| 致谢 | 第1-10页 |
| 英文缩略词 | 第10-11页 |
| 摘要 | 第11-13页 |
| Abstract | 第13-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-31页 |
| ·前言 | 第15-16页 |
| ·多肽类生物活性物质的非核糖体合成机理 | 第16-21页 |
| ·非核糖体肽类(NRP)合成过程 | 第16-17页 |
| ·非核糖体和核糖体机制的区别 | 第17-19页 |
| ·非核糖体肽合酶(NRPS)核心域的结构与功能 | 第19-21页 |
| ·A结构域 | 第19页 |
| ·PCP结构域 | 第19-20页 |
| ·C结构域 | 第20-21页 |
| ·T结构域 | 第21页 |
| ·芽孢杆菌产生的非核糖体肽类抗生素研究概况 | 第21-27页 |
| ·芽孢杆菌源非核糖体肽及相关基因簇研究概况 | 第21-26页 |
| ·表面活性素超家族 | 第21-23页 |
| ·丰原素超家族 | 第23-24页 |
| ·伊枯菌素超家族 | 第24-25页 |
| ·多粘菌素家族 | 第25-26页 |
| ·脂肽类化合物的抗菌机理研究 | 第26-27页 |
| ·基于NRPS/PKS挖掘隐蔽型天然产物生物合成基因簇 | 第27-30页 |
| ·本课题的主要研究内容 | 第30-31页 |
| 第二章 脂肽类抗生素pelgipeptins的分离、纯化及结构鉴定 | 第31-61页 |
| ·前言 | 第31-32页 |
| ·材料 | 第32-33页 |
| ·菌株 | 第32页 |
| ·主要试剂 | 第32页 |
| ·主要培养基 | 第32-33页 |
| ·主要仪器 | 第33页 |
| ·方法 | 第33-38页 |
| ·单因素实验方法对产抗发酵条件的研究 | 第33-36页 |
| ·不同碳源对菌株B69产抗能力的影响 | 第34页 |
| ·不同氮源对菌株B69产抗能力的影响 | 第34页 |
| ·碳源、氮源浓度优化实验 | 第34-35页 |
| ·微量元素成分及浓度的优化实验 | 第35页 |
| ·确定培养基的最佳起始pH | 第35页 |
| ·确定培养条件中的最佳温度 | 第35页 |
| ·不同诱导物对菌株B69产抗能力的影响 | 第35-36页 |
| ·扩大规模的发酵罐发酵工艺 | 第36页 |
| ·产抗物质的分离纯化工艺 | 第36-37页 |
| ·粗提物的制备 | 第36页 |
| ·初步分离纯化 | 第36页 |
| ·HPLC分离纯化 | 第36-37页 |
| ·样品纯度分析 | 第37页 |
| ·纯品的制备 | 第37页 |
| ·脂肽类抗菌化合物的结构鉴定 | 第37-38页 |
| ·ESI-CID-MS分析 | 第37-38页 |
| ·核磁共振技术分析 | 第38页 |
| ·结果与分析 | 第38-57页 |
| ·B69菌株产抗条件优化研究 | 第38-44页 |
| ·Pelgipeptins抗生素的分离纯化 | 第44-45页 |
| ·粗纯 | 第44-45页 |
| ·精纯 | 第45页 |
| ·Pelgipeptins抗生素的结构鉴定 | 第45-57页 |
| ·Pelgipeptins的分子量测定 | 第45-48页 |
| ·Pelgipeptin A结构推断 | 第48-49页 |
| ·Pelgipeptin B结构推断 | 第49-51页 |
| ·Pelgipeptin C结构推断 | 第51-54页 |
| ·Pelgipeptin D结构推断 | 第54-57页 |
| ·讨论 | 第57-58页 |
| ·本章小结 | 第58-61页 |
| 第三章 脂肽类抗生素pelgipeptins的生物活性测定 | 第61-79页 |
| ·前言 | 第61页 |
| ·材料 | 第61-63页 |
| ·指示菌 | 第61-62页 |
| ·革兰氏阳性菌 | 第61-62页 |
| ·革兰氏阴性菌 | 第62页 |
| ·真菌 | 第62页 |
| ·实验动物 | 第62页 |
| ·主要试剂 | 第62-63页 |
| ·主要培养基 | 第63页 |
| ·主要器材 | 第63页 |
| ·方法 | 第63-67页 |
| ·抗生素抑菌活性的测定 | 第63页 |
| ·细菌的MIC测定 | 第63-64页 |
| ·丝状真菌MIC测定方法 | 第64页 |
| ·植物体内抗菌实验 | 第64-66页 |
| ·药剂制备及处理 | 第65页 |
| ·盘栽实验 | 第65-66页 |
| ·药效计算 | 第66页 |
| ·小鼠急毒实验 | 第66页 |
| ·时间杀菌曲线 | 第66页 |
| ·外膜通透性实验 | 第66-67页 |
| ·结果与分析 | 第67-76页 |
| ·Pelgipeptins体外抗菌活性 | 第67-70页 |
| ·植物保护实验 | 第70-71页 |
| ·小鼠急毒实验 | 第71-72页 |
| ·杀菌曲线 | 第72-75页 |
| ·外膜通透性实验 | 第75-76页 |
| ·讨论 | 第76-77页 |
| ·本章小结 | 第77-79页 |
| 第四章 基于全基因组序列挖掘pelgipeptins合成基因簇 | 第79-99页 |
| ·前言 | 第79-80页 |
| ·材料 | 第80-81页 |
| ·菌株 | 第80页 |
| ·主要试剂 | 第80页 |
| ·主要培养基 | 第80-81页 |
| ·主要仪器 | 第81页 |
| ·方法 | 第81-87页 |
| ·细菌基因组DNA的提取 | 第81-82页 |
| ·聚合酶链式反应(PCR) | 第82-83页 |
| ·PCR引物 | 第82页 |
| ·PCR扩增 | 第82-83页 |
| ·电泳验证 | 第83页 |
| ·TA克隆 | 第83-85页 |
| ·感受态细胞制备 | 第83页 |
| ·DNA凝胶回收目的DNA条带 | 第83-84页 |
| ·目的片段与T载体连接 | 第84页 |
| ·转化实验 | 第84-85页 |
| ·转化子的挑选及鉴定 | 第85页 |
| ·B69菌株的基因组测序工作 | 第85-87页 |
| ·测序大致流程 | 第85-86页 |
| ·基因组信息分析大致流程 | 第86-87页 |
| ·Plp基因簇分析 | 第87页 |
| ·结果与讨论 | 第87-97页 |
| ·PCR搜寻潜在NRPS,PKS基因簇资源 | 第87-89页 |
| ·B69基因组草图 | 第89-90页 |
| ·Plp基因簇的组成概况分析 | 第90-97页 |
| ·Plp基因簇核心域分析 | 第92-94页 |
| ·plp基因簇中N端C domain的分析 | 第94-95页 |
| ·plpA基因编码L-2,4二氨基丁酸的合成 | 第95-96页 |
| ·plpB基因编码胞外脂肪分解酶 | 第96页 |
| ·plpC基因编码磷酸泛酰巯基乙胺转移酶 | 第96-97页 |
| ·plp核心编码区下游基因编码ABC转移酶 | 第97页 |
| ·Pelgipeptins生物合成过程假说 | 第97页 |
| ·本章小结 | 第97-99页 |
| 第五章 plp基因簇的功能验证 | 第99-121页 |
| ·前言 | 第99-100页 |
| ·材料 | 第100-102页 |
| ·菌株 | 第100页 |
| ·主要试剂 | 第100-101页 |
| ·主要培养基 | 第101-102页 |
| ·主要仪器 | 第102页 |
| ·方法 | 第102-109页 |
| ·细菌基因组DNA的提取 | 第102页 |
| ·聚合酶链式反应(PCR) | 第102-103页 |
| ·PCR引物 | 第102-103页 |
| ·PCR扩增 | 第103页 |
| ·重组质粒的构建 | 第103-105页 |
| ·PCR产物及质粒的酶切 | 第103-104页 |
| ·酶切产物电泳并割胶回收 | 第104页 |
| ·目的DNA片段与质粒的连接 | 第104页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第104页 |
| ·转化实验 | 第104页 |
| ·转化子的挑选及鉴定 | 第104页 |
| ·小批量质粒DNA的抽提 | 第104-105页 |
| ·双酶切及测序 | 第105页 |
| ·工程菌的诱导表达 | 第105页 |
| ·SDS-PAGE电泳检测蛋白的表达 | 第105-106页 |
| ·扩大规模的发酵罐发酵 | 第106-107页 |
| ·重组蛋白的分离纯化技术 | 第107页 |
| ·蛋白浓度的测定 | 第107-108页 |
| ·A域底物特异性测定方法 | 第108-109页 |
| ·结果与分析 | 第109-118页 |
| ·plpD-A1基因克隆、表达及底物特异性测定 | 第109-114页 |
| ·plpD-A1基因克隆 | 第109-110页 |
| ·pET-28a-plpD-A1重组质粒的构建 | 第110-111页 |
| ·工程菌pET-28a-plpD-A1/BL21(DE3)的诱导表达 | 第111-113页 |
| ·PlpD-A1蛋白的分离纯化 | 第113页 |
| ·PlpD-A1蛋白底物特异性分析 | 第113-114页 |
| ·plpE-Al基因克隆、表达及底物特异性测定 | 第114-116页 |
| ·plpE-A1基因克隆及重组质粒的构建 | 第114-115页 |
| ·pET-28a-plpE-A1/BL21(DE3)的诱导表达及plpE-A1的分离纯化 | 第115页 |
| ·PlpE-A1蛋白底物特异性分析 | 第115-116页 |
| ·plpE-A4基因克隆、表达及底物特异性测定 | 第116-118页 |
| ·plpE-A4基因克隆及重组质粒的构建 | 第116-117页 |
| ·pET-28a-plpE-A4/BL21(DE3)诱导表达及PlpE-A4域的分离纯化 | 第117页 |
| ·PlpE-A4蛋白底物特异性分析 | 第117-118页 |
| ·讨论 | 第118-119页 |
| ·本章小结 | 第119-121页 |
| 第六章 全文总结及后续工作建议 | 第121-125页 |
| ·全文总结 | 第121-122页 |
| ·本文创新点 | 第122页 |
| ·后续工作建议 | 第122-125页 |
| 参考文献 | 第125-131页 |
| 作者简历 | 第131页 |
