| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-15页 |
| 英文缩写注释 | 第15-17页 |
| 前言 | 第17-22页 |
| 第一章 缺血后适应对大鼠心肌缺血-再灌注损伤的保护作用及其对CREB和Mipu1表达的影响 | 第22-41页 |
| ·材料与方法 | 第23-30页 |
| ·材料 | 第23-24页 |
| ·实验动物 | 第23页 |
| ·抗体 | 第23页 |
| ·其它主要试剂 | 第23页 |
| ·主要仪器 | 第23-24页 |
| ·Real-time PCR所用引物 | 第24页 |
| ·方法 | 第24-30页 |
| ·动物模型制备 | 第24-25页 |
| ·动物实验分组 | 第25-26页 |
| ·大鼠血清心肌酶学检测 | 第26页 |
| ·心肌组织TTC染色 | 第26页 |
| ·Westem-blot分析心肌组织CREB和Mipu1蛋白表达 | 第26-27页 |
| ·心肌组织蛋白的提取 | 第26页 |
| ·蛋白质浓度的测定 | 第26-27页 |
| ·Western-blot免疫印迹分析 | 第27页 |
| ·Western-blot条带的灰度扫描及其定量分析 | 第27页 |
| ·实时荧光定量RCR(Real-time fluorescence quantitativePCR) | 第27-29页 |
| ·心肌组织总RNA的提取 | 第27-28页 |
| ·逆转录聚合酶链反应(RT) | 第28页 |
| ·实时荧光定量RCR(Real-time quantitative PCR) | 第28-29页 |
| ·生物信息学数据分析 | 第29页 |
| ·统计学分析 | 第29-30页 |
| ·实验结果 | 第30-37页 |
| ·心肌缺血后适应对大鼠心肌缺血-再灌注损伤的保护作用 | 第30-32页 |
| ·大鼠心肌缺血后适应对Mipu1表达的影响 | 第32-34页 |
| ·Mipu1基因启动子区的转录因子结合元件分析 | 第34-35页 |
| ·大鼠心肌缺血后适应对磷酸化CREB表达的影响 | 第35-37页 |
| ·分析与讨论 | 第37-40页 |
| ·大鼠心肌缺血后适应对心肌缺血-再灌注损伤的保护作用 | 第37-38页 |
| ·大鼠心肌缺血后适应导致心肌中Mipu1和p-CREB的表达明显上调 | 第38-40页 |
| ·结论 | 第40-41页 |
| 第二章 心肌细胞缺氧后适应时CREB对Mipu1的转录调控 | 第41-60页 |
| ·材料与方法 | 第42-50页 |
| ·材料 | 第42-43页 |
| ·主要试剂 | 第42页 |
| ·主要仪器 | 第42页 |
| ·其他试剂材料与仪器(同前) | 第42页 |
| ·构建不同片段的报告质粒所用引物 | 第42-43页 |
| ·方法 | 第43-50页 |
| ·高糖/低糖DMEM培养基的配制 | 第43-44页 |
| ·H_2O_2浓度测定 | 第44页 |
| ·细胞总蛋白的提取 | 第44页 |
| ·细胞总RNA提取 | 第44-45页 |
| ·无氧气相环境的制备 | 第45-46页 |
| ·H9c2心肌细胞缺氧后适应模型的制备 | 第46页 |
| ·荧光素酶报告质粒的构建 | 第46-47页 |
| ·脂质体介导的瞬时转染 | 第47-48页 |
| ·染色质免疫共沉淀分析(ChlP) | 第48-49页 |
| ·双荧光素酶报告基因分析 | 第49页 |
| ·其他材料方法同前 | 第49页 |
| ·统计学分析 | 第49-50页 |
| ·实验结果 | 第50-57页 |
| ·缺氧后适应上调H9c2细胞中Mipu1 mRNA的表达 | 第50-51页 |
| ·缺氧后适应上调H9c2细胞中p-CREB的表达 | 第51-52页 |
| ·缺氧后适应所致H9c2细胞中Mipu1表达的上调与PKA通路活化有关 | 第52-54页 |
| ·Mipu1启动子区功能性CRE的鉴定 | 第54-55页 |
| ·改变CREB表达水平对Mipu1启动子活性和Mipu1 mRNA表达的影响 | 第55-57页 |
| ·分析与讨论 | 第57-59页 |
| ·结论 | 第59-60页 |
| 第三章 CREB调控Mipu1表达对心肌细胞氧化应激损伤的影响及在缺氧后适应所致心肌细胞保护中的作用 | 第60-80页 |
| ·材料与方法 | 第61-63页 |
| ·材料 | 第61页 |
| ·主要试剂 | 第61页 |
| ·主要仪器 | 第61页 |
| ·其他试剂材料与仪器同前 | 第61页 |
| ·方法 | 第61-63页 |
| ·流式细胞仪(FCM)检测心肌细胞凋亡率 | 第61-62页 |
| ·Hoechst33342染色观察凋亡细胞胞核 | 第62页 |
| ·其他实验方法同前 | 第62页 |
| ·统计学分析 | 第62-63页 |
| ·实验结果 | 第63-77页 |
| ·CREB调控的Mipu1表达对氧化应激所致心肌细胞损伤的保护作用 | 第63-70页 |
| ·对氧化应激所致细胞存活率和LDH释放的影响 | 第63-66页 |
| ·对氧化应激所致细胞凋亡的影响 | 第66-70页 |
| ·CREB调控的Mipu1表达在缺氧后适应所致心肌细胞保护中的作用 | 第70-77页 |
| ·对细胞存活率和LDH释放的影响 | 第70-73页 |
| ·对细胞凋亡发生的影响 | 第73-77页 |
| ·分析与讨论 | 第77-79页 |
| ·结论 | 第79-80页 |
| 总结论 | 第80-81页 |
| 参考文献 | 第81-93页 |
| 综述 | 第93-107页 |
| 参考文献 | 第100-107页 |
| 攻读学位期间主要成果 | 第107-108页 |
| 致谢 | 第108-109页 |
