| 主要英文缩写词表 | 第1-14页 |
| 第一部分 文献综述 | 第14-50页 |
| 一. 载脂蛋白E | 第14-33页 |
| (一) apoE基因结构 | 第14-16页 |
| (二) apoE蛋白结构 | 第16-21页 |
| (三) apoE蛋白的生物合成 | 第21-22页 |
| (四) apoE受体 | 第22-24页 |
| (五) apoE的生理功能 | 第24-30页 |
| (六) apoE多态性 | 第30-31页 |
| (七) apoE多态性与疾病 | 第31-33页 |
| 二. APOE与动脉粥样硬化 | 第33-40页 |
| (一) 动脉粥样硬化的病理特征 | 第34-35页 |
| (二) apoE对动脉粥样硬化发生的阻抑作用 | 第35-38页 |
| (三) apoE抗动脉粥样硬化发生的可能机制 | 第38-40页 |
| 三. APOE与阿尔茨海默氏症 | 第40-48页 |
| (一) AD的病理学特征 | 第41-42页 |
| (二) apoE与晚发和散发性AD | 第42-47页 |
| (三) AD的防治策略 | 第47-48页 |
| 四. 本研究的目的意义 | 第48-50页 |
| 第二部分 材料与方法 | 第50-65页 |
| 一. 实验材料 | 第50-52页 |
| 二. 实验方法 | 第52-65页 |
| (一) pQE30-apoE3重组质粒的构建 | 第52-56页 |
| (二) 工程菌的表达及产物鉴定 | 第56-58页 |
| (三) apoE3重组蛋白的分离纯化 | 第58-59页 |
| (四) apoE3重组蛋白理化性质及体外活性分析 | 第59-60页 |
| (五) apoE3重组蛋白对Aβ诱导的神经元细胞生存力下降的拮抗作用 | 第60-62页 |
| (六) apoE3重组蛋白对平滑肌细胞增殖的抑制作用 | 第62-63页 |
| (七) pcDNA3-apoE3质粒的构建 | 第63页 |
| (八) Aβ多肽对pcDNA3-apoE3转染的神经成纤维胶质瘤细胞的作用 | 第63-65页 |
| 第三部分 结果与分析 | 第65-83页 |
| 一. 重组表达质粒的构建 | 第65-68页 |
| (一) 人肝组织和脑组织RNA的提取 | 第65页 |
| (二) apoE3 cDNA的RT-PCR扩增 | 第65-66页 |
| (三) TOPO-apoE3克隆载体的构建 | 第66-67页 |
| (四) pQE(30)-apoE3重组表达质粒的构建 | 第67-68页 |
| 二. 基因工程菌的表达及表达产物的鉴定 | 第68-72页 |
| (一) 大肠杆菌特征鉴定 | 第68页 |
| (二) 抗生素抗性鉴定 | 第68页 |
| (三) 重组质粒在工程菌中的诱导表达 | 第68-69页 |
| (四) apoE3重组蛋白在基因工程菌中表达条件的优化 | 第69-71页 |
| (五) 工程菌表达产物免疫印迹分析 | 第71-72页 |
| 三. 重组蛋白分离纯化 | 第72-74页 |
| (一) apoE3重组蛋白表达形式分析 | 第72-73页 |
| (二) pQE(30)-apoE3／BL21工程菌的发酵表达 | 第73页 |
| (三) apoE3重组蛋白的分离纯化 | 第73-74页 |
| (四) 纯化的重组蛋白的后处理 | 第74页 |
| 四. ApoE3重组蛋白理化性质及体外分子活性分析 | 第74-76页 |
| (一) apoE3重组蛋白的电泳纯度分析 | 第74-75页 |
| (二) apoE3重组蛋白的HPLC分析 | 第75页 |
| (三) apoE3重组蛋白分子量测定 | 第75页 |
| (四) apoE3纯化蛋白免疫印迹分析 | 第75-76页 |
| (五) apoE3重组蛋白与Aβ1-40结合活性分析 | 第76页 |
| 五. APOE3重组蛋白对AB多肽诱导的神经元细胞生存力下降的拮抗作用 | 第76-80页 |
| (一) Aβ 25-35多肽对胎鼠大脑皮质神经细胞的神经毒作用 | 第76-77页 |
| (二) apoE3对Aβ 25-35多肽诱导的胎鼠大脑皮质神经细胞生存力下降的拮抗作用 | 第77-78页 |
| (三) apoE3对Aβ 25-35多肽诱导的神经成纤维胶质瘤细胞生存力下降的拮抗作用 | 第78-79页 |
| (四) apoE3对Aβ1-40多肽诱导的神经成纤维胶质瘤细胞生存力下降的拮抗作用 | 第79-80页 |
| 六. APOE3重组蛋白对平滑肌细胞增殖的抑制作用 | 第80-81页 |
| (一) 平滑肌细胞的鉴定 | 第80页 |
| (二) apoE3重组蛋白对平滑肌细胞增殖的抑制作用 | 第80-81页 |
| 七. PcDNA3-APOE3质粒的构建 | 第81-82页 |
| 八. AB25-35多肽对PCDNA3-APOE3转染的神经成纤维胶质瘤细胞的作用 | 第82-83页 |
| (一) 转染的神经成纤维胶质瘤细胞表达的apoE3蛋白的免疫荧光鉴定 | 第82页 |
| (二) Aβ25-35对转染的神经成纤维胶质瘤细胞的作用 | 第82-83页 |
| 第四部分 讨论 | 第83-97页 |
| 一. 人体组织中总RNA的提取及MRNA的分离 | 第83-84页 |
| 二. APOE cDNA片段的制备 | 第84-85页 |
| 三. pQE(30)载体表达的外源蛋白表达条件的优化 | 第85页 |
| 四. pQE(30)载体表达的外源蛋白的纯化策略 | 第85-86页 |
| 五. AB多肽对神经元细胞的神经毒性分析 | 第86-88页 |
| 六. APOE3与AB多肽的结合分析 | 第88-89页 |
| 七. 影响神经细胞及平滑肌细胞原代培养的因素分析 | 第89-91页 |
| 八. 脂质体技术对真核表达载体转染的影响 | 第91-92页 |
| 九. APOE3对AD细胞模型的作用机制分析 | 第92-94页 |
| 十. APOE3对平滑肌细胞增殖抑制作用的机制分析 | 第94-96页 |
| 十一. 展望 | 第96-97页 |
| 第五部分 结论 | 第97-98页 |
| 参考文献 | 第98-126页 |
| 致谢 | 第126-127页 |
| 附录 | 第127页 |
