| 第一章 文 献 综 述 | 第1-27页 |
| 1 抗 除 草 剂 基 因 工 程 研 究 概 况 | 第13-17页 |
| ·抗 除 草 剂 基 因 工 程 的 技 术 策 略 | 第14-15页 |
| ·修饰除草剂作用的靶蛋白使其对除草剂不敏感或过量表达 | 第14-15页 |
| ·引入酶或酶系统，在除草剂发挥作用前将其降解或解毒 | 第15页 |
| ·抗除草剂基因工程的应用 | 第15-16页 |
| ·将除草剂基因导入作物中培育抗除草剂作物 | 第15-16页 |
| ·利用抗除草剂基因作为遗传转化的选择标记基因 | 第16页 |
| ·抗除草剂基因在作物杂种优势及其它方面中的应用 | 第16页 |
| ·溴 苯 腈 除 草 剂 | 第16-17页 |
| ·溴苯腈 | 第16-17页 |
| ·ｂ ｘ ｎ 基 因 与 腈 水 解 酶 | 第17页 |
| 2 透明颤菌血红蛋白 | 第17-23页 |
| ·ＶＨｂ 的应用 | 第18-23页 |
| ·ＶＨｂ 与微生物基因工程 | 第18-21页 |
| ·ＶＨｂ 与植物基因工程 | 第21-23页 |
| 3 毕赤酵母表达系统研究进展 | 第23-25页 |
| 3 1 毕赤酵母表达宿主菌 | 第23-24页 |
| 3 2 毕赤酵母表达载体 | 第24-25页 |
| 3 3 外 源 蛋 白 在 毕 赤 酵 母 中 的 表 达 | 第25页 |
| 4 设 想 与 研 究 方 法 | 第25页 |
| 5 目 的 和 竟 义 | 第25-27页 |
| 第二章 ｂｘｎ 基因的突变和植物表达载体的构建及农杆菌的转化 | 第27-41页 |
| 1 实 验 材 料 | 第27页 |
| 1 1 菌 株 | 第27页 |
| 1 2有 关 的 质 粒 | 第27页 |
| 1 3 主 要 试 剂 | 第27页 |
| 2 方 法 | 第27-33页 |
| ·ＰＣＲ 扩增 | 第27-28页 |
| 2 2 培 养 基 | 第28页 |
| ·ＬＢ 培养基 | 第28页 |
| ·ＹＥＢ 培养基 | 第28页 |
| ·质粒 ＤＮＡ 的提取 | 第28-30页 |
| ·质粒 ＤＮＡ 的小量提取 | 第28-29页 |
| ·质粒 ＤＮＡ 的大量提取 | 第29-30页 |
| ·ＤＮＡ 的限制性酶切反应 | 第30页 |
| ·目的 ＤＮＡ 片段的电泳回收 | 第30-31页 |
| ·外源片段与质粒 ＤＮＡ 的连接反应 | 第31页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第31页 |
| 2 8 质 粒 Ｄ Ｎ Ａ 转化大肠杆菌 | 第31-32页 |
| ·转化子的快速筛选(ＣｒａｃｋｉｎｇＳｃｒｅｅｎ) | 第32页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备 | 第32页 |
| ·重 组 质 粒 转 入 农 杆 菌 菌 株 Ｌ Ｂ Ａ 4 4 0 4 细 胞 | 第32-33页 |
| 3 结果与分析 | 第33-39页 |
| ·ｂｘｎ 基因的回复突变 | 第33-35页 |
| ·将 ｂｘｎ 克隆进中间载体 | 第35页 |
| ·ｐＢＩ121 植物表达载体的构建 | 第35-39页 |
| ·35S引导bxn的表达载体 | 第36-37页 |
| ·ＲｕＢＰ 引导 ｂｘｎ 的表达载体 | 第37-39页 |
| ·表达载体转化农杆菌 | 第39页 |
| 4 讨 论 | 第39-40页 |
| 小 结 | 第40-41页 |
| 第三章 腈水解酶基因和透明颤菌血红蛋白基因在毕赤酵母中的表达 | 第41-57页 |
| 1 材 料 与 方 法 | 第41-48页 |
| 1 1 材 糯 | 第41-42页 |
| ·菌种和质粒 | 第41页 |
| 1 1 . 2 培 养 基 | 第41-42页 |
| 1 1 . 3 试 剂 及 仪 器 | 第42页 |
| 1 2 方 法 | 第42-48页 |
| 1 2 .1 质 粒 ＤＮＡ 的小量提取 | 第42页 |
| ·质粒 ＤＮＡ 的大量制备 | 第42页 |
| ·ＤＮＡ 的限制性酶切反应 | 第42页 |
| ·目的 ＤＮＡ 片段的电泳回收 | 第42页 |
| ·外源片段与质粒 ＤＮＡ 的连接反应 | 第42页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第42页 |
| ·质粒 ＤＮＡ 转化大肠杆菌 | 第42页 |
| ·转化子的快速筛选(ＣｒａｃｋｉｎｇＳｃｒｅｅｎ) | 第42页 |
| ·毕 赤 酵 母 感 受 态 细 胞 的 制 备 | 第42-43页 |
| ·酵 母 的 电 击 转 化 及 重 组 子 的 初 筛 | 第43页 |
| ·酵 母 重 组 子 甲 醇 利 用 型 的 确 定 | 第43页 |
| ·酵 母 重 组 子 的 直 接 Ｐ Ｃ Ｒ 检 测 | 第43-44页 |
| ·酵母总 ＤＮＡ 的 提 取 | 第44页 |
| ·初 筛 高 表 达 的 转 化 子 | 第44-45页 |
| ·酵母胞内蛋白的检测 | 第45页 |
| ·酵母分泌蛋白的电泳检测 | 第45页 |
| ·蛋白质的 ＳＤＳ 聚丙烯酰胺凝胶电泳(ＳＤＳ.ＰＡＧＥ) | 第45-47页 |
| ·腈 水 解 酶 的 活 性 检 测 | 第47页 |
| ·ＶＨｂ 的定性方法(Ｄｉｋｓｈｉｔ，Ｗｅｂｓｔｅｒ，1988) | 第47-48页 |
| ·不同供氧条件下 ＶＨｂ 对毕赤酵母生长的影响 | 第48页 |
| ·贫氧条件下重组菌 ｐＰＩＣ9Ｋ－ｖｇｂｂｘｎ 对 ｂｘｎ 的影响 | 第48页 |
| 2 结 果 与 讨 论 | 第48-55页 |
| ·实验的构建过程 | 第48-50页 |
| ·所构质粒的酶切鉴定 | 第50页 |
| ·重组分泌表达载体转化毕赤酵母及重组酵母的筛选 | 第50-51页 |
| 2 4 转 化 子 的 初 筛 | 第51-52页 |
| ·重组子的 ＰＣＲ 检测 | 第52-53页 |
| 2 6 Ｓ Ｄ Ｓ - Ｐ Ａ Ｇ Ｅ 蛋 白 检 测 | 第53页 |
| 2 7 表 达 产 物 的 生 物 活 性 检 测 | 第53-54页 |
| ·ＶＨｂ 的活性检测 | 第53-54页 |
| ·腈水解酶的活性检测 | 第54页 |
| ·贫氧条件下的菌体生长和 ｂｘｎ 表达 | 第54-55页 |
| 3 讨论 | 第55-56页 |
| 小 结 | 第56-57页 |
| 第四章 所构建的表达载体在烟草中的表达 | 第57-69页 |
| 1 材料 | 第57页 |
| 1 1 菌 株 | 第57页 |
| 1 2 植 物 | 第57页 |
| 1 3 酶 与 试 剂 | 第57页 |
| 2 方法 | 第57-63页 |
| ·烟草组培所用相关培养基 | 第57-58页 |
| 2 1 . 1 基 本 培 养 基 Ｍ Ｓ ｏ | 第57-58页 |
| 2 1 . 2 共 培 养 培 养 基 | 第58页 |
| 2 1 . 3 选 择 培 养 基 | 第58页 |
| 2 1 . 4 生 根 培 养 基 | 第58页 |
| 2 2 叶 盘 法 转 化 烟 草 外 植 体 | 第58-59页 |
| ·烟 草 无 菌 苗 的 准 备 | 第58页 |
| ·农 杆 菌 的 准 备 | 第58-59页 |
| ·烟草外植体叶盘法转化、培养及转基因植株再生 | 第59页 |
| 2 3 烟 草 基 因 组 Ｄ Ｎ Ａ 的 提 取 | 第59-61页 |
| ·ＣＴＡＢ 法 | 第59-60页 |
| 2 3 . 2 Ｓ Ｄ Ｓ 法 | 第60-61页 |
| ·转基因烟草的 ＰＣＲ 鉴定 | 第61页 |
| ·转基因烟草的除草剂抗性检测 | 第61页 |
| ·烟叶中腈水解酶活性检测 | 第61-62页 |
| 2 7 转 基 因 烟 草 叶 片 中 叶 绿 素 含 量 的 测 定 | 第62-63页 |
| 3 结 果 与 讨 论 | 第63-68页 |
| 3 1 烟 草 的 转 化 | 第63-64页 |
| 3 2 转 基 因 烟 草 的 Ｐ Ｃ Ｒ 检 测 | 第64页 |
| 3 3 转 基 因 烟 草 的 抗 性 检 测 | 第64-65页 |
| ·烟叶中腈水解酶活性检测结果 | 第65-66页 |
| ·叶绿素含量测定结果 | 第66-68页 |
| 4 讨 论 | 第68页 |
| 小结 | 第68-69页 |
| 结论 | 第69-70页 |
| 本研究创新点 | 第70-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-79页 |
| 附件 ( 基因、氨基酸序列，个人简历 ) | 第79-81页 |
