| 缩写 | 第1-7页 |
| 摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 前言 | 第9-13页 |
| 第一部分 课题目的和意义 | 第13-92页 |
| 第一章：克隆GmAttA1并在果蝇细胞表达以及重组蛋白对锥虫的活性 | 第14-31页 |
| ·材料与方法 | 第14-18页 |
| ·昆虫饲养 | 第14页 |
| ·Glossina Attacin A1基因的PCR扩增和克隆 | 第14页 |
| ·转染Drosophilla S2细胞 | 第14-15页 |
| ·从转染的S2细胞上清液中纯化recAttA1 | 第15页 |
| ·Sodalis、锥虫的培养 | 第15页 |
| ·抑锥虫浓度的确定 | 第15-16页 |
| ·recAttA1体外抑制锥虫、Sodalis和大肠杆菌活性的比较 | 第16页 |
| ·recAttA1对采采蝇健康的影响 | 第16-17页 |
| ·recAttA1体内抑制锥虫的作用 | 第17页 |
| ·常用化学品、试剂盒及DNA操作 | 第17-18页 |
| ·结果 | 第18-28页 |
| ·GmAttA1的克隆 | 第18-20页 |
| ·转染果蝇Drosophilla S2细胞及recAttA1的表达纯化 | 第20-22页 |
| ·纯化的recAttA1对锥虫的作用 | 第22-23页 |
| ·纯化的recAttA1对锥虫、Sodalis和大肠杆菌体外作用的比较 | 第23-25页 |
| ·recAttA1对采采蝇健康的影响 | 第25-26页 |
| ·血中添加recAttA1在体内对锥虫感染的影响 | 第26-28页 |
| ·讨论 | 第28-31页 |
| 第二章：recAttA1在Sodalis中的表达以及其体内阻断锥虫传播的作用 | 第31-42页 |
| ·材料与方法 | 第31-33页 |
| ·昆虫和微生物 | 第31页 |
| ·在Sodalis中表达recAttA1 | 第31页 |
| ·Western blotting分析 | 第31-32页 |
| ·recAttA1-Sodalis培养上清液对大肠杆菌、T.b.rhodesiense的体外作用 | 第32页 |
| ·recAttA1-Sodalis重新共生于采采蝇中肠及其对锥虫感染的影响 | 第32-33页 |
| ·结果 | 第33-42页 |
| ·在Sodalis中表达recAttA1 | 第33-35页 |
| ·recAttA1-Sodalis对锥虫、大肠杆菌生长的体外作用 | 第35页 |
| ·在recAttA1-Sodalis重新共生的采采蝇的锥虫感染试验 | 第35-42页 |
| 第三章：由Sodalis启动子及信号肽分泌表达的recAttA1对锥虫在唾液腺传播的影响 | 第42-60页 |
| ·材料与方法 | 第42-45页 |
| ·昆虫和微生物 | 第42页 |
| ·PCR扩增Sodalis自身启动予和信号肽序列以及产物基因 | 第42页 |
| ·构建不同质粒转化Sodalis得到的重组Sodais | 第42-43页 |
| ·荧光素酶活性的检测 | 第43页 |
| ·recAttA1-Sodalis培养上清液对大肠杆菌和锥虫的体外作用 | 第43页 |
| ·重组质料转化Sodalis的验证以及recAttA1的表达 | 第43页 |
| ·pGSA-Sodalis重新共生于采采蝇中肠以及它对寄生虫传播的影响 | 第43-44页 |
| ·统计分析 | 第44-45页 |
| ·结果 | 第45-60页 |
| ·PCR扩增和重组质粒的克隆 | 第45页 |
| ·GroE和几丁质酶启动子强度的比较以及SpaR信号肽介导表达的能力 | 第45-50页 |
| ·Sodalis SpaR和胰岛素酶信号肽效力的比较 | 第50页 |
| ·重组pGFPAttA1-Sodalis、pGSA-Sodalis和pGIA-Sodalis细胞的生长速率比较 | 第50-51页 |
| ·重组Sodalis细胞培养上清液中表达的recAttA1对锥虫和大肠杆菌的活性 | 第51-53页 |
| ·在重组pGSA-Sodalis注射的采采蝇后代中肠和唾液腺中的寄生虫感染情况 | 第53-60页 |
| 第四章：无共生菌苍蝇的产生以及共生菌和锥虫感染之间的关系 | 第60-92页 |
| ·材料与方法 | 第60-62页 |
| ·昆虫和微生物 | 第60页 |
| ·通过喂抗生素和维生素B产生无共生菌的苍蝇 | 第60页 |
| ·硫胺(维生素B1)添加试验 | 第60页 |
| ·共生菌和锥虫感染之间的关系 | 第60页 |
| ·总DNA提取 | 第60-61页 |
| ·共生菌的PCR检测 | 第61页 |
| ·统计分析 | 第61-62页 |
| ·结果 | 第62-71页 |
| ·在血中添加抗生素和维生素B对采采蝇健康的影响以及无共生细菌苍蝇的产生 | 第62页 |
| ·硫胺(维生素B1)添加试验 | 第62-63页 |
| ·Wigglesworthia和锥虫感染的关系 | 第63-64页 |
| ·Sodalis和锥虫感染的关系 | 第64-66页 |
| ·Wolbachia与锥虫感染的关系 | 第66-67页 |
| ·共生菌和锥虫感染的关系 | 第67-71页 |
| ·讨论 | 第71-76页 |
| 小结 | 第76-78页 |
| 参考文献 | 第78-92页 |
| 第二部分：随机序列八肽库的构建及利用酵母双杂交系统筛选β-内酰胺酶的结合蛋白 | 第92-109页 |
| 摘要 | 第93-94页 |
| Abstract | 第94-95页 |
| 前言 | 第95-97页 |
| ·材料与方法 | 第97-99页 |
| ·材料 | 第97页 |
| ·随机序列寡核苷酸链的扩增 | 第97页 |
| ·寡核苷酸片段的回收 | 第97-98页 |
| ·质粒的操作 | 第98页 |
| ·诱饵质粒的构建 | 第98-99页 |
| ·结果 | 第99-107页 |
| ·用PCR方法扩增寡核苷酸片段 | 第99页 |
| ·变性温度与时间 | 第99页 |
| ·复性温度与时间 | 第99-100页 |
| ·延伸温度与时间 | 第100页 |
| ·循环数 | 第100-101页 |
| ·寡核苷酸双链DNA的回收及与载体pGAD424的连接 | 第101页 |
| ·随机序列多肽库的建立及保存 | 第101-103页 |
| ·诱饵质粒的构建 | 第103-104页 |
| ·双杂交系统筛选 | 第104-105页 |
| ·序列测定 | 第105-107页 |
| ·讨论 | 第107-109页 |
| 参考文献 | 第109-111页 |
| 学习期间发表论文 | 第111-113页 |
| 论文 | 第111页 |
| 综述 | 第111页 |
| 参加会议 | 第111页 |
| 登记序列 | 第111页 |
| 已投搞 | 第111-113页 |
| 致谢 | 第113页 |
