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两种对虾新发病毒核酸检测技术的建立及应用

摘要第5-8页
abstract第8-10页
第一章 引言第13-20页
    1.1 虾类病毒性偷死病(Viral covert mortality disease,VCMD)概述第13-16页
        1.1.1 虾类偷死野田村病毒(Covert mortality virus,CMNV)的发现与鉴定第13-14页
        1.1.2 VCMD在国内外的流行第14-15页
        1.1.3 CMNV的自然宿主和媒介生物第15-16页
    1.2 病原分子生物学检测技术概况第16-20页
        1.2.1 聚合酶链式反应第16-17页
        1.2.2 实时荧光定量PCR反应第17-18页
        1.2.3 环介导等温扩增技术第18-20页
第二章 基于TaqMan探针的CMNV real-time RT-PCR检测方法的建立第20-36页
    2.1 材料和方法第20-24页
        2.1.1 对虾样品的采集第20-21页
        2.1.2 RNA提取和纯化第21页
        2.1.3 引物和探针的设计第21页
        2.1.4 TaqMan RT-qPCR的条件优化第21-22页
        2.1.5 TaqMan RT-qPCR的分析特异性第22-23页
        2.1.6 TaqMan RT-qPCR分析的标准曲线和分析灵敏度第23页
        2.1.7 TaqMan RT-qPCR对临床样品进行评价分析第23页
        2.1.8 TaqMan RT-qPCR的可重复性第23-24页
    2.2 结果第24-34页
        2.2.1 TaqMan RT-qPCR检测的条件优化第24-28页
        2.2.2 TaqMan RT-qPCR检测方法的分析特异性第28页
        2.2.3 基于DNA模板的TaqMan RT-qPCR检测方法的标准曲线第28-29页
        2.2.4 基于RNA模板的TaqMan RT-qPCR检测方法的标准曲线第29-30页
        2.2.5 TaqMan RT-qPCR检测方法的分析灵敏度第30-31页
        2.2.6 TaqMan RT-qPCR检测方法的可重复性第31-32页
        2.2.7 TaqMan RT-qPCR检测方法的临床应用第32-34页
    2.3 小结第34-36页
第三章 基于LAMP技术的对虾偷死野田村病毒现场快速高灵敏度检测试剂盒的评价第36-45页
    3.1 材料和方法第37-39页
        3.1.1 核酸、病料样品及实验动物第37页
        3.1.2 对虾样品总RNA的提取第37-38页
        3.1.3 对虾CMNV LAMP检测试剂盒使用方法第38页
        3.1.4 试剂盒性能参数的评价第38-39页
    3.2 结果第39-43页
        3.2.1 分析特异性(ASp)实验结果第39-40页
        3.2.2 分析灵敏度(ASe)实验结果第40-41页
        3.2.3 诊断特异性(DSp)和诊断灵敏度(DSe)实验结果第41页
        3.2.4 重复性实验结果第41-42页
        3.2.5 稳定性实验结果第42-43页
    3.3 小结第43-45页
第四章 行动障碍野田村病毒(Movement disorder nodavirus,MDNV)的实时荧光逆转录LAMP(RT-LAMP)检测方法的建立及应用第45-59页
    4.1 实验材料与方法第45-50页
        4.1.1 MDNV的病料来源第45-46页
        4.1.2 MDNV的引物设计第46页
        4.1.3 MDNV质粒标准品的制备第46页
        4.1.4 MDNV RNA标准品的制备第46-48页
        4.1.5 MDNV的RT-LAMP反应体系第48-49页
        4.1.6 MDNV的RT-LAMP条件优化第49-50页
        4.1.7 MDNV的质粒标准品和RNA标准品标准曲线的建立第50页
        4.1.8 RT-LAMP的分析特异性检验第50页
        4.1.9 RT-LAMP的分析灵敏度检验第50页
    4.2 结果第50-57页
        4.2.1 MDNV的RT-LAMP条件优化第50-53页
        4.2.2 分析特异性检测结果第53-54页
        4.2.3 分析灵敏度实验第54-55页
        4.2.4 基于DNA模板的标准曲线的建立第55-56页
        4.2.5 基于RNA模板的标准曲线的建立第56-57页
    4.3 小结第57-59页
第五章 2016-2017年我国沿海省市虾类偷死野田村病(CMNV)分子流行病学调查第59-73页
    5.1 材料与方法第60-66页
        5.1.1 样品来源第60-61页
        5.1.2 RNA提取和纯化第61-62页
        5.1.3 利用RT-nPCR方法检测样品中CMNV第62-63页
        5.1.4 利用RT-LAMP方法检测样品中CMNV和MDNV第63-65页
        5.1.5 利用TaqMan RT-qPCR方法检测样品中CMNV第65-66页
        5.1.6 样品阳性检出率计算第66页
    5.2 结果第66-70页
        5.2.1 CMNV在不同虾类中的阳性率分析第66-67页
        5.2.2 CMNV和MDNV的年度阳性检出率分析第67-68页
        5.2.3 2016 ~2017年度CMNV的流行区域分析第68-70页
    5.3 讨论第70-73页
参考文献第73-80页
附录第80-81页
致谢第81页

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