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PRS基因cDNA克隆及葡萄RS基因转化胡萝卜的研究

摘要第1-10页
Abstract第10-11页
第一章 文献综述第11-16页
 1 白藜芦醇生物学作用第11-13页
   ·抗菌、抗病作用第11-12页
   ·抗氧化、抗衰老作用第12页
   ·抗肿瘤作用第12页
   ·雌激素作用第12-13页
   ·抗血小板凝聚作用第13页
 2 白藜芦醇合成的分子机理第13-14页
 3 胡萝卜的营养保健品质第14-15页
 4 转基因胡萝卜研究现状第15-16页
第二章 花生幼果cDNA文库的构建第16-31页
 1 材料与方法第16-27页
   ·实验材料第16页
   ·实验方法第16-27页
     ·材料准备第17页
     ·紫外线处理第17页
     ·总RNA提取第17-18页
     ·RNA质量检测第18页
     ·mRNA的纯化分离第18-19页
     ·cDNA第一链的合成第19页
     ·LD PCR扩增cDNA第19-20页
     ·蛋白酶消化第20-21页
     ·Sfi I酶切第21页
     ·用CHROMA SPIN~(TM)-400进行cDNA大小片段分级第21-22页
     ·ds cDNA与λTriplEx2载体的连接第22-23页
     ·文库包装第23-24页
     ·菌株培养第24页
     ·未扩增文库滴度测定和重组克隆百分比的确定第24-25页
     ·文库的扩增第25-26页
     ·扩增后文库的滴定第26-27页
 2 结果分析第27-29页
   ·花生幼果总RNA提取第27页
   ·单链和双链cDNA的合成第27-28页
   ·双链cDNA的分级第28页
   ·cDNA与载体的连接与包装第28页
   ·cDNA文库扩繁与滴度测定第28-29页
   ·PCR鉴定插入片断大小第29页
 3 讨论第29-31页
   ·花生幼果总RNA的提取第29-30页
   ·cDNA文库的质量及其可能影响因素第30-31页
第三章 利用花生幼果cDNA文库筛选RS基因cDNA第31-43页
 1 材料与方法第31-34页
   ·实验材料第31页
   ·实验方法第31-34页
     ·花生cDNA文库的准备第31页
     ·合成目的序列特异性引物与文库测序引物第31-32页
     ·cDNA文库和阳性孔噬茵体溶液的扩繁第32页
     ·PCR反应第32-33页
     ·电泳检测阳性孔第33页
     ·阳性孔噬茵体滴度测定第33页
     ·目标克隆的检出第33-34页
     ·目标克隆的转化第34页
     ·目标克隆的测序第34页
     ·基因序列比对第34页
 2 结果与分析第34-41页
   ·设计、合成引物第34-35页
   ·目标cDNA PCR扩增的模板最大稀释倍数的确定第35页
   ·cDNA文库和阳性孔噬茵体溶液的扩繁第35-36页
   ·PCR反应检测阳性克隆第36-37页
   ·目标克隆的保存和转化第37页
   ·目标克隆的鉴定第37页
   ·目标克隆的测序与分析第37-41页
 3 讨论第41-43页
   ·96孔板文库筛选的效率第41页
   ·CAG1和CAG2与RS基因多基因家族第41-43页
第四章 葡萄RS基因转化载体的构建第43-53页
 1 材料与方法第43-50页
   ·实验材料第43页
   ·实验方法第43-50页
     ·构建策略第43-44页
     ·pCB/pMD18-T-RS质粒制备第44-46页
     ·双酶切两种质粒DNA第46页
     ·目的片段回收第46页
     ·目的片段的连接第46-47页
     ·连接产物转入大肠杆菌感受态细胞第47-48页
     ·重组质粒的鉴定第48页
     ·重组质粒对农杆菌的转化(CaCl_2冻融法与电击法)第48-49页
     ·转化子的鉴定第49-50页
 2 结果与分析第50-51页
   ·pCB/pMD18-T-RS两种质粒DNA的双酶切第50页
   ·重组质粒的鉴定第50-51页
   ·转化子的鉴定第51页
 3 讨论第51-53页
   ·植物表达载体的构建第51-52页
   ·重组质粒和转化子的鉴定第52-53页
第五章 RS基因农杆菌介导的胡萝卜遗传转化第53-64页
 1 材料与方法第53-57页
   ·实验材料第53-54页
   ·实验方法第54-57页
     ·预备实验第54页
       ·基本培养基的选择第54页
       ·外植体各部分脱分化能力实验第54页
       ·胡萝卜愈伤组织对潮霉素敏感性实验第54页
       ·农杆菌EHA105对羧苄青霉素的敏感性实验第54页
       ·分化培养基的选择第54页
     ·无菌苗的获得第54页
     ·外植体的处理与愈伤的诱导第54-55页
     ·遗传转化第55页
     ·植株的再生培养第55页
     ·GUS染色第55-56页
     ·转基因植株DNA检测第56-57页
 2 结果与分析第57-62页
   ·外植体不同部分脱分化情况第57-58页
   ·不同激素水平的两种培养基对愈伤组织诱导的影响第58页
   ·胡萝卜愈伤组织对潮霉素敏感性实验结果第58-59页
   ·农杆菌EHA105对羧苄青霉素的敏感性实验结果第59页
   ·分化培养基的选择第59-60页
   ·无菌苗的获得第60页
   ·外植体的处理与愈伤的诱导第60页
   ·遗传转化第60-61页
   ·植株再生第61页
   ·GUS检测第61-62页
   ·PCR检测第62页
 3 讨论第62-64页
   ·农杆菌介导的胡萝卜遗传转化第62-64页
小结第64-65页
参考文献第65-70页
附录1 缩略词及英汉对照第70-71页
附录2 主要仪器与主要试剂第71-72页
附录3 所用试剂与缓冲液的配制第72-73页
附录4 培养基的配制第73页
附录5 常用DNA Marker图第73-74页
致谢第74页

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