| 缩略语表 | 第7-9页 |
| 摘要 | 第9-14页 |
| ABSTRACT | 第14-19页 |
| 前言 | 第20-22页 |
| 文献回顾 | 第22-28页 |
| 第一部分 PRMT5在乳腺癌细胞株和临床样本中的表达及其对细胞生物学行为影响 | 第28-42页 |
| 1 材料 | 第28-30页 |
| 1.1 临床样本 | 第28页 |
| 1.2 细胞系 | 第28页 |
| 1.3 主要试剂及耗材 | 第28-29页 |
| 1.4 主要仪器 | 第29-30页 |
| 1.5 PCR引物 | 第30页 |
| 2 方法 | 第30-36页 |
| 2.1 细胞培养 | 第30页 |
| 2.2 免疫组织化学 | 第30-31页 |
| 2.3 RNA提取与实时定量PCR | 第31-33页 |
| 2.4 蛋白定量检测 | 第33-35页 |
| 2.5 细胞感染 | 第35页 |
| 2.6 MTT实验 | 第35页 |
| 2.7 Transwell实验 | 第35页 |
| 2.8 统计学分析 | 第35-36页 |
| 3 结果 | 第36-40页 |
| 3.1 RT-qPCR检测PRMT5在正常人乳腺上皮细胞及五株人乳腺癌细胞系中的表达情况 | 第36页 |
| 3.2 Western Blot检测PRMT5在正常人乳腺上皮细胞及五株人乳腺癌细胞系中的表达情况 | 第36-37页 |
| 3.3 Western Blot及免疫组化检测PRMT5在临床组织标本中的表达情况 | 第37-38页 |
| 3.4 Western Blot验证MDA-MB-231和MCF-7细胞系过表达PRMT5的情况 | 第38页 |
| 3.5 MTT实验检测PRMT5对乳腺癌细胞增殖能力的影响 | 第38-39页 |
| 3.6 Transwell实验检测PRMT5对于乳腺癌细胞迁移能力的影响 | 第39-40页 |
| 4 讨论 | 第40-42页 |
| 第二部分 PRMT5促进乳腺癌细胞对阿霉素的耐药性 | 第42-54页 |
| 1 材料 | 第42-43页 |
| 1.1 主要试剂及耗材 | 第42-43页 |
| 1.2 主要仪器 | 第43页 |
| 2 方法 | 第43-44页 |
| 2.1 细胞培养 | 第43页 |
| 2.2 蛋白定量检测 | 第43页 |
| 2.3 细胞感染 | 第43页 |
| 2.4 MTT实验 | 第43页 |
| 2.5 TUNEL实验 | 第43-44页 |
| 3 结果 | 第44-53页 |
| 3.1 GEO数据库分析PRMT5在亲本细胞MCF-7和阿霉素耐药细胞MCF-7/ADR中的表达水平 | 第44-45页 |
| 3.2 Western Blot检测PRMT5在亲本细胞MCF-7和阿霉素耐药细胞MCF-7/ADR中的表达水平 | 第45-46页 |
| 3.3 Western Blot验证MCF-7/ADR敲减PRMT5后蛋白表达水平的改变 | 第46页 |
| 3.4 敲减PRMT5降低MCF-7/ADR细胞对阿霉素的耐药性 | 第46-49页 |
| 3.5 过表达PRMT5增加了MDA-MB-231和MCF-7细胞对阿霉素的耐药性 | 第49-53页 |
| 4 讨论 | 第53-54页 |
| 第三部分 PRMT5通过调控乳腺癌细胞的干性促进乳腺癌细胞对阿霉素的耐药性 | 第54-59页 |
| 1 材料 | 第54-55页 |
| 1.1 主要试剂及耗材 | 第54页 |
| 1.2 主要仪器 | 第54-55页 |
| 2 方法 | 第55页 |
| 2.1 细胞培养 | 第55页 |
| 2.2 乳腺球形成实验 | 第55页 |
| 2.3 流式细胞仪检测CD44+/CD24-细胞比例 | 第55页 |
| 3 结果 | 第55-57页 |
| 3.1 乳腺球形成实验及流式细胞仪检测PRMT5对细胞干性的影响 | 第55-57页 |
| 4 讨论 | 第57-59页 |
| 第四部分 PRMT5调控乳腺癌细胞干性来促进其对阿霉素耐药性的机制初探 | 第59-70页 |
| 1 材料 | 第59-61页 |
| 1.1 主要试剂及耗材 | 第59-60页 |
| 1.2 主要仪器 | 第60-61页 |
| 1.3 PCR引物 | 第61页 |
| 2 方法 | 第61-62页 |
| 2.1 细胞培养 | 第61页 |
| 2.2 蛋白定量检测 | 第61页 |
| 2.3 细胞感染 | 第61页 |
| 2.4 MTT实验 | 第61页 |
| 2.5 TUNEL实验 | 第61页 |
| 2.6 RNA提取与实时定量PCR | 第61页 |
| 2.7 乳腺球形成实验 | 第61-62页 |
| 2.8 流式细胞仪检测CD44+/CD24-细胞比例 | 第62页 |
| 3 结果 | 第62-68页 |
| 3.1 Western Blot检测MDA-MB-231和MCF-7细胞过表达PRMT5及MCF-7/ADR敲减PRMT5与否干性相关分子表达的变化 | 第62页 |
| 3.2 Western Blot检测乳腺癌患者肿瘤组织和癌旁正常组织的干性相关分子的表达并与PRMT5做相关性分析 | 第62-63页 |
| 3.3 Western Blot检测过表达PRMT5(R368A)后MDA-MB-231及MCF-7细胞蛋白表达情况 | 第63-64页 |
| 3.4 RT-qPCR及Western Blot检测分别过表达PRMT5与PRMT5(R368A)对干性相关分子调控的差异 | 第64-66页 |
| 3.5 乳腺球形成实验及流式细胞仪检测PRMT5(R368A)对细胞干性水平的调控 | 第66页 |
| 3.6 PRMT5甲基化活性对乳腺癌细胞阿霉素耐药性的影响 | 第66-68页 |
| 4 讨论 | 第68-70页 |
| 总结 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-80页 |
| 个人简历和研究成果 | 第80-81页 |
| 致谢 | 第81页 |
