| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-16页 |
| 1 白藜芦醇生物学作用 | 第11-13页 |
| ·抗菌、抗病作用 | 第11-12页 |
| ·抗氧化、抗衰老作用 | 第12页 |
| ·抗肿瘤作用 | 第12页 |
| ·雌激素作用 | 第12-13页 |
| ·抗血小板凝聚作用 | 第13页 |
| 2 白藜芦醇合成的分子机理 | 第13-14页 |
| 3 胡萝卜的营养保健品质 | 第14-15页 |
| 4 转基因胡萝卜研究现状 | 第15-16页 |
| 第二章 花生幼果cDNA文库的构建 | 第16-31页 |
| 1 材料与方法 | 第16-27页 |
| ·实验材料 | 第16页 |
| ·实验方法 | 第16-27页 |
| ·材料准备 | 第17页 |
| ·紫外线处理 | 第17页 |
| ·总RNA提取 | 第17-18页 |
| ·RNA质量检测 | 第18页 |
| ·mRNA的纯化分离 | 第18-19页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第19页 |
| ·LD PCR扩增cDNA | 第19-20页 |
| ·蛋白酶消化 | 第20-21页 |
| ·Sfi I酶切 | 第21页 |
| ·用CHROMA SPIN~(TM)-400进行cDNA大小片段分级 | 第21-22页 |
| ·ds cDNA与λTriplEx2载体的连接 | 第22-23页 |
| ·文库包装 | 第23-24页 |
| ·菌株培养 | 第24页 |
| ·未扩增文库滴度测定和重组克隆百分比的确定 | 第24-25页 |
| ·文库的扩增 | 第25-26页 |
| ·扩增后文库的滴定 | 第26-27页 |
| 2 结果分析 | 第27-29页 |
| ·花生幼果总RNA提取 | 第27页 |
| ·单链和双链cDNA的合成 | 第27-28页 |
| ·双链cDNA的分级 | 第28页 |
| ·cDNA与载体的连接与包装 | 第28页 |
| ·cDNA文库扩繁与滴度测定 | 第28-29页 |
| ·PCR鉴定插入片断大小 | 第29页 |
| 3 讨论 | 第29-31页 |
| ·花生幼果总RNA的提取 | 第29-30页 |
| ·cDNA文库的质量及其可能影响因素 | 第30-31页 |
| 第三章 利用花生幼果cDNA文库筛选RS基因cDNA | 第31-43页 |
| 1 材料与方法 | 第31-34页 |
| ·实验材料 | 第31页 |
| ·实验方法 | 第31-34页 |
| ·花生cDNA文库的准备 | 第31页 |
| ·合成目的序列特异性引物与文库测序引物 | 第31-32页 |
| ·cDNA文库和阳性孔噬茵体溶液的扩繁 | 第32页 |
| ·PCR反应 | 第32-33页 |
| ·电泳检测阳性孔 | 第33页 |
| ·阳性孔噬茵体滴度测定 | 第33页 |
| ·目标克隆的检出 | 第33-34页 |
| ·目标克隆的转化 | 第34页 |
| ·目标克隆的测序 | 第34页 |
| ·基因序列比对 | 第34页 |
| 2 结果与分析 | 第34-41页 |
| ·设计、合成引物 | 第34-35页 |
| ·目标cDNA PCR扩增的模板最大稀释倍数的确定 | 第35页 |
| ·cDNA文库和阳性孔噬茵体溶液的扩繁 | 第35-36页 |
| ·PCR反应检测阳性克隆 | 第36-37页 |
| ·目标克隆的保存和转化 | 第37页 |
| ·目标克隆的鉴定 | 第37页 |
| ·目标克隆的测序与分析 | 第37-41页 |
| 3 讨论 | 第41-43页 |
| ·96孔板文库筛选的效率 | 第41页 |
| ·CAG1和CAG2与RS基因多基因家族 | 第41-43页 |
| 第四章 葡萄RS基因转化载体的构建 | 第43-53页 |
| 1 材料与方法 | 第43-50页 |
| ·实验材料 | 第43页 |
| ·实验方法 | 第43-50页 |
| ·构建策略 | 第43-44页 |
| ·pCB／pMD18-T-RS质粒制备 | 第44-46页 |
| ·双酶切两种质粒DNA | 第46页 |
| ·目的片段回收 | 第46页 |
| ·目的片段的连接 | 第46-47页 |
| ·连接产物转入大肠杆菌感受态细胞 | 第47-48页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第48页 |
| ·重组质粒对农杆菌的转化(CaCl_2冻融法与电击法) | 第48-49页 |
| ·转化子的鉴定 | 第49-50页 |
| 2 结果与分析 | 第50-51页 |
| ·pCB／pMD18-T-RS两种质粒DNA的双酶切 | 第50页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第50-51页 |
| ·转化子的鉴定 | 第51页 |
| 3 讨论 | 第51-53页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第51-52页 |
| ·重组质粒和转化子的鉴定 | 第52-53页 |
| 第五章 RS基因农杆菌介导的胡萝卜遗传转化 | 第53-64页 |
| 1 材料与方法 | 第53-57页 |
| ·实验材料 | 第53-54页 |
| ·实验方法 | 第54-57页 |
| ·预备实验 | 第54页 |
| ·基本培养基的选择 | 第54页 |
| ·外植体各部分脱分化能力实验 | 第54页 |
| ·胡萝卜愈伤组织对潮霉素敏感性实验 | 第54页 |
| ·农杆菌EHA105对羧苄青霉素的敏感性实验 | 第54页 |
| ·分化培养基的选择 | 第54页 |
| ·无菌苗的获得 | 第54页 |
| ·外植体的处理与愈伤的诱导 | 第54-55页 |
| ·遗传转化 | 第55页 |
| ·植株的再生培养 | 第55页 |
| ·GUS染色 | 第55-56页 |
| ·转基因植株DNA检测 | 第56-57页 |
| 2 结果与分析 | 第57-62页 |
| ·外植体不同部分脱分化情况 | 第57-58页 |
| ·不同激素水平的两种培养基对愈伤组织诱导的影响 | 第58页 |
| ·胡萝卜愈伤组织对潮霉素敏感性实验结果 | 第58-59页 |
| ·农杆菌EHA105对羧苄青霉素的敏感性实验结果 | 第59页 |
| ·分化培养基的选择 | 第59-60页 |
| ·无菌苗的获得 | 第60页 |
| ·外植体的处理与愈伤的诱导 | 第60页 |
| ·遗传转化 | 第60-61页 |
| ·植株再生 | 第61页 |
| ·GUS检测 | 第61-62页 |
| ·PCR检测 | 第62页 |
| 3 讨论 | 第62-64页 |
| ·农杆菌介导的胡萝卜遗传转化 | 第62-64页 |
| 小结 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-70页 |
| 附录1 缩略词及英汉对照 | 第70-71页 |
| 附录2 主要仪器与主要试剂 | 第71-72页 |
| 附录3 所用试剂与缓冲液的配制 | 第72-73页 |
| 附录4 培养基的配制 | 第73页 |
| 附录5 常用DNA Marker图 | 第73-74页 |
| 致谢 | 第74页 |
