| 中文摘要 | 第1-19页 |
| ABSTRACT | 第19-23页 |
| 第一章 综述 | 第23-34页 |
| ·中心蛋白简介 | 第23-30页 |
| ·中心蛋白的功能 | 第23-26页 |
| ·中心蛋白的结构 | 第26-30页 |
| ·中心蛋白聚集现象 | 第30-32页 |
| ·本课题研究的意义 | 第32-34页 |
| 第二章 八肋游仆虫中心蛋白突变体的构建、表达和纯化 | 第34-53页 |
| ·引言 | 第34-35页 |
| ·材料 | 第35-41页 |
| ·菌种与质粒 | 第35页 |
| ·寡核苷酸 | 第35-36页 |
| ·主要酶及生化试剂 | 第36页 |
| ·主要试剂的配制 | 第36-40页 |
| ·主要仪器设备 | 第40-41页 |
| ·方法 | 第41-48页 |
| ·重组质粒(pGEM-T-easy-EoCen)的提取和鉴定 | 第41页 |
| ·全分子单酪氨酸突变体重组质粒(pGEM-T-easy-M-EoCen)的构建 | 第41-46页 |
| ·N-端半分子单酪氨酸突变体重组质粒(pGEM-T-easy-M-N-EoCen)的构建 | 第46页 |
| ·N-端半分子双酪氨酸突变体重组质粒(pGEM-T-easy-M-N-EoCen')的构建 | 第46-47页 |
| ·融合蛋白的表达 | 第47-48页 |
| ·实验结果 | 第48-52页 |
| ·重组质粒(pGEM-T-easy-EoCen)的提取和鉴定 | 第48-49页 |
| ·突变重组质粒的酶切鉴定及序列测定结果 | 第49-51页 |
| ·重组菌的诱导表达及纯化 | 第51-52页 |
| ·讨论 | 第52页 |
| ·结论 | 第52-53页 |
| 第三章 金属离子诱导的八肋游仆虫中心蛋白聚集性质研究 | 第53-74页 |
| ·引言 | 第53-54页 |
| ·材料 | 第54页 |
| ·主要试剂 | 第54页 |
| ·主要仪器 | 第54页 |
| ·方法 | 第54-56页 |
| ·Lu~(3+)储备液的配制 | 第54页 |
| ·TNS储备液的配制 | 第54-55页 |
| ·蛋白储备液的制备 | 第55页 |
| ·蛋白浓度的测定 | 第55-56页 |
| ·天然胶电泳(Native PAGE)分析 | 第56页 |
| ·荧光共振光散射光谱的测定 | 第56页 |
| ·荧光发射光谱的测定 | 第56页 |
| ·蛋白化学交联分析 | 第56页 |
| ·实验结果 | 第56-69页 |
| ·化学交联分析 | 第56-59页 |
| ·天然胶电泳分析 | 第59-60页 |
| ·温度对蛋白聚集过程的影响 | 第60-62页 |
| ·蛋白浓度对聚集过程的影响 | 第62页 |
| ·不同金属离子结合对蛋白聚集过程的影响 | 第62-64页 |
| ·TNS对蛋白聚集过程的影响 | 第64-67页 |
| ·离子强度对蛋白聚集过程的影响 | 第67-68页 |
| ·酸度对蛋白聚集过程的影响 | 第68-69页 |
| ·讨论 | 第69-73页 |
| ·影响蛋白聚集的因素以及聚集过程中的主导作用力 | 第69-71页 |
| ·Self-Assembly的准确定义 | 第71-73页 |
| ·结论 | 第73-74页 |
| 第四章 酪氨酸残基在八肋游仆虫中心蛋白聚集以及荧光共振能量转移中的作用 | 第74-103页 |
| ·引言 | 第74-76页 |
| ·材料 | 第76页 |
| ·主要试剂 | 第76页 |
| ·主要仪器 | 第76页 |
| ·方法 | 第76-80页 |
| ·Tb~(3+)储备液的配制 | 第76-77页 |
| ·TNS储备液的配制 | 第77页 |
| ·蛋白储备液的制备 | 第77-78页 |
| ·蛋白浓度的测定 | 第78页 |
| ·天然胶电泳分析 | 第78页 |
| ·圆二色谱的测定 | 第78页 |
| ·荧光寿命的测定 | 第78-79页 |
| ·荧光发射光谱的测定 | 第79页 |
| ·酪氨酸残基与蛋白N端结合的Tb~(3+)之间的Foster能量转移 | 第79-80页 |
| ·动力学测定 | 第80页 |
| ·分子模拟 | 第80页 |
| ·荧光共振光散射光谱的测定 | 第80页 |
| ·蛋白化学交联分析 | 第80页 |
| ·实验结果 | 第80-96页 |
| ·定点突变对蛋白结构的影响 | 第80-82页 |
| ·N-EoCen以及六个突变体蛋白与Tb~(3+)的结合 | 第82-84页 |
| ·酪氨酸残基与蛋白N端结合的Tb~(3+)之间距离的计算 | 第84页 |
| ·蛋白N端半分子双酪氨酸突变体的荧光参数的测定 | 第84-86页 |
| ·酪氨酸残基的微环境 | 第86-87页 |
| ·TNS检测蛋白的构象变化 | 第87-88页 |
| ·蛋白N端半分子单酪氨酸突变体的分子模拟 | 第88-90页 |
| ·荧光动力学 | 第90-94页 |
| ·蛋白全长分子单酪氨酸突变体的聚集 | 第94-96页 |
| ·讨论 | 第96-101页 |
| ·Tyr-79在FRET过程中的重要作用 | 第96-98页 |
| ·Tyr-79在蛋白聚集过程中的重要作用 | 第98-100页 |
| ·Tyr-72在FRET过程中的作用 | 第100-101页 |
| ·结论 | 第101-103页 |
| 第五章 有丝分裂纺锤体抑制剂Monastrol对八肋游仆虫中心蛋白聚集性质的影响 | 第103-119页 |
| ·引言 | 第103-104页 |
| ·材料 | 第104-105页 |
| ·主要试剂 | 第104页 |
| ·主要仪器 | 第104-105页 |
| ·方法 | 第105-107页 |
| ·Lu~(3+)储备液和Tb~(3+)储备液的配制 | 第105页 |
| ·TNS储备液的配制 | 第105页 |
| ·蛋白储备液的制备 | 第105页 |
| ·蛋白浓度的测定 | 第105页 |
| ·Monastrol及其两个类似物的合成 | 第105页 |
| ·荧光共振光散射光谱的测定 | 第105-106页 |
| ·荧光发射光谱的测定 | 第106页 |
| ·转化大肠杆菌细胞菌体浓度的测定 | 第106页 |
| ·八肋游仆虫的培养 | 第106-107页 |
| ·实验结果与讨论 | 第107-118页 |
| ·Monastrol对八肋游仆虫增殖分裂的影响 | 第107页 |
| ·Monastrol对转化大肠杆菌细胞菌体生长的影响 | 第107-108页 |
| ·Monastrol对Lu~(3+)诱导的蛋白聚集的影响 | 第108-109页 |
| ·Monastrol类似物对Lu~(3+)诱导的蛋白聚集的影响 | 第109-113页 |
| ·Monastrol与EoCen结合的主导作用力 | 第113-117页 |
| ·Monastrol在EoCen上的结合位点 | 第117-118页 |
| ·结论 | 第118-119页 |
| 第六章 蜂毒素对八肋游仆虫中心蛋白聚集性质影响初步分析 | 第119-127页 |
| ·引言 | 第119-120页 |
| ·材料 | 第120页 |
| ·主要试剂 | 第120页 |
| ·主要仪器 | 第120页 |
| ·方法 | 第120-121页 |
| ·Lu~(3+)储备液的配制 | 第120页 |
| ·蜂毒素储备液的配制 | 第120页 |
| ·蛋白储备液的制备 | 第120-121页 |
| ·蛋白浓度的测定 | 第121页 |
| ·荧光发射光谱的测定 | 第121页 |
| ·荧光共振光散射光谱的测定 | 第121页 |
| ·实验结果与讨论 | 第121-126页 |
| ·中心蛋白与蜂毒素结合 | 第121-125页 |
| ·蜂毒素对Lu~(3+)诱导的蛋白聚集过程的影响 | 第125-126页 |
| ·结论 | 第126-127页 |
| 第七章 总结与展望 | 第127-129页 |
| ·引言 | 第127页 |
| ·工作总结 | 第127-128页 |
| ·工作展望 | 第128-129页 |
| 参考文献 | 第129-141页 |
| 附录 | 第141-143页 |
| 攻读博士学位期间主要发表和待发表的论文 | 第143-145页 |
| 致谢 | 第145-146页 |
| 个人简况及联系方式 | 第146-148页 |
