| 中文摘要 | 第1-9页 |
| 英文摘要 | 第9-11页 |
| 引言 | 第11-23页 |
| 实验研究 | 第23-46页 |
| 试验一、SARS 冠状病毒非结构蛋白 Nsp14 的基因克隆 | 第23-32页 |
| 1. 材料与方法 | 第23-28页 |
| ·材料 | 第23-24页 |
| ·模板与菌株 | 第23页 |
| ·试剂 | 第23页 |
| ·仪器 | 第23-24页 |
| ·方法 | 第24-27页 |
| ·克隆载体的构建方法 | 第24-27页 |
| ·PCR 扩增 | 第24页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第24-25页 |
| ·DNA 片段的纯化 | 第25页 |
| ·PCR 产物片段与 T 载体的连接 | 第25页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第25-26页 |
| ·连接产物的转化 | 第26页 |
| ·重组子的小量制备与鉴定 | 第26-27页 |
| ·质粒 DNA 的定量技术 | 第27页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第27-28页 |
| ·酶切 | 第27页 |
| ·回收 | 第27页 |
| ·连接 | 第27页 |
| ·转化 | 第27-28页 |
| ·克隆的筛选 | 第28页 |
| 2. 结果 | 第28-32页 |
| ·SARS 冠状病毒（SARS-CoV）的非结构蛋白 Nsp14 基因的克隆 | 第28页 |
| ·酶切鉴定 | 第28-29页 |
| ·测序结果 | 第29-32页 |
| 试验二、SARS 冠状病毒非结构蛋白 Nsp14 的表达与蛋白纯化 | 第32-40页 |
| 1 材料与方法 | 第32-36页 |
| ·材料 | 第32页 |
| ·质粒和菌株 | 第32页 |
| ·酶和试剂 | 第32页 |
| ·仪器 | 第32页 |
| ·方法 | 第32-36页 |
| ·原核表达质粒的诱导表达 | 第32-33页 |
| ·SDS-PAGE 分析 | 第33-35页 |
| ·包涵体的洗涤 | 第35页 |
| ·包涵体的重折叠 | 第35页 |
| ·蛋白的纯化 | 第35-36页 |
| 2. 结果与分析 | 第36-40页 |
| ·融合蛋白的表达 | 第36-37页 |
| ·包涵体的洗涤 | 第37-38页 |
| ·蛋白的纯化 | 第38-40页 |
| 试验三、SARS 冠状病毒非结构蛋白 Nsp14 作用底物的制备 | 第40-46页 |
| 1 材料与方法 | 第40-45页 |
| ·材料 | 第40页 |
| ·方法 | 第40-45页 |
| ·转录模板的制备 | 第40-41页 |
| ·转录 | 第41页 |
| ·产物的纯化 | 第41-42页 |
| ·非变性胶的制备 | 第42-44页 |
| ·转录产物的银染检测 | 第44-45页 |
| 2 结果 | 第45-46页 |
| 讨论 | 第46-48页 |
| 结论 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-63页 |
| 附录 | 第63-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 攻读硕士期间发表论文 | 第65页 |
