页 |
| 3 结果与分析 | 第56-88页 |
| ·vgb基因在苏云金芽胞杆菌中的表达 | 第56-69页 |
| ·携带vgb基因载体的构建 | 第56-63页 |
| ·基因pluxs-vgb的构建 | 第56-58页 |
| ·质粒pET28a-Erm~r和pET28a-P_(luxS)-vgb-Erm~r的构建 | 第58-59页 |
| ·质粒pEG491-ehi’、pEG491-vgb~-和pEG491-vgb~+的构建 | 第59-63页 |
| ·苏云金芽胞杆菌vgb基因整合菌株的构建 | 第63-67页 |
| ·BMB171-VHb~+及其对照菌株BMB171-VHb~-构建 | 第63-65页 |
| ·质粒pHT304-Kan~r-cry的构建 | 第65-67页 |
| ·BMB667-VHb~+及其对照菌株BMB667-VHb~-构建 | 第67页 |
| ·苏云金芽胞杆菌几丁质酶活性的检测结果 | 第67-68页 |
| ·VHb在苏云金芽胞杆菌中的表达检测结果 | 第68-69页 |
| ·VHb对苏云金芽胞杆菌菌株发酵特性的影响 | 第69-80页 |
| ·VHb对临界氧浓度的影响 | 第69-71页 |
| ·VHb对菌数和晶体蛋白浓度的影响 | 第71-75页 |
| ·VHb对溶解氧浓度的影响 | 第75-76页 |
| ·VHb对摄氧率和呼吸强度的影响 | 第76-77页 |
| ·VHb对最大比生长速率的影响 | 第77-80页 |
| ·VHb对菌株杀虫毒力的影响 | 第80页 |
| ·苏云金芽胞杆菌发酵中浊度仪的在线监控作用 | 第80-88页 |
| ·浊度值影响因素的排除 | 第81-83页 |
| ·发酵液体积对浊度值的影响 | 第81-82页 |
| ·通气量、搅拌转速对浊度值的影响 | 第82-83页 |
| ·浊度仪对Bt发酵的监测和预测 | 第83-88页 |
| ·浊度值与苏云金芽胞杆菌生长周期的关系 | 第83-84页 |
| ·浊度值与营养体细胞浓度的关系 | 第84-85页 |
| ·浊度值测定芽胞形成比例及预测发酵结束时间 | 第85-87页 |
| ·预测最大浊度值及芽胞形成时间实例验证 | 第87-88页 |
| 4 讨论 | 第88-90页 |
| 参考文献 | 第90-100页 |
| 致谢 | 第100-101页 |
| 附录 | 第101页 |
