| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-26页 |
| 1 动物转基因技术研究现状 | 第10-24页 |
| ·动物转基因技术的方法 | 第10-12页 |
| ·动物转基因的表达与调控 | 第12-15页 |
| ·家鸡转基因研究现状 | 第15-24页 |
| ·家鸡转基因的表达载体 | 第15-17页 |
| ·家鸡多能细胞 | 第17-20页 |
| ·输卵管组织特异性表达的调控元件 | 第20-22页 |
| ·激素和卵清蛋白基因的调控作用 | 第22页 |
| ·家鸡转基因技术的应用前景 | 第22-24页 |
| ·家鸡转基因技术存在的问题 | 第24页 |
| 2 研究目标与技术路线 | 第24-26页 |
| 第二章 改进种蛋开窗方法提高家鸡转基因技术 | 第26-42页 |
| 1 材料与方法 | 第26-29页 |
| ·材料 | 第26页 |
| ·方法 | 第26-29页 |
| 2 结果与分析 | 第29-37页 |
| ·种蛋开窗后不注射胚的孵化率 | 第29-36页 |
| ·种蛋开窗后注射胚的孵化率 | 第36-37页 |
| 3 讨论 | 第37-40页 |
| ·开窗是导致种蛋孵化率下降的主要因素 | 第38-39页 |
| ·种蛋开窗方法的改进 | 第39-40页 |
| 4 小结 | 第40-42页 |
| 第三章 以慢病毒为载体转染囊胚细胞和原生殖细胞的转基因家鸡 | 第42-56页 |
| 1 材料与方法 | 第42-45页 |
| ·材料 | 第42页 |
| ·方法 | 第42-45页 |
| ·利用 Gateway技术构建绿色荧光蛋白基因慢病毒表达载体 | 第42-44页 |
| ·慢病毒载体转染体外培养的囊胚细胞 | 第44-45页 |
| ·慢病毒载体转染种蛋内囊胚细胞和原生殖细胞 | 第45页 |
| ·转基因产物的PCR和荧光检测 | 第45页 |
| 2 结果与分析 | 第45-52页 |
| ·慢病毒载体的PCR检测及载体滴度的测定 | 第45-48页 |
| ·在体外培养囊胚细胞中表达的绿色荧光蛋白基因 | 第48页 |
| ·慢病毒载体转染未孵化种蛋囊胚所产生的转基因鸡胚 | 第48-49页 |
| ·慢病毒载体转染发育鸡胚中原生殖细胞产生的转基因家鸡 | 第49-52页 |
| 3 讨论 | 第52-55页 |
| ·慢病毒载体及其 Gateway构建技术 | 第52-53页 |
| ·囊胚细胞转染和原生殖细胞转染两种家鸡转基因方法的比较 | 第53-55页 |
| 4 小结 | 第55-56页 |
| 第四章 逆转录病毒载体转染睾丸细胞的转基因家鸡 | 第56-68页 |
| 1 材料与方法 | 第56-59页 |
| ·材料 | 第56页 |
| ·方法 | 第56-59页 |
| ·通过射线辐照使公鸡的睾丸不育 | 第56-57页 |
| ·逆转录病毒载体的构建 | 第57-58页 |
| ·逆转录病毒对体外培养睾丸细胞的感染及检测 | 第58-59页 |
| ·转染的睾丸细胞移植入不育公鸡的睾丸 | 第59页 |
| 2 结果 | 第59-65页 |
| ·绿色荧光蛋白基因在体外培养睾丸细胞中的表达 | 第59-63页 |
| ·转染睾丸细胞中逆转录病毒启动子区域的CpG甲基化分析 | 第63-64页 |
| ·移植转染睾丸细胞后产生转基因精子的公鸡 | 第64-65页 |
| 3 讨论 | 第65-67页 |
| 4 小结 | 第67-68页 |
| 第五章 人促红细胞生成素基因家鸡输卵管组织特异性表达载体的构建 | 第68-88页 |
| 1 材料与方法 | 第68-74页 |
| ·材料 | 第68页 |
| ·方法 | 第68-74页 |
| ·家鸡输卵管组织特异性启动子的克隆 | 第68-70页 |
| ·人促红细胞生成素基因的克隆 | 第70-71页 |
| ·人促红细胞生成素基因输卵管特异性表达载体的构建 | 第71-73页 |
| ·构建的表达载体转染家鸡原代输卵管上皮细胞 | 第73-74页 |
| 2 结果 | 第74-84页 |
| ·克隆基因的PCR扩增、酶切与测序鉴定 | 第74-81页 |
| ·hEPO基因家鸡输卵管组织特异性表达载体的酶切鉴定 | 第81-82页 |
| ·三种表达载体在鸡原代输卵管上皮细胞中的表达 | 第82-84页 |
| 3 讨论 | 第84-86页 |
| ·OV基因5’端调控序列及hEPO基因的调控元件 | 第84-86页 |
| ·GFP、hEPO基因的共表达及其检测方法 | 第86页 |
| 4 小结 | 第86-88页 |
| 第六章 结论 | 第88-90页 |
| 1 研究结果 | 第88-89页 |
| 2 创新点 | 第89页 |
| 3 展望 | 第89-90页 |
| 参考文献 | 第90-99页 |
| 符号表 | 第99-100页 |
| 致谢 | 第100-101页 |
| 作者简历 | 第101-103页 |
