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农杆菌介导MSI-99基因转化马铃薯及其植株再生研究

中文摘要第1-8页
英文摘要第8-10页
缩略语及英汉对照第10-11页
第一部分 文献综述第11-29页
 第一章 马铃薯抗病育种现状第12-18页
  1.1 抗病毒研究第12-15页
   1.1.1 现存植物抗源第12-13页
    1.1.1.1 马铃薯病毒抗性遗传第12-13页
    1.1.1.2 抗病毒基因的利用第13页
   1.1.2 创造新型抗病毒种质第13-15页
    1.1.2.1 诱发突变第13-14页
    1.1.2.2 基因工程技术第14-15页
  1.2 抗晚疫病研究第15-17页
   1.2.1 抗晚疫病基因定位第15页
   1.2.2 通过杂交培育抗晚疫病品系第15-16页
   1.2.3 通过细胞工程技术创造抗晚疫病品系第16页
   1.2.4 通过基因工程技术创造抗晚疫病品系第16-17页
  1.3 抗细菌病害研究第17-18页
 第二章 抗微生物肽Magainin及其衍生物MSI-99第18-21页
  2.1 Magainin及其抗病分子机制第18-19页
  2.2 Magainin及其衍生物MSI-99在植物基因工程中的应用第19-21页
 第三章 植物遗传转化方法第21-28页
  3.1 农杆菌介导的植物遗传转化第21-24页
   3.1.1 根癌农杆菌介导植物遗传转化机制第21-22页
   3.1.2 根癌农杆菌介导植物遗传转化方法第22-23页
   3.1.3 根癌农杆菌介导法在单子叶植物上的应用第23-24页
   3.1.4 Ri质粒介导的植物遗传转化第24页
  3.2 基因枪法第24-25页
  3.3 化学药剂诱导转化第25页
  3.4 花粉管通道法第25-26页
  3.5 电击法第26页
  3.6 脂质体转化法第26页
  3.7 低能离子束法第26-27页
  3.8 病毒载体转化第27-28页
 第四章 研究目的与意义第28-29页
  4.1 目的第28页
  4.2 意义第28-29页
第二部分 研究报告第29-57页
 第五章 材料与方法第30-41页
  5.1 材料第30-31页
  5.2 试验方法第31-41页
   5.2.1 马铃薯再生体系的筛选第31-32页
   5.2.2 卡那霉素选择压力的确定第32-33页
    5.2.2.1 对愈伤形成的选择压力第32-33页
    5.2.2.2 对生根的选择压力第33页
   5.2.3 细菌细胞的转化及质粒的扩增、提取与酶切检测第33-36页
    5.2.3.1 DH5α感受态细胞的制备第33页
    5.2.3.2 大肠杆菌的转化第33页
    5.2.3.3 大肠杆菌质粒的微量提取与鉴定(碱法)第33-34页
    5.2.3.4 质粒的大量提取第34-35页
    5.2.3.5 农杆菌LBA4404的电转化第35页
    5.2.3.6 农杆菌质粒DNA提取与鉴定第35-36页
   5.2.4 马铃薯的转化及转化体的筛选第36-37页
   5.2.5 马铃薯基因组DNA的简易提取与PCR检测第37页
   5.2.6 PCR阳性再生植株的Southern blot分析第37-40页
    5.2.6.1 马铃薯基因组DNA大量提取第37-38页
    5.2.6.2 马铃薯基因组DNA的酶切及转膜第38-39页
    5.2.6.3 Southern杂交第39-40页
   5.2.7 转化植株的移栽及微型薯的收获第40-41页
 第六章 结果分析第41-52页
  6.1 马铃薯再生体系的筛选第41-44页
   6.1.1 叶片再生培养基第41-42页
   6.1.2 茎节间切段再生培养基第42-43页
   6.1.3 块茎切片再生培养基第43-44页
  6.2 培养基中卡那霉素的适合浓度第44-45页
   6.2.1 愈伤诱导过程中卡那霉素适合浓度第44页
   6.2.2 生根过程中卡那霉素适合筛选浓度第44-45页
  6.3 细菌转化与质粒检测第45-46页
  6.4 外植体的转化与植株再生第46页
  6.5 再生植株MSI-99基因的PCR检测第46-47页
  6.6 PCR阳性植株的Southern blot分析第47-48页
  6.7 转基因植株的移栽及微型薯的收获第48-52页
 第七章 讨论第52-57页
  7.1 培养基中的激素效应第52页
  7.2 基因型效应第52页
  7.3 外植体效应第52-53页
  7.4 抗生素对转化的影响第53-54页
  7.5 农杆菌与外植体的共培养第54-55页
  7.6 再生率与转化率第55-56页
  7.7 转基因植株表型变异第56-57页
全文结论第57-58页
参考文献第58-66页
附录Ⅰ:培养基基本成份第66-68页
附录Ⅱ:试剂第68-69页
附录Ⅲ:试验数据第69-71页
致谢第71页

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