| 摘要 | 第5-8页 |
| abstract | 第8-10页 |
| 第一章 引言 | 第13-20页 |
| 1.1 虾类病毒性偷死病(Viral covert mortality disease,VCMD)概述 | 第13-16页 |
| 1.1.1 虾类偷死野田村病毒(Covert mortality virus,CMNV)的发现与鉴定 | 第13-14页 |
| 1.1.2 VCMD在国内外的流行 | 第14-15页 |
| 1.1.3 CMNV的自然宿主和媒介生物 | 第15-16页 |
| 1.2 病原分子生物学检测技术概况 | 第16-20页 |
| 1.2.1 聚合酶链式反应 | 第16-17页 |
| 1.2.2 实时荧光定量PCR反应 | 第17-18页 |
| 1.2.3 环介导等温扩增技术 | 第18-20页 |
| 第二章 基于TaqMan探针的CMNV real-time RT-PCR检测方法的建立 | 第20-36页 |
| 2.1 材料和方法 | 第20-24页 |
| 2.1.1 对虾样品的采集 | 第20-21页 |
| 2.1.2 RNA提取和纯化 | 第21页 |
| 2.1.3 引物和探针的设计 | 第21页 |
| 2.1.4 TaqMan RT-qPCR的条件优化 | 第21-22页 |
| 2.1.5 TaqMan RT-qPCR的分析特异性 | 第22-23页 |
| 2.1.6 TaqMan RT-qPCR分析的标准曲线和分析灵敏度 | 第23页 |
| 2.1.7 TaqMan RT-qPCR对临床样品进行评价分析 | 第23页 |
| 2.1.8 TaqMan RT-qPCR的可重复性 | 第23-24页 |
| 2.2 结果 | 第24-34页 |
| 2.2.1 TaqMan RT-qPCR检测的条件优化 | 第24-28页 |
| 2.2.2 TaqMan RT-qPCR检测方法的分析特异性 | 第28页 |
| 2.2.3 基于DNA模板的TaqMan RT-qPCR检测方法的标准曲线 | 第28-29页 |
| 2.2.4 基于RNA模板的TaqMan RT-qPCR检测方法的标准曲线 | 第29-30页 |
| 2.2.5 TaqMan RT-qPCR检测方法的分析灵敏度 | 第30-31页 |
| 2.2.6 TaqMan RT-qPCR检测方法的可重复性 | 第31-32页 |
| 2.2.7 TaqMan RT-qPCR检测方法的临床应用 | 第32-34页 |
| 2.3 小结 | 第34-36页 |
| 第三章 基于LAMP技术的对虾偷死野田村病毒现场快速高灵敏度检测试剂盒的评价 | 第36-45页 |
| 3.1 材料和方法 | 第37-39页 |
| 3.1.1 核酸、病料样品及实验动物 | 第37页 |
| 3.1.2 对虾样品总RNA的提取 | 第37-38页 |
| 3.1.3 对虾CMNV LAMP检测试剂盒使用方法 | 第38页 |
| 3.1.4 试剂盒性能参数的评价 | 第38-39页 |
| 3.2 结果 | 第39-43页 |
| 3.2.1 分析特异性(ASp)实验结果 | 第39-40页 |
| 3.2.2 分析灵敏度(ASe)实验结果 | 第40-41页 |
| 3.2.3 诊断特异性(DSp)和诊断灵敏度(DSe)实验结果 | 第41页 |
| 3.2.4 重复性实验结果 | 第41-42页 |
| 3.2.5 稳定性实验结果 | 第42-43页 |
| 3.3 小结 | 第43-45页 |
| 第四章 行动障碍野田村病毒(Movement disorder nodavirus,MDNV)的实时荧光逆转录LAMP(RT-LAMP)检测方法的建立及应用 | 第45-59页 |
| 4.1 实验材料与方法 | 第45-50页 |
| 4.1.1 MDNV的病料来源 | 第45-46页 |
| 4.1.2 MDNV的引物设计 | 第46页 |
| 4.1.3 MDNV质粒标准品的制备 | 第46页 |
| 4.1.4 MDNV RNA标准品的制备 | 第46-48页 |
| 4.1.5 MDNV的RT-LAMP反应体系 | 第48-49页 |
| 4.1.6 MDNV的RT-LAMP条件优化 | 第49-50页 |
| 4.1.7 MDNV的质粒标准品和RNA标准品标准曲线的建立 | 第50页 |
| 4.1.8 RT-LAMP的分析特异性检验 | 第50页 |
| 4.1.9 RT-LAMP的分析灵敏度检验 | 第50页 |
| 4.2 结果 | 第50-57页 |
| 4.2.1 MDNV的RT-LAMP条件优化 | 第50-53页 |
| 4.2.2 分析特异性检测结果 | 第53-54页 |
| 4.2.3 分析灵敏度实验 | 第54-55页 |
| 4.2.4 基于DNA模板的标准曲线的建立 | 第55-56页 |
| 4.2.5 基于RNA模板的标准曲线的建立 | 第56-57页 |
| 4.3 小结 | 第57-59页 |
| 第五章 2016-2017年我国沿海省市虾类偷死野田村病(CMNV)分子流行病学调查 | 第59-73页 |
| 5.1 材料与方法 | 第60-66页 |
| 5.1.1 样品来源 | 第60-61页 |
| 5.1.2 RNA提取和纯化 | 第61-62页 |
| 5.1.3 利用RT-nPCR方法检测样品中CMNV | 第62-63页 |
| 5.1.4 利用RT-LAMP方法检测样品中CMNV和MDNV | 第63-65页 |
| 5.1.5 利用TaqMan RT-qPCR方法检测样品中CMNV | 第65-66页 |
| 5.1.6 样品阳性检出率计算 | 第66页 |
| 5.2 结果 | 第66-70页 |
| 5.2.1 CMNV在不同虾类中的阳性率分析 | 第66-67页 |
| 5.2.2 CMNV和MDNV的年度阳性检出率分析 | 第67-68页 |
| 5.2.3 2016 ~2017年度CMNV的流行区域分析 | 第68-70页 |
| 5.3 讨论 | 第70-73页 |
| 参考文献 | 第73-80页 |
| 附录 | 第80-81页 |
| 致谢 | 第81页 |
