| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| 前言 | 第12-24页 |
| 1 本研究的背景 | 第12-13页 |
| 2 本研究的目的与意义 | 第13-14页 |
| 3 氨肽酶N的研究进展 | 第14-20页 |
| ·氨肽酶N的结构 | 第15-17页 |
| ·一级结构 | 第15页 |
| ·二维结构 | 第15-16页 |
| ·晶体结构 | 第16-17页 |
| ·氨肽酶N在动物组织中的分布特点 | 第17页 |
| ·氨肽酶N的生理功能 | 第17-20页 |
| ·氨肽酶N的蛋白水解功能 | 第18-19页 |
| ·氨肽酶N的信号传导与免疫调节功能 | 第19页 |
| ·氨肽酶N的其他功能 | 第19-20页 |
| 4 肠道黏膜氨肽酶N的研究进展 | 第20-24页 |
| ·肠道黏膜氨肽酶N在动物肠道的表达特征 | 第20-21页 |
| ·肠道黏膜氨肽酶N的功能 | 第21-24页 |
| ·肠道黏膜氨肽酶N与食物蛋白质的消化 | 第21-22页 |
| ·肠道黏膜氨肽酶N与肠道疾病及其营养调控 | 第22-23页 |
| ·肠道黏膜氨肽酶N作为细胞表面受体 | 第23-24页 |
| 第一章 草鱼氨肽酶N基因的克隆及生物信息学分析 | 第24-42页 |
| 1 材料 | 第24-25页 |
| ·实验动物 | 第24页 |
| ·实验仪器 | 第24-25页 |
| ·主要试剂 | 第25页 |
| ·引物合成及DNA测序 | 第25页 |
| 2 实验方法 | 第25-34页 |
| ·总RNA的制备 | 第25-26页 |
| ·APN基因中间片段的克隆 | 第26-30页 |
| ·引物设计 | 第26页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第26-27页 |
| ·PCR扩增 | 第27页 |
| ·PCR扩增片段回收 | 第27-28页 |
| ·pGM-T载体快速连接 | 第28页 |
| ·转化 | 第28-29页 |
| ·PCR阳性鉴定及送检测序 | 第29-30页 |
| ·APN基因3’克隆 | 第30-31页 |
| ·引物设计 | 第30页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第30页 |
| ·巢式PCR | 第30-31页 |
| ·PCR产物验证、回收纯化、连接、转化和PCR阳性鉴定及送检测序 | 第31页 |
| ·APN基因5’克隆 | 第31-33页 |
| ·引物设计 | 第31页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第31页 |
| ·cDNA的纯化 | 第31-32页 |
| ·cDNA 3’端加Poly(A)尾 | 第32页 |
| ·巢式PCR | 第32-33页 |
| ·PCR产物验证、回收纯化、连接、转化和PCR阳性鉴定及送检测序 | 第33页 |
| ·APN基因全序列拼接 | 第33页 |
| ·APN生物信息学分析 | 第33-34页 |
| 3 结果 | 第34-40页 |
| ·APN cDNA全长序列 | 第34-36页 |
| ·APN核酸及氨基酸同源性分析 | 第36-37页 |
| ·APN基因系统进化分析 | 第37页 |
| ·APN蛋白生物信息学分析 | 第37-40页 |
| 4 讨论 | 第40-42页 |
| 第二章 草鱼氨肽酶N基因时空表达分析 | 第42-52页 |
| 1 材料 | 第42-44页 |
| ·实验组织材料 | 第42-43页 |
| ·实验仪器 | 第43-44页 |
| ·主要试剂 | 第44页 |
| ·引物合成及DNA测序 | 第44页 |
| 2 实验方法 | 第44-46页 |
| ·引物设计 | 第44页 |
| ·总RNA的提取 | 第44页 |
| ·cDNA第一链合成 | 第44页 |
| ·PCR检测APN基因是否在各组织表达 | 第44-45页 |
| ·Real-Time荧光定量PCR反应 | 第45-46页 |
| ·数据处理 | 第46页 |
| 3 结果 | 第46-48页 |
| ·引物特异性和扩增效率检测 | 第46-47页 |
| ·草鱼不同发育时期APN基因表达的变化 | 第47页 |
| ·草鱼不同组织的APN基因表达差异 | 第47页 |
| ·草鱼肠道APN基因表达的昼夜节律 | 第47-48页 |
| 4 讨论 | 第48-52页 |
| 第三章 蛋白源和蛋白水平对草鱼肠道氨肽酶N基因表达的影响 | 第52-59页 |
| 1 材料 | 第53页 |
| ·实验动物和饲料原料 | 第53页 |
| ·实验仪器 | 第53页 |
| ·主要试剂 | 第53页 |
| ·引物合成 | 第53页 |
| 2 实验方法 | 第53-55页 |
| ·实验饲料设计 | 第53页 |
| ·饲养实验 | 第53页 |
| ·引物设计 | 第53页 |
| ·总RNA的提取 | 第53-54页 |
| ·cDNA第一链合成 | 第54页 |
| ·Real-Time荧光定量PCR | 第54页 |
| ·数据处理 | 第54-55页 |
| 3 结果 | 第55-56页 |
| ·不同蛋白源对草鱼肠道组织APN mRNA表达的影响 | 第55页 |
| ·不同蛋白水平对草鱼肠道组织APN mRNA表达的影响 | 第55-56页 |
| 4 讨论 | 第56-59页 |
| 结论 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-68页 |
| 附录A | 第68-69页 |
| 附录B | 第69-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 作者简介 | 第71页 |
