| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 缩写词简表 | 第9-12页 |
| 前言 | 第12-17页 |
| 一、鼻咽癌的转移 | 第12页 |
| 二、caveolin-1的研究进展 | 第12-13页 |
| 三、5-8F,6-10B和Human metastasis array(HS-007) | 第13-15页 |
| 四、RNAi | 第15-17页 |
| 技术路线 | 第17-18页 |
| 第一章 材料与方法 | 第18-28页 |
| ·材料 | 第18-21页 |
| ·细胞株 | 第18页 |
| ·分子量标准 | 第18页 |
| ·菌株和载体 | 第18-19页 |
| ·实验动物 | 第19页 |
| ·干扰序列的设计 | 第19页 |
| ·基因表达分析引物 | 第19页 |
| ·主要抗体 | 第19页 |
| ·主要试剂 | 第19-20页 |
| ·相关软件及网址 | 第20页 |
| ·主要仪器设备 | 第20-21页 |
| ·方法 | 第21-28页 |
| ·细胞总RNA的提取 | 第21页 |
| ·RNA中痕量DNA的去除 | 第21-22页 |
| ·两步法RT-PCR | 第22-23页 |
| ·构建表达shRNAs的pSUPER.retro质粒 | 第23-24页 |
| ·细胞转染 | 第24页 |
| ·建立稳定转染shRNAs的5-8F鼻咽癌细胞株 | 第24页 |
| ·培养细胞的蛋白质制备 | 第24-25页 |
| ·BCA法蛋白定量 | 第25页 |
| ·Western Blot | 第25-26页 |
| ·流式细胞仪检测细胞周期 | 第26页 |
| ·平板克隆形成实验 | 第26页 |
| ·噻唑蓝(MTT)比色实验检测细胞增殖能力 | 第26页 |
| ·体外划痕实验 | 第26页 |
| ·Matrigel体外侵袭实验 | 第26-27页 |
| ·体内成瘤及转移能力检测 | 第27-28页 |
| 第二章 实验结果 | 第28-39页 |
| ·短发夹RNA表达载体shCav-1的构建及测序鉴定 | 第28-29页 |
| ·载体构建示意图 | 第28页 |
| ·测序结果 | 第28-29页 |
| ·BLAST结果 | 第29页 |
| ·建立稳定转染shCav-1的5-8F鼻咽癌细胞株 | 第29-31页 |
| ·RT-PCR分析稳定转染5-8F-shCav-1细胞中shCav-1在mRNA水平的表达 | 第30-31页 |
| ·Western Blot检测干扰后Cav-1在蛋白质水平上的表达 | 第31页 |
| ·Cav-1被干扰对鼻咽癌细胞5-8F细胞生物学特性的影响 | 第31-39页 |
| ·流式细胞仪检测细胞周期 | 第31-32页 |
| ·平板克隆形成实验 | 第32-33页 |
| ·噻唑蓝(MTT)比色实验检测细胞的增殖能力 | 第33-34页 |
| ·体外划痕实验 | 第34-35页 |
| ·Matrigel侵袭实验 | 第35-36页 |
| ·裸鼠体内成瘤及转移能力分析 | 第36-39页 |
| 第三章 讨论 | 第39-47页 |
| ·RNAi的方法学 | 第39-42页 |
| ·Cav-1基因的表达被干扰对成瘤、高转移鼻咽癌细胞株5-8F的生物学特性影响 | 第42-47页 |
| ·细胞周期的变化 | 第42-43页 |
| ·细胞增殖、侵袭和运动能力的变化 | 第43-45页 |
| ·裸鼠体内成瘤实验 | 第45-47页 |
| 结论 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-53页 |
| 综述 caveolin-1与肿瘤的研究进展 | 第53-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 攻读学位期间主要的研究成果目录及附件 | 第67页 |
