| 中文摘要 | 第1-7页 |
| 英文摘要 | 第7-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-44页 |
| 1 苏云金芽孢杆菌(Bacillus thruingiensis,Bt)研究现状 | 第15-26页 |
| ·苏云金芽孢杆菌研究的历史 | 第15-16页 |
| ·苏云金芽孢杆菌的分类 | 第16-21页 |
| ·血清学分类 | 第16页 |
| ·杀虫晶体蛋白基因的分类、同源性与生物活性 | 第16-21页 |
| ·杀虫晶体毒蛋白的结构与生物活性 | 第21-25页 |
| ·伴胞晶体蛋白的形态和化学组成 | 第21页 |
| ·杀虫晶体毒蛋白的高级结构 | 第21-23页 |
| ·杀虫晶体蛋白作用机制 | 第23-25页 |
| ·高毒力菌株的分离及新型杀虫基因的克隆 | 第25-26页 |
| ·Bt微生物基因工程菌的构建 | 第25-26页 |
| 2 几丁质酶研究概况及在生物防治领域中的应用 | 第26-28页 |
| ·几丁质酶的研究历史 | 第27页 |
| ·几丁质酶杀虫增效作用 | 第27-28页 |
| ·对害虫防治的增效机理 | 第28页 |
| 3 微生物蛋白质组学研究进展 | 第28-44页 |
| ·蛋白质组学概述 | 第28-29页 |
| ·蛋白质组学的技术进展 | 第29-34页 |
| ·二维凝胶电泳和蛋白质分离分析技术 | 第29-30页 |
| ·生物质谱与蛋白质鉴定 | 第30-32页 |
| ·二维质谱新技术 | 第32-34页 |
| ·多维色谱蛋白质鉴定技术 | 第34页 |
| ·蛋白质组的应用研究 | 第34-36页 |
| ·蛋白质的翻译后修饰 | 第34页 |
| ·蛋白质之间相互作用特点 | 第34-35页 |
| ·建立蛋白组数据库 | 第35-36页 |
| ·微生物蛋白质组学的研究现状 | 第36-40页 |
| ·培养条件改变的微生物蛋白质组学 | 第36-37页 |
| ·微生物定量蛋白质组学 | 第37-38页 |
| ·微生物亚细胞蛋白质组学 | 第38-39页 |
| ·微生物基因工程蛋白质组学 | 第39页 |
| ·微生物蛋白质组学与生物信息学的结合研究 | 第39-40页 |
| ·蛋白质组技术在苏云金芽孢杆菌研究中的应用 | 第40-44页 |
| 第二章 苏云金芽孢杆菌高毒力菌株4.0718的快速选育及发酵条件的研究 | 第44-54页 |
| 1 材料与方法 | 第44-46页 |
| ·Bt4.0718菌株的选育 | 第44-45页 |
| ·土样、菌株及试虫 | 第44页 |
| ·培养基 | 第44页 |
| ·诱变处理方法 | 第44页 |
| ·初筛 | 第44-45页 |
| ·复筛 | 第45页 |
| ·毒力测定 | 第45页 |
| ·Bt4.0718菌株的发酵条件 | 第45-46页 |
| ·仪器与试剂 | 第45页 |
| ·发酵培养条件试验表头设计 | 第45页 |
| ·培养基氮的测定 | 第45-46页 |
| ·培养基碳的测定 | 第46页 |
| ·生物量测定和细胞学观察 | 第46页 |
| ·发酵液的上清液和菌糊的制备 | 第46页 |
| 2 结果与分析 | 第46-52页 |
| ·高毒力杀虫菌株4.0718的选育系谱 | 第46-47页 |
| ·复合诱变后菌体涂片镜检初筛结果 | 第47-48页 |
| ·701~(2c)复合诱变菌株毒力测定 | 第48-49页 |
| ·4.0718菌株的速杀效果 | 第49页 |
| ·不同C/N比对4.0718菌株杀虫毒力的影响 | 第49-50页 |
| ·不同pH、温度、培养时间的发酵菌液对杀虫毒力的影响 | 第50-52页 |
| ·不同接种量、装液量和激活剂(FeSO_4)发酵菌液对杀虫毒力的影响 | 第52页 |
| ·上清液和菌体对杀虫毒力的影响 | 第52页 |
| 3 讨论 | 第52-54页 |
| 第三章 苏云金芽孢杆菌cry1Ac基因与烟草几丁质酶基因tchi B的双价基因融合表达及其杀虫增效作用 | 第54-70页 |
| 1 材料和方法 | 第55-59页 |
| ·菌株和质粒 | 第55页 |
| ·培养基和培养条件 | 第55页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第55-57页 |
| ·cry基因PCR引物设计 | 第57页 |
| ·cry基因PCR分析 | 第57页 |
| ·质粒DNA的分离和纯化 | 第57页 |
| ·重组质粒的构建、转化及其稳定性检验 | 第57-59页 |
| ·PCR扩增含有上游启动序列的cry1Ac基因 | 第58页 |
| ·PCR扩增烟草几丁质酶基因tchiB | 第58页 |
| ·PCR扩增含有下游终止序列的cry1Ac基因 | 第58页 |
| ·PCR扩增融合基因 | 第58页 |
| ·融合基因表达载体的构建 | 第58-59页 |
| ·融合基因表达载体电转化无晶体突变株XBU001及筛选 | 第59页 |
| ·融合蛋白的分离提取和SDS-PAGE检测 | 第59页 |
| ·原子力显微镜和扫描电子显微镜观察 | 第59页 |
| ·原子力显微镜观察 | 第59页 |
| ·扫描电子显微镜观察 | 第59页 |
| ·供试昆虫和生物活性测定 | 第59页 |
| ·序列测定 | 第59页 |
| 2 结果和分析 | 第59-67页 |
| ·cry基因通用引物的特异性 | 第60页 |
| ·4.0718菌株cry1和cry2特异基因型鉴定 | 第60-61页 |
| ·融合基因的构建和鉴定 | 第61-62页 |
| ·融合基因表达载体的构建 | 第62-64页 |
| ·表达载体pHAccHB6、pHAccHB7电转化无晶体突变株XBU001 | 第64页 |
| ·融合蛋白的分离提取和SDS-PAGE分析 | 第64-65页 |
| ·原子力显微镜和扫描电子显微镜观察 | 第65-66页 |
| ·原子力显微镜观察 | 第65-66页 |
| ·扫描电子显微镜观察 | 第66页 |
| ·生测分析 | 第66-67页 |
| 3 讨论 | 第67-70页 |
| 第四章 苏云金芽孢杆菌功能蛋白质组学研究 | 第70-95页 |
| 1 前言 | 第70-73页 |
| 2 材料和方法 | 第73-76页 |
| ·菌株与培养条件 | 第73页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第73-74页 |
| ·方法 | 第74-76页 |
| ·伴孢晶体蛋白的分离 | 第74页 |
| ·蛋白质含量测定 | 第74页 |
| ·杀虫晶体蛋白的双向电泳 | 第74-75页 |
| ·凝胶图像分析 | 第75页 |
| ·蛋白质的原位酶解 | 第75页 |
| ·MALDI-TOF肽质谱指纹图谱分析 | 第75-76页 |
| ·质谱数据的数据库查询 | 第76页 |
| ·Cry2Ac蛋白的三维结构分析 | 第76页 |
| 3 结果与分析 | 第76-89页 |
| ·苏云金芽孢杆菌杀虫晶体双向电泳条件的研究 | 第76-78页 |
| ·优化晶体蛋白的裂解液配方 | 第76页 |
| ·选取最适宜上样量 | 第76-77页 |
| ·选用分离效果好pH胶条 | 第77页 |
| ·摸索杀虫晶体蛋白提取方案 | 第77-78页 |
| ·苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白质研究 | 第78-89页 |
| ·苏云金芽孢杆菌亚种间杀虫晶体蛋白的比较蛋白质组研究 | 第79-80页 |
| ·Bt程菌株的比较蛋白质组研究 | 第80-86页 |
| ·蛋白质斑点的MALDI-TOF-MS肽质量指纹分析 | 第86-89页 |
| 4 讨论 | 第89-95页 |
| ·2-DE图谱的获得与分析 | 第89-90页 |
| ·部分蛋白质点的功能分析 | 第90-91页 |
| ·Cry蛋白核心片断的结构特征分析 | 第91-95页 |
| 全文总结 | 第95-98页 |
| 1.结论 | 第95-96页 |
| 2.主要创新点 | 第96-98页 |
| 参考文献 | 第98-117页 |
| 附录 | 第117-121页 |
| 英文缩写与译名 | 第121-123页 |
| 致谢 | 第123-125页 |
| 作者简历 | 第125-126页 |
| 在读博士期间主要学术成果 | 第126-128页 |
