| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 第一部分 文献综述 | 第10-23页 |
| 1.热激蛋白概述 | 第10-12页 |
| ·热激蛋白的种类、分布 | 第10-11页 |
| ·热激蛋白的基因表达调节 | 第11-12页 |
| ·转录水平调节 | 第11页 |
| ·植物基因的启动子概述 | 第11-12页 |
| 2 HSP70s的结构及功能概述 | 第12-15页 |
| 3 Hsp70分子伴侣的核苷交换因子 | 第15-23页 |
| ·GrpE:细菌Hsp70的NEF | 第16页 |
| ·真核生物Hsp70 NEFs的发现 | 第16-19页 |
| ·真核生物Hsp70的NEFs表现出不同的功能 | 第19-20页 |
| ·Hsp70 NEFs的作用机制:来自结构学和生物化学方面的研究 | 第20-21页 |
| ·Hsp70 NEFs的研究前景 | 第21-23页 |
| 第二部分 实验论文 | 第23-35页 |
| 1 实验材料 | 第23-25页 |
| 2 实验方法 | 第25-35页 |
| ·质粒提取与转化 | 第25-26页 |
| ·质粒的酶切、回收和连接 | 第26页 |
| ·植物表达载体的农杆菌转化及转化子的筛选 | 第26-28页 |
| ·拟南芥突变体种子的耐逆性分析 | 第28页 |
| ·拟南芥AtFes1-1基因启动子的克隆与与元件分析 | 第28-29页 |
| ·拟南芥AtFes1-1基因启动子的GUS表达分析 | 第29-30页 |
| ·Western杂交 | 第30-31页 |
| ·RT-PCR | 第31-32页 |
| ·酵母双杂交检测蛋白互作 | 第32-33页 |
| ·AtFes1-1蛋白的ATPase活性和NEF活性检测 | 第33-34页 |
| ·AtFes1-1蛋白缺尾突变分析 | 第34-35页 |
| 第三部分 结果与分析 | 第35-55页 |
| 1 拟南芥突变体种子的耐逆性分析 | 第35-37页 |
| 2 AtFes1-1基因启动子的克隆与元件分析 | 第37-39页 |
| 3 拟南芥AtFes1-1基因启动子的GUS表达分析 | 第39-44页 |
| ·拟南芥AtFes1-1启动子-GUS-pBI 101表达载体的构建 | 第39-40页 |
| ·转AtFes1-1启动子-GUS-pBI 101表达载体拟南芥的PCR鉴定 | 第40-41页 |
| ·热胁迫条件下GUS在转基因拟南芥中的组织特异性表达 | 第41-43页 |
| ·盐胁迫、H_2O_2、干旱和低温胁迫条件下转基因拟南芥的GUS染色分析 | 第43-44页 |
| 4 AtFes1-1蛋白的Western分析结果 | 第44-46页 |
| ·不同突变体中AtFes1-1蛋白表达情况 | 第44页 |
| ·AtFes1-1蛋白的热诱导表达分析 | 第44-45页 |
| ·AtFes1-1蛋白蛋白的发育性表达分析 | 第45-46页 |
| ·种子萌发过程中HSP70蛋白的表达情况 | 第46页 |
| 5 RT-PCR结果分析 | 第46-48页 |
| ·PCR扩增检测1784突变体的基因敲除情况 | 第46-47页 |
| ·PCR扩增检测信号通路中各种基因的表达情况 | 第47-48页 |
| 6 酵母双杂交结果 | 第48-51页 |
| ·酵母AtFes1-1-pACT2载体的构建结果 | 第48-49页 |
| ·转基因酵母细胞的Western杂交检测 | 第49-51页 |
| 7 AtFes1-1蛋白的ATPase活性和NEF活性检测 | 第51-53页 |
| ·不同核苷酸相对位置的确定 | 第51-52页 |
| ·核苷交换实验和ATPase实验 | 第52-53页 |
| 8 AtFes1-1蛋白缺尾突变分析 | 第53-55页 |
| ·Fes1类蛋白的序列比对结果 | 第53页 |
| ·AtFes1-1蛋白缺尾植物表达载体的构建 | 第53-54页 |
| ·转AtFes1-1缺尾蛋白拟南芥的获得 | 第54页 |
| ·转基因拟南芥的分子鉴定及功能研究(将要) | 第54-55页 |
| 第四部分 讨论 | 第55-57页 |
| 参考文献 | 第57-65页 |
| 致谢 | 第65页 |
