| 中文摘要 | 第1-5页 |
| 英文摘要 | 第5-9页 |
| 文献综述 | 第9-14页 |
| 1 ALA 的生物合成及调控 | 第9-10页 |
| 2 ALA 的生物活性 | 第10-12页 |
| 3 ALA 的工业化生产 | 第12-14页 |
| 引言 | 第14-16页 |
| 本实验研究目的与意义 | 第14页 |
| 本实验研究内容 | 第14-15页 |
| 技术路线 | 第15-16页 |
| 材料和方法 | 第16-26页 |
| 1 材料 | 第16页 |
| 2 仪器设备与试剂 | 第16页 |
| ·主要仪器设备 | 第16页 |
| ·主要试剂 | 第16页 |
| 3 方法 | 第16-23页 |
| ·酿酒酵母基因组 DNA 的提取 | 第16-17页 |
| ·hem1 基因的 PCR 扩增 | 第17-18页 |
| ·表达载体pET28a-ALAS 的构建 | 第18-20页 |
| ·外源基因的诱导表达 | 第20-21页 |
| ·表达载体pMAL-ALAS 的构建 | 第21-22页 |
| ·外源基因的诱导表达 | 第22页 |
| ·蛋白含量测定 | 第22页 |
| ·酶活测定 | 第22-23页 |
| ·测定pMAL-ALAS 和pMAL-2x 在 E.coliBL21(DE3)中的生长曲线 | 第23页 |
| 4 ALA 的测定 | 第23-26页 |
| ·大孔径树脂纯化 ALA | 第24-25页 |
| ·毛细管电泳分析 ALA 纯度 | 第25-26页 |
| 结果与分析 | 第26-34页 |
| 1 酵母hem1 的克隆和表达质粒的构建 | 第26-27页 |
| 2 hem1 基因在大肠杆菌中的诱导表达 | 第27页 |
| ·重组质粒pET28a-ALAS 的hem1 基因在大肠杆菌中的表达 | 第27页 |
| ·重组质粒pMAL-ALAS 的hem1 基因在大肠杆菌中的表达 | 第27页 |
| 3 酶活的胞内显示 | 第27-28页 |
| 4 酶活的体外测定 | 第28-29页 |
| ·BSA 标准曲线的绘制 | 第28-29页 |
| ·ALAS 活力测定 | 第29页 |
| 5 菌株的生长曲线 | 第29-30页 |
| 6 培养基初始pH 值，琥珀酸，甘氨酸对 ALA 产量的影响 | 第30-32页 |
| ·培养基初始pH 值对 ALA 产量的影响 | 第30-31页 |
| ·琥珀酸对 ALA 产量的影响 | 第31页 |
| ·甘氨酸对 ALA 产量的影响 | 第31-32页 |
| 7 ALA 的纯化及毛细管电泳 | 第32-34页 |
| ·ALA 的纯化 | 第33页 |
| ·纯化产物的毛细管电泳 | 第33-34页 |
| 讨论 | 第34-38页 |
| 1 酿酒酵母hem1 基因所编码的5-氨基酮戊酸合酶在原核中的表达 | 第34-35页 |
| ·表达载体及表达菌株的选择 | 第34页 |
| ·5-氨基酮戊酸合酶的表达及活性分析 | 第34-35页 |
| 2 影响 ALA 产量的各因素的探讨 | 第35-36页 |
| 3 ALA 纯化方法的探讨 | 第36页 |
| 4 毛细管电泳分析 ALA 纯度的优点 | 第36-38页 |
| 结论 | 第38-39页 |
| 参考文献 | 第39-46页 |
| 致谢 | 第46-47页 |
| 作者简介 | 第47页 |
