| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 第一章 绪论 | 第21-33页 |
| 1.1 海藻酸的研究进展 | 第21-26页 |
| 1.1.1 海藻酸的结构 | 第21-22页 |
| 1.1.2 海藻酸的理化性质 | 第22-23页 |
| 1.1.3 海藻酸的应用 | 第23-26页 |
| 1.1.3.1 食品领域 | 第23页 |
| 1.1.3.2 医药领域 | 第23-24页 |
| 1.1.3.3 工业领域 | 第24页 |
| 1.1.3.4 农业领域 | 第24页 |
| 1.1.3.5 能源领域 | 第24-25页 |
| 1.1.3.6 其他领域 | 第25-26页 |
| 1.2 海藻酸的酶解机理的研究现状 | 第26-28页 |
| 1.2.1 纤维素酶的降解机理 | 第26-27页 |
| 1.2.2 纤维素酶系内的协同作用 | 第27-28页 |
| 1.3 海藻酸分解菌对海藻酸代谢途径的研究 | 第28-30页 |
| 1.3.1 细胞的表面结构 | 第28页 |
| 1.3.2 海藻酸的吸收 | 第28-29页 |
| 1.3.2.1 周质结合蛋白 | 第28-29页 |
| 1.3.2.2 ATP-结合蛋白 | 第29页 |
| 1.3.3 海藻酸单体的代谢 | 第29-30页 |
| 1.4 转录组学在生物代谢方面的研究进展 | 第30-31页 |
| 1.5 论文研究意义和研究内容 | 第31-33页 |
| 1.5.1 论文研究意义 | 第31-32页 |
| 1.5.2 论文的研究内容 | 第32-33页 |
| 第二章 海藻酸裂解酶协同作用的初步研究 | 第33-49页 |
| 2.1 实验材料与方法 | 第33-40页 |
| 2.1.1 供试菌株 | 第33页 |
| 2.1.2 主要试剂及配置 | 第33-35页 |
| 2.1.3 主要仪器设备 | 第35页 |
| 2.1.4 培养基的配方 | 第35页 |
| 2.1.5 实验方法 | 第35-40页 |
| 2.1.5.1 海藻酸裂解酶的纯化 | 第36-37页 |
| 2.1.5.2 SDS-PAGE测定酶的纯度 | 第37页 |
| 2.1.5.3 蛋白质含量的测定 | 第37-38页 |
| 2.1.5.4 酶活力的测定 | 第38页 |
| 2.1.5.5 polyM和polyG的制备 | 第38-39页 |
| 2.1.5.6 三种海藻酸裂解酶不同比例混合酶活的测定 | 第39-40页 |
| 2.1.5.7 协同度(DS)的计算 | 第40页 |
| 2.1.5.8 ZHO-Ⅱ、ZHO-Ⅲ和ZHO-Ⅳ的性质 | 第40页 |
| 2.2 实验结果 | 第40-45页 |
| 2.2.1 重组海藻酸裂解酶ZHO-Ⅱ、ZHO-Ⅲ和ZHO-Ⅳ的表达 | 第40-42页 |
| 2.2.1.1 重组海藻酸裂解酶ZHO-Ⅱ、ZHO-Ⅲ和ZHO-Ⅳ的纯化 | 第40-41页 |
| 2.2.1.2 重组海藻酸裂解酶ZHO-Ⅱ、ZHO-Ⅲ和ZHO-Ⅳ的酶活的测定 | 第41-42页 |
| 2.2.2 以海藻酸为底物时,海藻酸裂解酶ZHO-Ⅱ、ZHO-Ⅲ和ZHO-Ⅳ的协同作用研究 | 第42-43页 |
| 2.2.3 以PM为底物时,海藻酸裂解酶ZHO-Ⅱ、ZHO-Ⅲ和ZHO-Ⅳ的协同作用研究 | 第43-44页 |
| 2.2.4 以PG为底物时,海藻酸裂解酶ZHO-Ⅱ、ZHO-Ⅲ和ZHO-Ⅳ的协同作用研究 | 第44-45页 |
| 2.3 讨论 | 第45-46页 |
| 2.4 小结 | 第46-49页 |
| 第三章 Sunxiuqinia sp. SH-52全基因组测序及海藻酸代谢相关基因的分析 | 第49-65页 |
| 3.1 实验材料与方法 | 第49-52页 |
| 3.1.1 供试菌株 | 第49页 |
| 3.1.2 主要试剂及配置 | 第49-50页 |
| 3.1.3 主要仪器设备 | 第50页 |
| 3.1.4 培养基的配方 | 第50页 |
| 3.1.5 实验方法 | 第50-52页 |
| 3.1.5.1 Sunxiuqinia sp. SH-52基因组的提取 | 第51页 |
| 3.1.5.2 全基因组测序 | 第51-52页 |
| 3.2 实验结果 | 第52-62页 |
| 3.2.1 Sunxiuqinia sp. SH-52基因组的基本信息分析 | 第52页 |
| 3.2.2 Sunxiuqinia sp. SH-52的亲缘关系 | 第52-53页 |
| 3.2.3 Sunxiuqinia sp. SH-52与其他菌株海藻酸裂解酶的比较分析 | 第53-62页 |
| 3.2.3.1 Sunxiuqinia sp. SH-52海藻酸裂解酶氨基酸序列分析 | 第53-60页 |
| 3.2.3.2 Sunxiuqinia sp. SH-52海藻酸裂解酶的三维结构预测 | 第60-62页 |
| 3.3 讨论 | 第62页 |
| 3.4 小结 | 第62-65页 |
| 第四章 厌氧海藻酸分解菌Sunxiuqinia sp. SH-52海藻酸代谢途径的研究 | 第65-99页 |
| 4.1 实验材料与方法 | 第65-68页 |
| 4.1.1 代谢抑制剂对SH-52在不同底物上生长代谢影响 | 第65-66页 |
| 4.1.1.1 供试菌株 | 第65页 |
| 4.1.1.2 主要试剂及配置 | 第65页 |
| 4.1.1.3 主要仪器设备 | 第65-66页 |
| 4.1.1.4 培养基的配方 | 第66页 |
| 4.1.1.5 实验方法 | 第66页 |
| 4.1.2 Sunxiuqinia sp. SH-52转录组学分析 | 第66-68页 |
| 4.1.2.1 供试菌株 | 第66页 |
| 4.1.2.2 主要试剂及配置 | 第66-67页 |
| 4.1.2.3 主要仪器设备 | 第67页 |
| 4.1.2.4 培养基的配方 | 第67页 |
| 4.1.2.5 实验方法 | 第67-68页 |
| 4.2 结果 | 第68-94页 |
| 4.2.1 代谢抑制剂对SH-52在不同底物上生长的影响 | 第68-70页 |
| 4.2.2 Sunxiuqinia sp. SH-52转录组学分析 | 第70-78页 |
| 4.2.2.1 Sunxiuqinia sp. SH-52转录组测序 | 第70-74页 |
| 4.2.2.2 Sunxiuqinia sp. SH-52转录组学的生物信息学分析 | 第74-78页 |
| 4.2.3 Sunxiuqinia sp. SH-52的海藻酸代谢机理研究 | 第78-94页 |
| 4.2.3.1 海藻酸裂解酶基因的分析 | 第78页 |
| 4.2.3.2 Sunxiuqinia sp. SH-52海藻酸转运蛋白的分析 | 第78-89页 |
| 4.2.3.3 Sunxiuqinia sp. SH-52海藻酸单体代谢相关酶的分析 | 第89-91页 |
| 4.2.3.4 Sunxiuqinia sp. SH-52中DEH还原酶基因的确定 | 第91-92页 |
| 4.2.3.5 丙酮酸代谢相关基因的分析 | 第92-94页 |
| 4.3 讨论 | 第94-96页 |
| 4.4 小结 | 第96-99页 |
| 第五章 不同碳源对Sunxiuqinia sp. SH-52海藻酸裂解酶的诱导及特性分析 | 第99-129页 |
| 5.1 实验材料与方法 | 第99-111页 |
| 5.1.1 不同碳源培养条件下海藻酸裂解酶酶活的测定 | 第99-101页 |
| 5.1.1.1 供试菌株 | 第99页 |
| 5.1.1.2 主要试剂及配置 | 第99页 |
| 5.1.1.3 主要仪器设备 | 第99-100页 |
| 5.1.1.4 培养基的配方 | 第100页 |
| 5.1.1.5 实验方法 | 第100-101页 |
| 5.1.2 不同碳源诱导下海藻酸裂解酶转录水平测定 | 第101-105页 |
| 5.1.2.1 供试菌株 | 第101页 |
| 5.1.2.2 主要试剂及配置 | 第101页 |
| 5.1.2.3 主要仪器设备 | 第101-102页 |
| 5.1.2.4 培养基的配方 | 第102页 |
| 5.1.2.5 实验方法 | 第102-105页 |
| 5.1.3 Sunxiuqinia sp. SH-52海藻酸裂解SHA-I的原核表达及特性分析 | 第105-111页 |
| 5.1.3.1 供试菌株和质粒 | 第105页 |
| 5.1.3.2 主要试剂和配制 | 第105页 |
| 5.1.3.3 主要仪器设备 | 第105-106页 |
| 5.1.3.4 培养基的配方 | 第106页 |
| 5.1.3.5 实验方法 | 第106-111页 |
| 5.2 结果 | 第111-125页 |
| 5.2.1 不同碳源对Sunxiuqinia sp. SH-52海藻酸裂解酶的诱导表达分析 | 第111-116页 |
| 5.2.1.1 不同碳源对海藻酸裂解酶酶活的影响 | 第111-112页 |
| 5.2.1.2 海藻酸与半乳糖对海藻酸裂解酶酶活的影响 | 第112-113页 |
| 5.2.1.3 海藻酸与葡萄糖对海藻酸裂解酶酶活的影响 | 第113页 |
| 5.2.1.4 半乳糖与葡萄糖对海藻酸裂解酶酶活的影响 | 第113-114页 |
| 5.2.1.5 不同碳源对海藻酸裂解酶转录水平的影响 | 第114-116页 |
| 5.2.2 Sunxiuqinia sp. SH-52海藻酸裂解酶SHA-I的原核表达及特性分析 | 第116-125页 |
| 5.2.2.1 TA克隆载体pMD19-T-SHA-I的构建策略 | 第116-117页 |
| 5.2.2.2 TA克隆载体pMD19-T-SHA-I的构建 | 第117-119页 |
| 5.2.2.3 原核表达载体pGEX-4T-1-SHA-I的构建策略 | 第119-120页 |
| 5.2.2.4 原核表达载体pGEX-4T-1-SHA-I的构建 | 第120-121页 |
| 5.2.2.5 重组酶SHA-I的表达 | 第121-122页 |
| 5.2.2.6 重组酶SHA-I的酶学性质 | 第122-125页 |
| 5.3 讨论 | 第125-127页 |
| 5.4 小结 | 第127-129页 |
| 第六章 结论与展望 | 第129-133页 |
| 6.1 结论 | 第129-132页 |
| 6.2 展望 | 第132-133页 |
| 致谢 | 第133-135页 |
| 参考文献 | 第135-147页 |
| 附录 攻读硕士期间发表的论文和专利 | 第147页 |
