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抗稻瘟病基因pi-d2导入水稻提高稻瘟病抗性和一份条斑和颖花异常水稻突变体研究

摘要第1-12页
ABSTRACT第12-15页
第一部分 抗稻瘟病基因pi-d2导入水稻提高稻瘟病抗性的研究第15-85页
 第一章 文献综述第15-43页
  1 稻瘟病菌的研究概况第15-23页
   ·稻瘟病病原生物学第15-16页
   ·稻瘟病的侵染循环与危害机理第16-17页
   ·稻瘟病菌生理小种研究第17-20页
     ·生理小种的鉴别与命名第17-19页
     ·稻瘟病致病分化和致病性变异研究第19-20页
   ·稻瘟病菌基因组的研究第20-21页
   ·稻瘟病菌致病的分子机制第21-23页
  2 水稻对稻瘟病抗性的研究第23-32页
   ·植物抗病性第23-24页
   ·植物抗病基因(R)的特点第24-26页
     ·R基因结构与植物抗病性第25-26页
     ·R基因信号传导第26页
   ·植物抗病性分子机制第26-27页
     ·与病原物亲和因子有关的植物抗病性机制第26-27页
     ·与病原物非亲和因子有关的植物抗病性机制第27页
   ·水稻抗稻瘟病基因第27-32页
     ·Pi-b第27-29页
     ·Pi-ta第29页
     ·Pi-9第29-30页
     ·Pi2/Piz-t第30页
     ·Pi-d2研究情况第30-32页
  3 水稻抗稻瘟病育种研究第32-36页
   ·常规抗病育种第32-33页
     ·抗性基因的来源第32-33页
     ·育种途径第33页
   ·生物技术育种第33-36页
     ·组织培养应用于抗稻瘟病育种第33-34页
     ·基因工程育种第34-35页
     ·分子标记辅助育种第35-36页
  4 植物抗真菌基因工程研究第36-42页
   ·基于寄主一病原菌互作体系的基因工程策略第37-38页
     ·R基因的利用第37页
     ·无毒基因的利用第37-38页
     ·信号传导因子的利用第38页
   ·基于广谱抗真菌蛋白基因工程的策略第38-40页
     ·几丁质酶基因和和β-1,3葡聚糖酶基因第38-39页
     ·核糖体失活蛋白(ribosomal inactivation protein,RIP)基因第39页
     ·葡萄糖氧化酶(glucose oxidase,GO)基因第39页
     ·植保素第39-40页
   ·基于杀菌肽基因工程策略第40页
   ·利用人工控制细胞死亡策略培育抗稻瘟病水稻第40-41页
   ·植物基因工程抗病育种存在的主要问题及发展第41-42页
     ·对植物抗病机制了解不够第41页
     ·抗病基因的分离克隆第41页
     ·基因的导人与整合第41页
     ·转基因外植体的再生第41页
     ·基因表达的调控与稳定性遗传第41-42页
     ·转基因抗病植物的安全性第42页
  5 本研究的目的意义第42-43页
 第二章 材料与方法第43-55页
  1 材料第43-45页
   ·植物材料第43页
   ·菌株和质粒第43-44页
   ·培养基成分第44页
     ·适用于水稻的培养基第44页
     ·细菌培养基的配制第44页
   ·重要试剂及溶液第44-45页
     ·重要试剂第44-45页
     ·重要溶液第45页
   ·重要仪器设备第45页
  2 试验方法第45-55页
   ·培养基试验第45-46页
     ·水稻幼穗培养第46页
     ·水稻幼胚培养第46页
     ·水稻成熟胚培养第46页
     ·愈伤组织对潮霉素(Hyg)的敏感性实验第46页
     ·植物硫激素(Phytosulfokine,PSK)在农杆菌转化过程中作用实验第46页
   ·水稻愈伤组织转化第46-47页
     ·菌液准备第46页
     ·转化第46-47页
     ·洗菌与选择第47页
     ·分化与生根第47页
   ·转基因植株的分子生物学检测第47-51页
     ·转基因植株的PCR检测第47-48页
     ·转基因植株的Southern Blot鉴定第48-50页
     ·转基因植株的RT-PCR检验第50-51页
   ·GUS组织化学染色第51-52页
   ·转基因子代潮霉素抗性遗传分析第52页
   ·转基因后代稻瘟病抗性鉴定第52-54页
     ·稻瘟病菌系的培养第52页
     ·稻瘟病接种及鉴定第52-53页
     ·转基因材料接后抗感材料的PCR鉴定第53页
     ·转基因材料的田间抗性鉴定第53页
     ·转基因材料的对稻瘟病菌的抗谱测定第53-54页
     ·稻瘟病粗毒素的对转基因材料筛选第54页
   ·转基因水稻与亲本的稻米理化特性和氨基酸含量的测定第54页
   ·转基因材料的农艺性状调查第54-55页
 第三章 结果与分析第55-72页
  1 转基因外植体的选择第55-56页
   ·不同外植体的愈伤诱导率第55页
   ·潮霉素筛选压临界浓度的确定第55-56页
   ·继代时间影响转化效率第56页
  2 水稻愈伤农杆菌转化和植株再生第56-59页
   ·水稻愈伤农杆菌转化第56-58页
     ·农杆菌的转化和筛选第56页
     ·PSK-α在抗性愈伤筛选中的作用第56-58页
   ·植株的获得第58-59页
  3 转基因植株的鉴定第59-63页
   ·PCR鉴定第59页
   ·Southern Blot检测第59-60页
   ·RT-PCR分析第60-61页
   ·GUS组织染色第61页
   ·转基因植株潮霉素抗性及遗传第61-63页
     ·转基因植株T_1代潮霉素抗性分离比测定第62页
     ·转基因植株T_2代潮霉素抗性分离比测定第62-63页
  4 转基因植株后代抗病性测定第63-69页
   ·T_1代植株的稻瘟病抗性第63-64页
   ·T_2代植株的稻瘟病抗性第64-65页
   ·转基因植株的田间抗性测定第65-66页
   ·转基因材料的抗谱测定第66-69页
   ·转基因植株的稻瘟病初毒素筛选第69页
  5 转基因水稻农艺性状考察第69-71页
  6 转基因水稻的米质测定第71-72页
 第四章 讨论第72-77页
  1 农杆菌介导水稻转化体系的完善第72页
  2 基因工程改良水稻稻瘟病抗性第72-73页
  3 Pi-d2在转基因植株中的遗传学行为第73-74页
   ·启动子对外源基因表达活性的影响第73页
   ·Pi-d2在转基因植株中的遗传行为第73-74页
  4 Pi-d2在转基因植株表型变异第74页
  5 转Pi-d2基因植株的稻瘟病抗性第74-75页
  6 转基因植株在育种中的运用第75页
  7 Pi-d2基因在基因工程中的应用前景第75页
  8 转基因的安全性第75-77页
   ·转基因植物中35S启动子的生物安全性第75-76页
   ·抗生素抗性标记基因的生物安全性第76页
   ·目的基因的生物安全性第76-77页
 参考文献第77-85页
第二部分 一份条斑和颖花异常水稻突变体研究第85-124页
 第一章 文献综述第85-101页
  1 植物叶色突变体第85-93页
   ·突变体的来源第85-86页
     ·物理和化学诱变第85-86页
     ·插入诱变第86页
   ·植物叶色突变第86-89页
     ·叶色突变体的类型第86-87页
     ·叶绿素缺失的生理生化第87-89页
   ·叶绿素突变体的突变机制第89-92页
     ·叶绿体基因组控制的叶绿素突变第89-90页
     ·核基因控制的叶绿体突变第90-91页
     ·线粒体基因直接影响的叶绿体突变第91-92页
   ·水稻叶色突变体的研究第92-93页
  2 水稻花发育研究进展第93-100页
   ·双子叶植物的ABC模型及其发展模式第93-96页
     ·ABC模型的提出第93-94页
     ·ABCD模型的提出第94页
     ·ABCE和ABCDE模型第94-96页
   ·水稻花序和花器官的发育第96-100页
     ·水稻花序形成的分子生物学第96-97页
     ·水稻花器官发育第97-100页
  3 本文研究的目的与意义第100-101页
 第二章 材料与方法第101-104页
  1 实验材料第101页
  2 实验方法第101-104页
   ·突变体形态鉴定和解剖结构观察第101页
   ·叶绿素含量以及光合速率的测定第101页
   ·花粉育性观察第101页
   ·遗传分析第101页
   ·突变体叶片酶含量的测定第101页
   ·叶片中丙二醛和可溶性糖的测定第101-102页
   ·石蜡切片第102页
   ·农艺性状调查第102页
   ·米质测定第102页
   ·叶绿体差异片段的筛选第102-104页
     ·叶绿体DNA的提取第102-103页
     ·RAPD分析第103-104页
 第三章 结果与分析第104-114页
  1 形态观察第104页
  2 电子显微镜下比较野生型和突变体叶片细胞结构第104-105页
  3 突变体颖花的早期发育第105-106页
  4 突变体叶和颖花的组织学分析第106-108页
  5 开花前后叶绿素和光合速率的变化第108-109页
  6 花药育性分析第109页
  7 突变体遗传分析第109-110页
  8 酶活力测定第110-111页
   ·超氧化物岐化酶(SOD)的活性变化第110页
   ·过氧化物酶(POD)活性变化第110页
   ·过氧化氢酶(CAT)的活性变化第110-111页
  9 丙二醛(MAD)的含量第111页
  10 可溶性糖(Soluble Sugar,SS)的含量第111-112页
  11 农艺性状调查第112页
  12 米质测定第112-113页
  13 片段筛选第113-114页
 第四章 讨论第114-124页
  1 质体发育受阻的阶段和原因第114-115页
  2 突变体叶片弯曲生长机制第115页
  3 突变基因影响花器官发育第115页
  4 突变影响植株的生理生化第115-116页
  5 水稻细胞质突变体第116-124页
参考文献第124-129页
致谢第129-130页
在读期间发表和整理的论文情况第130页

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