| 中文摘要 | 第3-6页 |
| 英文摘要 | 第6-8页 |
| 缩略词表 | 第12-13页 |
| 1 绪论 | 第13-23页 |
| 1.1 问题的提出及意义 | 第13-15页 |
| 1.2 国内外研究现状 | 第15-21页 |
| 1.2.1 恶性黑色素瘤的研究进展 | 第15-17页 |
| 1.2.2 HO-1与肿瘤的关系 | 第17-19页 |
| 1.2.3 选择性剪接对基因表达的影响 | 第19-21页 |
| 1.3 本文的研究内容 | 第21-22页 |
| 1.3.1 研究目的 | 第21页 |
| 1.3.2 主要研究内容 | 第21-22页 |
| 1.4 本文的创新点 | 第22-23页 |
| 2 新型剪接体14kDaHO-1的发现及鉴定 | 第23-34页 |
| 2.1 引言 | 第23页 |
| 2.2 实验材料 | 第23-26页 |
| 2.2.1 主要仪器设备 | 第23-24页 |
| 2.2.2 实验试剂及耗材 | 第24-25页 |
| 2.2.3 相关试剂的配置 | 第25-26页 |
| 2.3 实验方法 | 第26-29页 |
| 2.3.1 细胞培养及收集 | 第26页 |
| 2.3.2 mRNA提取 | 第26页 |
| 2.3.3 RNA反转成cDNA | 第26页 |
| 2.3.4 HO-1基因的扩增 | 第26-27页 |
| 2.3.5 基因序列分析 | 第27-28页 |
| 2.3.6 HO-1不同外显子区域的PCR扩增分析 | 第28页 |
| 2.3.7 Westernblotting检测HO-1蛋白表达 | 第28-29页 |
| 2.4 实验结果 | 第29-33页 |
| 2.4.1 HO-1基因PCR扩增结果 | 第29-30页 |
| 2.4.2 HO-1基因外显子/内含子分析及结构预测 | 第30-31页 |
| 2.4.3 HO-1不同外显子区域基因PCR分析 | 第31页 |
| 2.4.4 Westernblotting检测HO-1的表达 | 第31-32页 |
| 2.4.5 内含子剪接位点分析 | 第32-33页 |
| 2.5 讨论 | 第33-34页 |
| 3 14kDaHO-1的表达及亚细胞定位 | 第34-43页 |
| 3.1 引言 | 第34页 |
| 3.2 实验材料 | 第34-36页 |
| 3.2.1 实验仪器及设备 | 第34-35页 |
| 3.2.2 实验试剂及耗材 | 第35-36页 |
| 3.2.3 相关试剂的配置 | 第36页 |
| 3.3 相关实验方法 | 第36-40页 |
| 3.3.1 mRNA提取 | 第36-37页 |
| 3.3.2 RNA反转成cDNA | 第37页 |
| 3.3.3 RT-qPCR分析14kDaHO-1和32kDaHO-1的表达 | 第37-38页 |
| 3.3.4 免疫荧光实验 | 第38页 |
| 3.3.5 pCMV-32kDaHO-1和pCMV-14kDaHO-1过表达载体的构建 | 第38-39页 |
| 3.3.6 质粒转染 | 第39-40页 |
| 3.4 相关实验结果 | 第40-42页 |
| 3.4.1 14 kDaHO-1和32kDaHO-1在不同细胞中的表达 | 第40-41页 |
| 3.4.2 UV辐射和H2O2对14kDaHO-1表达的影响 | 第41页 |
| 3.4.3 UV辐射对14kDaHO-1亚细胞定位的影响 | 第41-42页 |
| 3.5 讨论 | 第42-43页 |
| 4 14kDaHO-1促细胞增殖和增加端粒相对长度 | 第43-58页 |
| 4.1 引言 | 第43页 |
| 4.2 实验材料 | 第43-45页 |
| 4.2.1 主要仪器设备 | 第43-44页 |
| 4.2.2 实验试剂及耗材 | 第44-45页 |
| 4.2.3 相关试剂的配置 | 第45页 |
| 4.3 相关实验方法 | 第45-51页 |
| 4.3.1 mRNA提取 | 第45-46页 |
| 4.3.2 RNA反转成cDNA | 第46页 |
| 4.3.3 RT-qPCR分析14kDaHO-1和32kDaHO-1的表达 | 第46-47页 |
| 4.3.4 流式细胞术检测细胞周期 | 第47页 |
| 4.3.5 慢病毒载体构建 | 第47-48页 |
| 4.3.6 慢病毒包装及稳定细胞系构建 | 第48-49页 |
| 4.3.7 CCK-8实验 | 第49页 |
| 4.3.8 结晶紫染色实验 | 第49页 |
| 4.3.9 端粒长度检测 | 第49-50页 |
| 4.3.10 质粒转染 | 第50页 |
| 4.3.11 Westernblotting检测HO-1蛋白表达 | 第50-51页 |
| 4.3.12 裸鼠成瘤实验 | 第51页 |
| 4.4 相关实验结果 | 第51-56页 |
| 4.4.1 14 kDaHO-1对FEK4细胞周期的影响 | 第51-52页 |
| 4.4.2 14 kDaHO-1和32kDaHO-1过表达细胞系的构建 | 第52-53页 |
| 4.4.3 14 kDaHO-1结晶紫和CCK-8实验证实14kDaHO-1细胞增殖中的作用 | 第53-55页 |
| 4.4.4 14 kDaHO-1对细胞相对端粒长度的影响 | 第55页 |
| 4.4.5 14 kDaHO-1对黑色素瘤增殖和端粒长度的影响 | 第55-56页 |
| 4.5 讨论 | 第56-58页 |
| 5 结论与展望 | 第58-60页 |
| 5.1 本研究的主要结论 | 第58页 |
| 5.2 研究展望 | 第58-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-68页 |
| 附录 | 第68-72页 |
| A pMD~(TML)9-T载体的图谱 | 第68-69页 |
| B pCMV-HA载体的图谱 | 第69-70页 |
| C pLJM载体的图谱 | 第70-71页 |
| D pLKO.1载体的图谱 | 第71-72页 |
| E 作者在硕士期间发表的论文 | 第72页 |
