| 中文摘要 | 第3-4页 |
| 英文摘要 | 第4页 |
| 引言 | 第8-18页 |
| 1.Dip2a概述 | 第8-9页 |
| 1.1 结构及其在进化上的保守性 | 第8-9页 |
| 1.2 表达区域及可能生理功能 | 第9页 |
| 2.FSTL1概述 | 第9-11页 |
| 2.1 FSTL1的分布 | 第9-10页 |
| 2.2 FSTL1参与的生物学过程及部分生理功能 | 第10-11页 |
| 3.FSTL1与DIP2A的关系 | 第11-12页 |
| 3.1 DIP2A可能是FSTL1的受体 | 第11页 |
| 3.2 FSTL1参与Akt磷酸化过程中DIP2A的参与情况 | 第11-12页 |
| 4.DIP2蛋白家族概述 | 第12-14页 |
| 4.1 DIP2B蛋白与DIP2C蛋白 | 第12-13页 |
| 4.2 DIP2蛋白家族成员间的关系 | 第13-14页 |
| 5.转基因动物概述 | 第14-15页 |
| 5.2 转基因动物模型的构建方法 | 第14-15页 |
| 6.基因组定点编辑技术概述 | 第15-18页 |
| 实验材料与方法 | 第18-28页 |
| 1.实验材料 | 第18-19页 |
| 1.1 主要试剂及抗体 | 第18页 |
| 1.2 质粒与菌株 | 第18页 |
| 1.3 实验动物 | 第18页 |
| 1.4 主要实验仪器 | 第18-19页 |
| 2.实验方法 | 第19-28页 |
| 2.1 基因型鉴定 | 第19页 |
| 2.2 石蜡切片及HE染色 | 第19-20页 |
| 2.3 提取组织蛋白、BCA定量以及Western Blot | 第20-21页 |
| 2.4 组织总RNA的提取 | 第21-22页 |
| 2.5 逆转录及PCR反应 | 第22-23页 |
| 2.6 结扎公鼠 | 第23页 |
| 2.7 获取受精卵 | 第23页 |
| 2.8 显微注射及输卵管移植 | 第23-24页 |
| 2.9 质粒的大量提取及纯化 | 第24-25页 |
| 2.10 pX330-sgRNA表达载体的构建 | 第25页 |
| 2.11 胚胎各组织LacZ整体染色 | 第25-26页 |
| 2.12 转化、挑取单克隆及快速鉴定 | 第26页 |
| 2.13 小提质粒 | 第26-28页 |
| 实验结果 | 第28-42页 |
| 1.原核注射环状pX330-sgRNA质粒构建Dip2a ?65kb基因敲除小鼠模型 | 第28-30页 |
| 1.1 sgRNA的设计及表达载体的构建 | 第28-29页 |
| 1.2 原核注射环状pX330-sgRNA1和pX330-sgRNA2质粒 | 第29-30页 |
| 2.Dip2a ?65kb基因敲除小鼠中Dip2a的表达分析 | 第30-31页 |
| 3.Dip2a ?65kb成鼠各组织器官HE染色结果分析 | 第31-35页 |
| 3.1 Dip2a~(?65kb/?65kb)和野生型小鼠脑的组织形态学分析 | 第31-32页 |
| 3.2 Dip2a~(?65kb/?65kb)和野生型小鼠脾的组织形态学分析 | 第32-33页 |
| 3.3 Dip2a~(?65kb/?65kb)和野生型小鼠其他器官的组织形态学分析 | 第33-35页 |
| 4.Dip2b-LacZ报告基因小鼠初步表型分析 | 第35-40页 |
| 4.1 Dip2b-LacZ报告基因小鼠模型的鉴定 | 第35-36页 |
| 4.2 Dip2b-LacZ报告小鼠胚胎鉴定 | 第36-38页 |
| 4.3 Dip2b在Dip2b~(LacZ/LacZ)胚胎期各器官中的表达分布 | 第38-39页 |
| 4.4 Dip2b~(LacZ/LacZ)小鼠死亡时间研究 | 第39页 |
| 4.5 Dip2b~(LacZ/LacZ)小鼠肺形态变化 | 第39-40页 |
| 5.Dip2a~(?65kb/?65kb);Dip2b~(LacZ/WT)稳定遗传体系的建立 | 第40-42页 |
| 讨论 | 第42-47页 |
| 1.环状质粒可以高效率的在受精卵中产生大片段的缺失 | 第42页 |
| 2.Dip2a基因功能研究 | 第42-44页 |
| 3.Dip2b基因功能研究 | 第44-47页 |
| 结论 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-52页 |
| 致谢 | 第52页 |
