| 前言 | 第1-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-28页 |
| 1．1 磷酸戊糖途径及转酮醇酶的研究 | 第9-22页 |
| 1．1．1 磷酸戊糖途径的发现 | 第9页 |
| 1．1．2 磷酸戊糖途径的功能 | 第9-10页 |
| 1．1．3 转酮醇酶的发现 | 第10-11页 |
| 1．1．4 转酮醇酶在生物代谢中的作用 | 第11-12页 |
| 1．1．5 转酮醇酶在磷酸戊糖途径中的作用 | 第12页 |
| 1．1．6 转酮醇酶营养缺陷型 | 第12-13页 |
| 1．1．7 转酮醇酶的特性和保守序列 | 第13-15页 |
| 1．1．8 影响转酮醇酶活力的因素 | 第15-16页 |
| 1．1．9 E．coli转酮醇酶活力测定方法 | 第16-21页 |
| 1．1．10 转酮醇酶的工业应用 | 第21-22页 |
| 1．2 转酮醇酶基因的研究 | 第22-25页 |
| 1．2．1 转酮醇酶基因的研究 | 第22-23页 |
| 1．2．2 转酮醇酶基因的基因工程研究 | 第23-25页 |
| 1．3 Z．mobilis CP4 基因及其调控研究 | 第25-27页 |
| 1．3．1 Z．mobilis的简介 | 第25页 |
| 1．3．2 Z．mobilis糖代谢基因及其调控研究 | 第25-27页 |
| 1．4 本课题的研究目的、内容和技术路线 | 第27-28页 |
| 1．4．1 研究目的 | 第27页 |
| 1．4．2 研究内容 | 第27页 |
| 1．4．3 技术路线 | 第27-28页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第28-45页 |
| 2．1 实验材料 | 第28-35页 |
| 2．1．1 菌株与质粒 | 第28-29页 |
| 2．1．2 主要试剂 | 第29-30页 |
| 2．1．3 培养基及常用溶液的配方 | 第30-33页 |
| 2．1．4 蛋白质含量测定试剂 | 第33页 |
| 2．1．5 酶活测定试剂 | 第33-34页 |
| 2．1．6 PCR 反应用引物 | 第34页 |
| 2．1．7 主要设备及仪器 | 第34-35页 |
| 2．2 实验方法 | 第35-45页 |
| 2．2．1 菌株的培养 | 第35-36页 |
| 2．2．2 转酮醇酶营养缺陷型的构建 | 第36页 |
| 2．2．3 粗酶液(无细胞提取液)的制备与存储 | 第36-37页 |
| 2．2．4 蛋白质浓度测定 | 第37页 |
| 2．2．5 转酮醇酶活力测定 | 第37-39页 |
| 2．2．6 PCR 反应 | 第39-41页 |
| 2．2．7 酶切反应 | 第41页 |
| 2．2．8 电泳分析 | 第41页 |
| 2．2．9 核酸共沉剂回收DNA 片段 | 第41页 |
| 2．2．10 目的条带的回收 | 第41页 |
| 2．2．11 连接反应 | 第41-42页 |
| 2．2．12 感受态细胞的制备及转化 | 第42-43页 |
| 2．2．13 质粒的小量提取 | 第43-45页 |
| 第三章 实验结果与讨论 | 第45-64页 |
| 3．1 紫外诱变和转酮醇酶营养缺陷型菌株的筛选 | 第45-47页 |
| 3．1．1 紫外诱变和转酮醇酶营养缺陷型菌株的筛选 | 第45-46页 |
| 3．1．2 转酮醇酶营养缺陷型疑似株的酶活测定 | 第46-47页 |
| 3．2 E．coli K12 tktA 基因的克隆 | 第47-52页 |
| 3．2．1 PCR 反应克隆 E．coli K12 tktA 基因(携带自身启动子) | 第47-49页 |
| 3．2．2 pUC19-tktA 的构建 | 第49-52页 |
| 3．3 E．coli K12 tktA 基因在Z． mobilis CP4 中的表达 | 第52-64页 |
| 3．3．1 pZB1-tktA 的构建 | 第52-53页 |
| 3．3．2 pZB1-Peno-tktA 的构建 | 第53-60页 |
| 3．3．3 tktA 和Peno -tktA 在Z． mobilis CP4 中的表达 | 第60-62页 |
| 3．3．4 基因表达对细胞生长影响的初步观察 | 第62-64页 |
| 第四章 结论 | 第64-65页 |
| 4．1 结论 | 第64页 |
| 4．2 建议 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-71页 |
| 发表论文和科研情况说明 | 第71-72页 |
| 附录一:PCR 产物1物理图谱 | 第72-73页 |
| 附录二:pUC19 物理图谱 | 第73-74页 |
| 附录三:pUC19-tktA 物理图谱及其酶切电泳模拟图 | 第74-75页 |
| 附录四:pUC19-tktA 测序结果 | 第75-78页 |
| 附录五:pZB1 物理图谱 | 第78-79页 |
| 附录六:pZB1-tktA 物理图谱及其酶切电泳模拟图 | 第79-80页 |
| 附录七:PCR 产物5物理图谱 | 第80-81页 |
| 附录八:pUC19-Peno-tktA 物理图谱及其酶切电泳模拟图 | 第81-82页 |
| 附录九:Peno-tktA 测序结果 | 第82-85页 |
| 附录十:pZB1-Peno-tktA 物理图谱及其酶切电泳模拟图 | 第85-86页 |
| 致谢 | 第86页 |
