| 中文摘要 | 第1-7页 |
| 英文摘要 | 第7-17页 |
| 文献综述 | 第17-54页 |
| 第一章 丙型肝炎病毒的分子生物学研究进展 | 第17-54页 |
| ·引言 | 第17-18页 |
| ·丙型肝炎的流行现状、致病性与危害 | 第18-19页 |
| ·病毒的颗粒特征 | 第19-20页 |
| ·丙型肝炎病毒各区段基因组的结构和功能 | 第20-23页 |
| ·5’非编码区(5’UTR) | 第21页 |
| ·核心蛋白区 | 第21页 |
| ·包膜蛋白区 | 第21-22页 |
| ·p7 蛋白 | 第22页 |
| ·非结构蛋白 | 第22-23页 |
| ·3'非编码区(3'UTR) | 第23页 |
| ·丙型肝炎病毒囊膜蛋白的研究进展 | 第23-25页 |
| ·包膜蛋白的结构 | 第23-24页 |
| ·E2 蛋白在HCV入胞过程中的作用 | 第24页 |
| ·E2 与机体免疫反应 | 第24-25页 |
| ·丙型肝炎病毒基因的变异及分型 | 第25-29页 |
| ·HCV 的变异机制 | 第25-26页 |
| ·HCV 各基因的变异情况 | 第26页 |
| ·HCV 基因分型研究 | 第26-27页 |
| ·HCV 基因型的地理分布特点 | 第27-28页 |
| ·HCV 基因分型的方法 | 第28-29页 |
| ·HCV 的体外复制模型及感染动物模型研究 | 第29-34页 |
| ·HCV 体外复制模型 | 第29-30页 |
| ·黑猩猩 | 第30-31页 |
| ·猴 | 第31页 |
| ·树鼩 | 第31-32页 |
| ·转基因和免疫耐受人鼠嵌合肝模型 | 第32-34页 |
| ·丙型肝炎病毒感染的免疫反应 | 第34-37页 |
| ·体液免疫应答 | 第34-36页 |
| ·细胞免疫应答 | 第36-37页 |
| ·丙型肝炎预防和治疗 | 第37-40页 |
| ·干扰素(IFN) | 第37-38页 |
| ·病毒唑 | 第38页 |
| ·LAK 细胞治疗 | 第38页 |
| ·熊去氧胆酸治疗 | 第38页 |
| ·免疫调节剂 | 第38-39页 |
| ·联合用药 | 第39-40页 |
| ·中医中药 | 第40页 |
| ·丙型肝炎预防 | 第40页 |
| ·丙型肝炎疫苗研究 | 第40-47页 |
| ·重组HCV 蛋白质疫苗 | 第41页 |
| ·HCV 基因疫苗 | 第41-43页 |
| ·HCV 融合基因疫苗 | 第43-45页 |
| ·丙肝肝炎口服活菌苗 | 第45-46页 |
| ·丙肝疫苗研制面临的问题 | 第46-47页 |
| ·丙型肝炎病毒单克隆抗体(HCV-McAb)的研究 | 第47-48页 |
| ·鼠源HCV 单克隆抗体 | 第47页 |
| ·人源HCV 单克隆抗体 | 第47-48页 |
| ·HCV单克隆抗体的意义及其发展前景 | 第48页 |
| ·丙型肝炎病毒的实验室诊断研究进展 | 第48-52页 |
| ·血清抗-HCV 抗体检测 | 第49-50页 |
| ·HCV RNA检测用于HCV 感染的诊断 | 第50-51页 |
| ·HCV 抗原的检测 | 第51-52页 |
| ·丙型肝炎的研究展望 | 第52-54页 |
| ·规范分型 | 第52页 |
| ·细胞与动物模型 | 第52页 |
| ·大容量噬菌体抗体库与肽库的构建 | 第52页 |
| ·基因的表达调控 | 第52-53页 |
| ·发病机制 | 第53页 |
| ·HCV 受体 | 第53页 |
| ·治疗 | 第53页 |
| ·疫苗 | 第53-54页 |
| 试验研究 | 第54-124页 |
| 第二章 HCV 囊膜蛋白基因E1E2 的亚克隆及序列分析 | 第54-77页 |
| ·材料 | 第55-57页 |
| ·含有HCV 囊膜蛋白基因组的质粒 | 第55页 |
| ·主要试剂 | 第55页 |
| ·载体和菌种 | 第55页 |
| ·PCR 引物 | 第55页 |
| ·培养基 | 第55-57页 |
| ·主要仪器 | 第57页 |
| ·方法 | 第57-62页 |
| ·引物的设计与合成 | 第57-58页 |
| ·目的基因的扩增、纯化和回收 | 第58-59页 |
| ·纯化产物与PGEM-T easy Vector 连接 | 第59页 |
| ·新鲜感受态细胞的制备(CaCl_2 法) | 第59-60页 |
| ·连接产物的转化 | 第60页 |
| ·重组质粒的提取 | 第60-61页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第61页 |
| ·序列的计算机分析 | 第61-62页 |
| ·结果 | 第62-75页 |
| ·PCR 产物的电泳结果 | 第62页 |
| ·重组质粒的PCR 鉴定结果 | 第62-63页 |
| ·组质粒的酶切鉴定结果 | 第63页 |
| ·测序结果 | 第63-71页 |
| ·氨基酸序列分析结果 | 第71-74页 |
| ·HCV E1E2 基因编码蛋白质的理化性质分析 | 第74-75页 |
| ·讨论 | 第75-76页 |
| ·小结 | 第76-77页 |
| 第三章 逆转录病毒载体介导的HCV囊膜蛋白基因E1E2在真核细胞中的表达及动物免疫试验 | 第77-91页 |
| ·材料 | 第78-79页 |
| ·主要试剂 | 第78页 |
| ·细胞系 | 第78页 |
| ·试验动物 | 第78页 |
| ·质粒 | 第78页 |
| ·载体核菌株 | 第78页 |
| ·培养基 | 第78页 |
| ·主要仪器 | 第78-79页 |
| ·方法 | 第79-83页 |
| ·逆转录病毒表达质粒的构建 | 第79页 |
| ·逆转录病毒假病毒制备 | 第79-80页 |
| ·逆转录病毒假病毒侵染SP 2/0 细胞及抗性筛选表达细胞 | 第80-81页 |
| ·FACS 分析筛选膜表面表达E1E2 蛋白的SP 2/0 细胞 | 第81页 |
| ·表达E1E2 囊膜蛋白的 SP2/0 细胞免疫Balb/c 小鼠 | 第81页 |
| ·小鼠采血及血清分离 | 第81页 |
| ·血清抗体的检测 | 第81-82页 |
| ·血清中和抗体检测 | 第82-83页 |
| ·结果 | 第83-89页 |
| ·重组质粒的PCR 鉴定结果 | 第83页 |
| ·组质粒的酶切鉴定结果 | 第83-84页 |
| ·HCV E1E2 基因的核苷酸和相应的氨基酸序列 | 第84页 |
| ·FACS 分析检测表达E1E2 囊膜蛋白的 SP2/0 细胞 | 第84-85页 |
| ·免疫小鼠血清抗体的FACS 检测 | 第85-88页 |
| ·中和抗体检测结果 | 第88-89页 |
| ·讨论 | 第89-90页 |
| ·小结 | 第90-91页 |
| 第四章 HCV 囊膜蛋白单克隆抗体的制备 | 第91-102页 |
| ·材料 | 第92-94页 |
| ·主要试剂 | 第92-93页 |
| ·细胞系 | 第93页 |
| ·试验动物 | 第93页 |
| ·主要仪器 | 第93-94页 |
| ·方法 | 第94-98页 |
| ·免疫原的制备 | 第94页 |
| ·动物免疫 | 第94页 |
| ·骨髓瘤细胞的准备 | 第94-95页 |
| ·脾淋巴细胞的准备 | 第95页 |
| ·细胞融合与杂交瘤细胞的选择性培养 | 第95页 |
| ·阳性杂交瘤细胞的筛选 | 第95-96页 |
| ·阳性杂交瘤细胞的克隆 | 第96页 |
| ·杂交瘤细胞的冻存与复苏 | 第96-97页 |
| ·小鼠腹水的制备 | 第97页 |
| ·单抗中和活性的检测 | 第97-98页 |
| ·结果 | 第98-100页 |
| ·分泌特异单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立 | 第98-99页 |
| ·中和抗体检测结果 | 第99-100页 |
| ·讨论 | 第100-101页 |
| ·小节 | 第101-102页 |
| 第五章 丙型肝炎病毒核酸疫苗的构建及动物免疫试验 | 第102-114页 |
| ·材料 | 第103-104页 |
| ·主要试剂 | 第103页 |
| ·细胞系 | 第103页 |
| ·试验动物 | 第103页 |
| ·基因组质粒 | 第103页 |
| ·载体和菌株 | 第103-104页 |
| ·培养基 | 第104页 |
| ·主要仪器 | 第104页 |
| ·方法 | 第104-108页 |
| ·引物的设计 | 第104页 |
| ·目的基因的扩增、纯化和回收、纯化产物与PGEM-T easy Vector 连接、新鲜感受态细胞的制备(CaCl_2 法)、连接产物的转化、重组质粒的提取 | 第104页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第104-105页 |
| ·真核表达质粒的构建 | 第105页 |
| ·重组真核表达质粒转染293T 细胞 | 第105页 |
| ·FACS 分析表达E1E2 蛋白的293T 细胞 | 第105-106页 |
| ·重组真核表达质粒的大量提 | 第106-107页 |
| ·重组真核表达质粒免疫Balb/c 小鼠取 | 第107页 |
| ·免疫小鼠采血及血清分离 | 第107页 |
| ·免疫小鼠血清抗体的检测 | 第107页 |
| ·小鼠血清中和抗体的检测 | 第107-108页 |
| ·结果 | 第108-112页 |
| ·PCR 产物的电泳结果 | 第108页 |
| ·重组pGEM-T Easy载体质粒的酶切鉴定结果 | 第108-109页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定结果 | 第109页 |
| ·重组质粒的测序结果 | 第109页 |
| ·FACS 分析重组真核表达质粒转染293T 细胞瞬时表达 | 第109-110页 |
| ·免疫小鼠血清抗体的FACS 检测 | 第110-112页 |
| ·中和抗体检测结果 | 第112页 |
| ·讨论 | 第112-113页 |
| ·小节 | 第113-114页 |
| 第六章 HCV 囊膜蛋白基因E1 和E2 原核表达载体的构建及表达 | 第114-124页 |
| ·材料 | 第115-116页 |
| ·菌株和质粒 | 第115页 |
| ·酶和试剂 | 第115-116页 |
| ·阳性血清及酶标抗体 | 第116页 |
| ·主要仪器设备 | 第116页 |
| ·方法 | 第116-120页 |
| ·引物的设计与合成 | 第116-117页 |
| ·目的基因的扩增、纯化和回收、纯化产物与PGEM-T easy Vector 连接、新鲜感受态细胞的制备(CaCl_2 法)、连接产物的转化、重组质粒的提取、重组质粒的鉴定 | 第117页 |
| ·原核重组表达载体的构建与鉴定 | 第117页 |
| ·E2 基因在大肠杆菌中的表达 | 第117页 |
| ·表达蛋白的鉴定 | 第117-120页 |
| ·结果 | 第120-123页 |
| ·重组原核表达载体E1-pET32a 和E2-pET32a 的PCR鉴定 | 第120页 |
| ·重组原核表达载体E1-pET32a 和E2-pET32a 的酶切鉴定 | 第120-121页 |
| ·重组原核表达载体序列测定 | 第121页 |
| ·表达蛋白的SDS-PAGE 检测 | 第121-122页 |
| ·表达蛋白的Western blot 检测 | 第122-123页 |
| ·讨论 | 第123页 |
| ·小结 | 第123-124页 |
| 结论 | 第124-125页 |
| 参考文献 | 第125-139页 |
| 缩略词英汉对照表 | 第139-141页 |
| 致 谢 | 第141-142页 |
| 作者简介 | 第142-143页 |
