| 中文摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-13页 |
| 文献综述 | 第13-34页 |
| 前言 | 第34-36页 |
| 研究一、猪传染性胸膜肺炎放线杆菌生物Ⅰ型 PCR 诊断方法的建立 | 第36-47页 |
| 1 材料 | 第37-39页 |
| ·菌株及病料 | 第37-38页 |
| ·主要试剂 | 第38-39页 |
| ·寡核苷酸引物 | 第39页 |
| ·主要仪器设备 | 第39页 |
| 2 方法 | 第39-41页 |
| ·细菌的最佳培养时间 | 第39页 |
| ·细菌基因组DNA 提取 | 第39-40页 |
| ·PCR 方法的建立 | 第40页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第40页 |
| ·PCR 方法的特异性 | 第40页 |
| ·PCR 方法的敏感性 | 第40-41页 |
| ·临床样品的检测 | 第41页 |
| 3 结果 | 第41-45页 |
| ·细菌的最佳培养时间 | 第41-42页 |
| ·PCR 方法的特异性 | 第42-43页 |
| ·PCR 方法的敏感性 | 第43-44页 |
| ·临床样品的检测 | 第44-45页 |
| 4 讨论 | 第45-47页 |
| 研究二、猪胸膜肺炎放线杆菌 ApxⅣ N 端重组蛋白的表达与纯化 | 第47-59页 |
| 1 材料 | 第48-49页 |
| ·菌株及病料 | 第48页 |
| ·主要试剂 | 第48-49页 |
| ·寡核苷酸引物 | 第49页 |
| ·主要仪器设备 | 第49页 |
| 2 方法 | 第49-54页 |
| ·PCR 模板的制备 | 第49-50页 |
| ·apxⅣ963 bp 片段的扩增 | 第50页 |
| ·PCR 产物的回收与纯化 | 第50页 |
| ·质粒的提取 | 第50-51页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第51页 |
| ·PCR 产物及质粒的酶切 | 第51-52页 |
| ·连接反应 | 第52页 |
| ·转化 | 第52页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第52页 |
| ·测序 | 第52页 |
| ·诱导表达 | 第52-53页 |
| ·SDS-PAGE | 第53页 |
| ·Western blot | 第53-54页 |
| ·重组蛋白的可溶性分析 | 第54页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第54页 |
| 3 结果 | 第54-57页 |
| ·PCR 产物及质粒的酶切 | 第54-55页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定及测序 | 第55页 |
| ·重组蛋白的表达及可溶性分析 | 第55-56页 |
| ·Western blot 鉴定 | 第56页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第56-57页 |
| 4 讨论 | 第57-59页 |
| 研究三、猪胸膜肺炎放线杆菌 ApxIV 单克隆抗体的制备及初步应用 | 第59-72页 |
| 1 材料 | 第61-62页 |
| ·动物、病料、和细胞 | 第61页 |
| ·培养基及主要试剂 | 第61页 |
| ·主要仪器及设备 | 第61-62页 |
| 2 方法 | 第62-67页 |
| ·抗原的制备 | 第62页 |
| ·动物免疫 | 第62页 |
| ·rApxⅣ-ELISA 方法操作程序 | 第62-63页 |
| ·rApxⅣ-ELISA 最佳抗原包被量和血清稀释度的选择 | 第63页 |
| ·骨髓瘤细胞SP2/0 的制备 | 第63页 |
| ·饲养细胞的制备 | 第63页 |
| ·脾淋巴细胞的准备 | 第63-64页 |
| ·细胞融合 | 第64页 |
| ·杂交瘤的筛选 | 第64页 |
| ·杂交瘤的克隆化(有限稀释法)及建株 | 第64-65页 |
| ·单克隆抗体的生产和效价测定 | 第65页 |
| ·单抗稳定性的检测 | 第65页 |
| ·单克隆抗体类鉴定 | 第65页 |
| ·单克隆抗体抗原表位的鉴定 | 第65-66页 |
| ·单克隆抗体纯化 | 第66页 |
| ·mAb 的生物素标记及效价的测定 | 第66页 |
| ·双抗体夹心ELISA 方法的建立 | 第66-67页 |
| ·双抗体夹心ELISA 方法临界值的确定 | 第67页 |
| ·双抗体夹心ELISA 方法临床应用 | 第67页 |
| 3 结果 | 第67-70页 |
| ·抗原的制备 | 第67页 |
| ·rApxⅣ-ELISA 最佳抗原包被量和血清稀释度确定 | 第67页 |
| ·细胞融合 | 第67-68页 |
| ·杂交瘤的筛选及稳定性检测 | 第68页 |
| ·单克隆抗体的生产和效价的测定 | 第68页 |
| ·单克隆抗体类的鉴定 | 第68页 |
| ·单克隆抗体抗原表位的鉴定 | 第68页 |
| ·单克隆抗体的纯化 | 第68-69页 |
| ·IgG 的biotin 标记 | 第69页 |
| ·双抗体夹心ELISA 方法的建立 | 第69页 |
| ·双抗体夹心ELISA 方法临界值的确定 | 第69页 |
| ·双抗体夹心ELISA 方法临床应用 | 第69-70页 |
| 4 讨论 | 第70-72页 |
| 全文总结 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-78页 |
| 致谢 | 第78页 |
