| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-15页 |
| 前言 | 第15-16页 |
| 文献综述 | 第16-25页 |
| 第一章 喜树和喜树细胞中生物碱含量研究 | 第25-31页 |
| 1.材料与方法 | 第25-26页 |
| ·植物材料与处理方法 | 第25页 |
| ·植物材料 | 第25页 |
| ·处理方法 | 第25页 |
| ·喜树碱和羟基喜树碱含量测定 | 第25-26页 |
| ·仪器与试剂 | 第25页 |
| ·色谱条件及系统适用性 | 第25页 |
| ·线性关系 | 第25-26页 |
| ·样品测定方法 | 第26页 |
| 2.结果与讨论 | 第26-27页 |
| ·喜树中不同组织部位生物碱含量 | 第26页 |
| ·喜树细胞生长曲线和生物碱含量 | 第26-27页 |
| ·在各种不同处理下喜树细胞中生物碱含量 | 第27页 |
| 3.小结 | 第27-31页 |
| 第二章 喜树茉莉酸途径关键酶基因的克隆和功能研究 | 第31-82页 |
| 前言 | 第31-33页 |
| 1.材料与方法 | 第33-57页 |
| ·植物材料、种植和处理方法 | 第33页 |
| ·植物材料 | 第33页 |
| ·种植方法 | 第33页 |
| ·处理方法 | 第33页 |
| ·菌株和载体 | 第33页 |
| ·菌株 | 第33页 |
| ·载体 | 第33页 |
| ·试剂(盒)、酶及引物 | 第33-34页 |
| ·试剂(盒) | 第34页 |
| ·酶 | 第34页 |
| ·引物 | 第34页 |
| ·仪器和设备 | 第34-35页 |
| ·自配的其他试剂 | 第35-36页 |
| ·植物RNA的抽提及RNA质量检测 | 第36-37页 |
| ·植物RNA的抽提 | 第36页 |
| ·测定所抽提RNA的OD_(260)值 | 第36-37页 |
| ·采用CTAB法提取植物总DNA | 第37-38页 |
| ·DNA片段的回收、连接、克隆和测序 | 第38页 |
| ·片段回收 | 第38页 |
| ·片段连接 | 第38页 |
| ·载体转化 | 第38页 |
| ·测序反应 | 第38页 |
| ·CaAOC目的基因克隆 | 第38-46页 |
| ·3’-RACE获得目的基因3’端 | 第38-40页 |
| ·5’-RACE获得目的基因5’端 | 第40页 |
| ·CaAOC全长的获取 | 第40页 |
| ·CaAOC基因组全长的克隆 | 第40页 |
| ·CaAOC在喜树中的Southern blotting分析 | 第40-43页 |
| ·CaAOC在喜树不同组织中的表达分析 | 第43-46页 |
| ·生物信息分析 | 第46页 |
| ·CaAOC在不同处理诱导及高盐、低温下的表达分析 | 第46页 |
| ·CaAOC基因原核表达载体的构建及功能验证 | 第46-48页 |
| ·pET-30载体的制备 | 第46-47页 |
| ·目的基因片段的制备 | 第47页 |
| ·大肠杆菌BL21DE3(pLysS)感受态细胞的制备 | 第47页 |
| ·载体与目的片段连接及克隆 | 第47页 |
| ·转化子的鉴定 | 第47页 |
| ·目的蛋白的诱导表达 | 第47-48页 |
| ·阳性菌株的耐盐功能测定 | 第48页 |
| ·CaAOC基因植物表达载体构建及遗传转化研究 | 第48-57页 |
| ·植物表达载体pCAMBIA1304+CaAOC的构建 | 第48-49页 |
| ·目的基因的扩增和限制性酶消化 | 第49页 |
| ·载体pCAMBIA1304的限制性酶切 | 第49-50页 |
| ·载体pCAMBIA1304和CaAOC基因的连接 | 第50页 |
| ·表达载体pCAMBIA1304+CaAOC的鉴定 | 第50页 |
| ·表达载体转化到根癌农杆菌EHA105 | 第50-51页 |
| ·叶盘法转化烟草 | 第51-55页 |
| ·根癌农杆菌EHA105介导p1304+CaAOC遗传转化喜树 | 第55-57页 |
| 2.结果和讨论 | 第57-79页 |
| ·CaAOC全长cDNA及基因组的克隆和性质分析 | 第57-59页 |
| ·CaAOC的生物信息学分析 | 第59-62页 |
| ·CaAOC的Southern blotting分析 | 第62-63页 |
| ·CaAOC在不同组织的表达分析 | 第63页 |
| ·喜树细胞在不同生长时期CaAOC的表达分析 | 第63-65页 |
| ·CaAOC在不同诱导处理下的表达分析 | 第65-67页 |
| ·CaAOC在高盐和低温处理下的表达分析 | 第67-68页 |
| ·原核表达载体的构建及分析 | 第68-69页 |
| ·目的蛋白的诱导表达结果和耐盐实验 | 第69-70页 |
| ·植物表达载体pCAMBIA1304+CaAOC的构建及分析 | 第70-71页 |
| ·转基因烟草的PCR和RT-PCR检测 | 第71-72页 |
| ·转基因烟草的耐盐实验分析 | 第72-74页 |
| ·转基因烟草叶片在低温下的耐受分析 | 第74页 |
| ·转基因烟草叶片中尼古丁含量分析 | 第74-76页 |
| ·农杆菌介导p1304+CaAOC遗传转化喜树 | 第76-77页 |
| ·转基因喜树愈伤的PCR和RT-PCR检测 | 第77-78页 |
| ·转基因喜树愈伤中喜树碱含量测定 | 第78-79页 |
| 3.小结 | 第79-82页 |
| 第三章 喜树细胞色素P450基因CaSS的克隆和分析 | 第82-100页 |
| 1.材料与方法 | 第82-91页 |
| ·植物材料 | 第82页 |
| ·菌株和载体 | 第82页 |
| ·试剂(盒)、酶及引物 | 第82-83页 |
| ·试剂(盒) | 第82页 |
| ·酶 | 第82页 |
| ·引物 | 第82-83页 |
| ·植物RNA的抽提及RNA质量检测 | 第83-84页 |
| ·植物RNA的抽提 | 第83页 |
| ·RNA质量检测 | 第83页 |
| ·甲醛变性胶 | 第83-84页 |
| ·测定所抽提RNA的OD_(260)值 | 第84页 |
| ·采用CTAB法提取植物总DNA | 第84-85页 |
| ·DNA片段的回收、连接、克隆和测序 | 第85页 |
| ·片段回收 | 第85页 |
| ·片段连接 | 第85页 |
| ·载体转化 | 第85页 |
| ·测序反应 | 第85页 |
| ·CaAOC目的基因克隆 | 第85-91页 |
| ·3'-RACE cDNA文库的构建及获得目的基因3’端 | 第85-87页 |
| ·5’-RACE获得目的基因5’端 | 第87页 |
| ·CaSS全长的获取 | 第87页 |
| ·CaSS在喜树中的Southern blotting分析 | 第87-90页 |
| ·CaAOC在喜树不同组织中的表达分析 | 第90页 |
| ·生物信息分析 | 第90-91页 |
| 2.结果和讨论 | 第91-98页 |
| ·喜树细胞色素P450基因CaSS的克隆分析 | 第91页 |
| ·CaSS全长cDNA的克隆和性质分析 | 第91-93页 |
| ·CASS的生物信息学分析 | 第93-97页 |
| ·CaSS的Southern blotting分析 | 第97-98页 |
| ·CaSS的组织组织特异性表达分析 | 第98页 |
| 3.小结 | 第98-100页 |
| 参考文献 | 第100-110页 |
| 博士期间参与的其他工作 | 第110-111页 |
| SCI论文列表 | 第111-115页 |
| 致谢 | 第115-117页 |
