| 摘要 | 第10-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 第一章 前言 | 第13-21页 |
| 1.1 菊花白色锈病概述 | 第13-14页 |
| 1.2 WRKY转录因子研究进展 | 第14-19页 |
| 1.2.1 WRKY转录因子的结构及分类 | 第14页 |
| 1.2.2 WRKY转录因子在生物胁迫中的作用 | 第14-16页 |
| 1.2.3 WRKY转录因子的抗病作用途径 | 第16-18页 |
| 1.2.4 WRKY转录因子在菊花中研究进展 | 第18-19页 |
| 1.3 研究目的意义 | 第19-20页 |
| 1.4 技术路线 | 第20-21页 |
| 第二章 菊花CmWRKY15-1 基因的克隆及表达分析 | 第21-33页 |
| 2.1 材料、试剂及仪器 | 第21页 |
| 2.1.1 试验材料 | 第21页 |
| 2.1.2 试验试剂 | 第21页 |
| 2.1.3 试验仪器 | 第21页 |
| 2.1.4 培养基的配制 | 第21页 |
| 2.2 试验方法 | 第21-25页 |
| 2.2.1 菌液的制备及植物材料处理 | 第21-22页 |
| 2.2.2 引物设计 | 第22页 |
| 2.2.3 菊花总RNA的提取 | 第22-23页 |
| 2.2.4 cDNA第一链的合成 | 第23页 |
| 2.2.5 普通PCR扩增 | 第23-24页 |
| 2.2.6 PCR产物回收与纯化 | 第24页 |
| 2.2.7 目的片段与载体连接及转化大肠杆菌 | 第24-25页 |
| 2.2.8 菌液PCR鉴定 | 第25页 |
| 2.2.9 生物信息学分析 | 第25页 |
| 2.2.10 实时荧光定量PCR | 第25页 |
| 2.3 结果与分析 | 第25-31页 |
| 2.3.1 菊花总RNA的提取 | 第25-26页 |
| 2.3.2 cDNA质量检测 | 第26页 |
| 2.3.3 菊花CmWRKY15-1 基因的序列分析 | 第26-28页 |
| 2.3.4 CmWRKY15-1 蛋白质结构预测及进化树分析 | 第28-30页 |
| 2.3.5 CmWRKY15-1 在白色锈病病原菌诱导下表达特异性分析 | 第30-31页 |
| 2.4 讨论与小结 | 第31-33页 |
| 2.4.1 讨论 | 第31-32页 |
| 2.4.2 小结 | 第32-33页 |
| 第三章 遗传转化及转基因植株的鉴定 | 第33-43页 |
| 3.1 材料、试剂及仪器 | 第33页 |
| 3.1.1 试验材料 | 第33页 |
| 3.1.2 试验试剂 | 第33页 |
| 3.1.3 试验仪器 | 第33页 |
| 3.1.4 培养基的配制 | 第33页 |
| 3.2 试验方法 | 第33-35页 |
| 3.2.1 菌液的制备 | 第33-34页 |
| 3.2.2 预培养时间的确定 | 第34页 |
| 3.2.3 菌液浓度的确定 | 第34页 |
| 3.2.4 侵染时间的确定 | 第34页 |
| 3.2.5 共培养时间的确定 | 第34页 |
| 3.2.6 延迟培养时间的确定 | 第34页 |
| 3.2.7 筛选培养 | 第34页 |
| 3.2.8 转基因植株的分子鉴定 | 第34-35页 |
| 3.3 结果与分析 | 第35-42页 |
| 3.3.1 预培养时间的确定 | 第35-36页 |
| 3.3.2 菌液浓度的确定 | 第36-37页 |
| 3.3.3 侵染时间的确定 | 第37-38页 |
| 3.3.4 共培养时间的确定 | 第38-39页 |
| 3.3.5 延迟培养时间的确定 | 第39页 |
| 3.3.6 抗性植株的获得 | 第39-40页 |
| 3.3.7 转基因植株的鉴定 | 第40-42页 |
| 3.4 讨论与小结 | 第42-43页 |
| 3.4.1 讨论 | 第42页 |
| 3.4.2 小结 | 第42-43页 |
| 第四章 菊花CmWRKY15-1 基因的功能验证 | 第43-48页 |
| 4.1 材料、试剂及仪器 | 第43页 |
| 4.1.1 试验材料 | 第43页 |
| 4.1.2 试验试剂 | 第43页 |
| 4.1.3 试验仪器 | 第43页 |
| 4.2 试验方法 | 第43-44页 |
| 4.2.1 转基因菊花接种白色锈病病原菌后表型鉴定 | 第43页 |
| 4.2.2 病情调查 | 第43-44页 |
| 4.2.3 转基因植株中PR1、PDF1.2基因的表达分析 | 第44页 |
| 4.3 结果与分析 | 第44-47页 |
| 4.3.1 转基因菊花接种白色锈病病原菌后表型鉴定 | 第44-45页 |
| 4.3.2 转基因菊花及野生型菊花接种白色锈病病原菌后病情统计 | 第45页 |
| 4.3.3 转基因植株中PR1、PDF1.2基因的表达分析 | 第45-47页 |
| 4.4 讨论与小结 | 第47-48页 |
| 4.4.1 讨论 | 第47页 |
| 4.4.2 小结 | 第47-48页 |
| 第五章 结论 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |
