| 中文摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-35页 |
| 引言 | 第13-14页 |
| 1 微生物全细胞传感器概述 | 第14-16页 |
| 2 微生物全细胞传感器的种类 | 第16-18页 |
| ·非特异性微生物细胞传感器 | 第16-17页 |
| ·半特异性微生物细胞传感器 | 第17-18页 |
| ·特异性微生物细胞传感器 | 第18页 |
| 3 用于构建微生物全细胞传感器的报告基因 | 第18-26页 |
| ·构建微生物全细胞传感器的报告基因满足的条件 | 第18-19页 |
| ·通常使用的报道基因的比较 | 第19-26页 |
| ·氯霉素乙酰基转移酶 | 第19-20页 |
| ·β-半乳糖苷酶 | 第20-21页 |
| ·萤火虫荧光素酶 | 第21-22页 |
| ·细菌荧光素酶 | 第22-23页 |
| ·碱性磷酸酶 | 第23页 |
| ·荧光蛋白家族 | 第23-26页 |
| ·绿色荧光蛋白(GFP)简介 | 第24页 |
| ·GFP的理化性质、荧光特性 | 第24-26页 |
| ·GFP的理化性质 | 第24-25页 |
| ·GFP的荧光原理 | 第25页 |
| ·GFP的荧光性质及应用广泛的优点 | 第25-26页 |
| 4 基因表达和调控 | 第26-31页 |
| ·基因的结构 | 第26-28页 |
| ·启动子的概述 | 第28-29页 |
| ·原核生物启动子的结构 | 第28-29页 |
| ·真核生物启动子的结构 | 第29页 |
| ·基因表达与调控 | 第29-30页 |
| ·调控报告基因表达的机制 | 第30-31页 |
| 5 本项目的立题背景、研究内容和意义 | 第31-35页 |
| ·立题背景 | 第31-32页 |
| ·研究技术路线 | 第32-33页 |
| ·研究内容 | 第33-34页 |
| ·研究意义 | 第34-35页 |
| 第二章 以gfp为报告基因的铜抗性全细胞传感器的基础构建 | 第35-62页 |
| 1 前言 | 第35-36页 |
| 2 实验材料、试剂与仪器 | 第36-44页 |
| ·实验材料 | 第36-39页 |
| ·菌种及质粒 | 第36页 |
| ·实验溶液的配制 | 第36-37页 |
| ·培养基与抗生素浓度 | 第37-38页 |
| ·聚合酶链式反应技术(PCR)的引物合成 | 第38-39页 |
| ·融合PCR和扩增PCR的反应条件 | 第39页 |
| ·试剂及其操作步骤 | 第39-44页 |
| ·E.Z.N.A.Plasmid Mini Kit | 第39-40页 |
| ·E.Z.N.A.Gel Extraction Kit | 第40-42页 |
| ·E.Z.N.A.Cycle-Pure Kit | 第42-43页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第43页 |
| ·实验用到的酶制剂 | 第43页 |
| ·荧光检测 | 第43-44页 |
| ·仪器设备 | 第44页 |
| 3 实验方法 | 第44-58页 |
| ·GPF基础细胞传感器的构建 | 第44-58页 |
| ·pGEM-luc-CGP重组型质粒的构建 | 第47-52页 |
| ·CopA启动子和GFP的PCR的扩增 | 第47-48页 |
| ·CopA和GFP融合PCR的扩增 | 第48-49页 |
| ·pGEM载体的制备 | 第49-50页 |
| ·pGEM载体与CopA-GFP的连接转化 | 第50-52页 |
| ·pGEM-CGP-NptⅡ重组型质粒的构建 | 第52-54页 |
| ·NptⅡ的PCR扩增 | 第52-53页 |
| ·pGEM-CGP载体的制备 | 第53页 |
| ·pGEM-CGP载体和NptⅡ的连接转化 | 第53-54页 |
| ·调控蛋白Cue和Terminator终止子的连接 | 第54-56页 |
| ·特异性调控蛋白Cue R-PCR扩增 | 第54-55页 |
| ·Terminator终止子PCR扩增 | 第55页 |
| ·调控蛋白Cue和Terminator终止子的融合 | 第55-56页 |
| ·pGEM-CGP-NptⅡ载体和目的片段Cue-Te的连接转化 | 第56-58页 |
| 4 实验结果 | 第58-61页 |
| ·pGEM-CGP-NptⅡ-Cue-Te构建的电泳结果 | 第59-60页 |
| ·pGEM-CGP-NptⅡ-Cue-Te构建的酶切结果 | 第60-61页 |
| 5 小结 | 第61-62页 |
| 第三章 铜抗性全细胞传感器CGPNPCT的表达情况 | 第62-72页 |
| 1 前言 | 第62页 |
| 2 材料、主要试剂和器材 | 第62-63页 |
| ·实验材料 | 第62页 |
| ·实验主要试剂 | 第62-63页 |
| ·实验器材 | 第63页 |
| 3 实验方法 | 第63-66页 |
| ·全细胞传感器的表达验证 | 第63-64页 |
| ·pGEM-CGP-NptⅡ-Cue-Te全细胞传感器的表达验证 | 第63-64页 |
| ·工程菌株pGEM-CGP-NptⅡ-Cue-Te的遗传稳定性 | 第64页 |
| ·铜抗性全细胞传感器的耐受性检测 | 第64页 |
| ·铜抗性全细胞传感器特异性的测定 | 第64-65页 |
| ·底物浓度单因素对荧光表达强度的影响 | 第65页 |
| ·诱导时间单因素对荧光表达强度影响 | 第65页 |
| ·浓度与诱导时间双因素对荧光表达强度的影响 | 第65-66页 |
| 4 结果 | 第66-70页 |
| ·铜抗性全细胞传感器诱导GFP的表达 | 第66-67页 |
| ·浓度因素对荧光表达强度的影响 | 第67-68页 |
| ·诱导时间对荧光表达强度的影响 | 第68页 |
| ·浓度与诱导时间双因素对荧光表达强度的影响 | 第68-69页 |
| ·六种不同重金属对荧光表达强度的比较 | 第69-70页 |
| 5 小结 | 第70-72页 |
| 第四章 讨论与展望 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-80页 |
| 致谢 | 第80-81页 |
| 附录 | 第81-82页 |
