| 摘要 | 第11-13页 |
| Abstract | 第13-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-28页 |
| 1.1 玉米秸秆研究现状 | 第16-17页 |
| 1.2 纤维素概述 | 第17-18页 |
| 1.2.1 纤维素结构 | 第17页 |
| 1.2.2 纤维素的降解方式 | 第17-18页 |
| 1.3 纤维素酶概述 | 第18-22页 |
| 1.3.1 纤维素酶系的组成 | 第18页 |
| 1.3.2 纤维素酶的分子结构 | 第18-19页 |
| 1.3.3 纤维素酶的作用机理 | 第19-20页 |
| 1.3.4 纤维素酶的应用 | 第20-22页 |
| 1.3.4.1 纤维素酶在畜禽养殖业及农业中的应用 | 第20-21页 |
| 1.3.4.2 纤维素酶在工业方面的应用 | 第21-22页 |
| 1.4 纤维素降解菌研究现状 | 第22-24页 |
| 1.4.1 纤维素降解菌的发展 | 第22-23页 |
| 1.4.2 高产纤维素酶细菌的研究现状 | 第23页 |
| 1.4.3 高产纤维素酶枯草芽孢杆菌的研究现状 | 第23-24页 |
| 1.5 纤维素酶基因克隆 | 第24页 |
| 1.6 高通量测序技术 | 第24-26页 |
| 1.6.1 高通量测序技术的发展 | 第24-25页 |
| 1.6.2 高通量测序技术的应用 | 第25-26页 |
| 1.7 发酵产酶的优化策略 | 第26-27页 |
| 1.7.1 单因素实验设计 | 第26页 |
| 1.7.2 响应面实验设计 | 第26-27页 |
| 1.8 研究目的意义与主要内容 | 第27-28页 |
| 第二章 玉米秸秆发酵过程中细菌菌群的结构特征 | 第28-39页 |
| 2.1 材料和方法 | 第28-31页 |
| 2.1.1 材料 | 第28页 |
| 2.1.2 发酵液中糖含量测定 | 第28页 |
| 2.1.3 玉米秸秆自然发酵过程中菌群 16S rDNA高通量测序 | 第28-29页 |
| 2.1.3.1 基因组DNA电泳检测 | 第28页 |
| 2.1.3.2 PCR引物设计及扩增 | 第28-29页 |
| 2.1.4 测序数据统计 | 第29页 |
| 2.1.5 序列分析 | 第29-30页 |
| 2.1.5.1 OTU聚类 | 第29-30页 |
| 2.1.5.2 Alpha多样性分析 | 第30页 |
| 2.1.5.3 分类学分析 | 第30页 |
| 2.1.6 数据统计分析 | 第30-31页 |
| 2.2 结果与分析 | 第31-34页 |
| 2.2.1 还原糖含量与总糖含量 | 第31页 |
| 2.2.2 Illumina Miseq测序概况及秸秆自然发酵菌群多样性 | 第31-34页 |
| 2.2.2.1 菌群丰度 | 第32页 |
| 2.2.2.2 菌群多样性 | 第32-33页 |
| 2.2.2.3 样品文库覆盖率评估 | 第33页 |
| 2.2.2.4 稀释性曲线 | 第33-34页 |
| 2.3 菌群结构组成分析 | 第34-36页 |
| 2.3.1 门水平菌群的丰度 | 第34-35页 |
| 2.3.2 属水平菌群的丰度 | 第35页 |
| 2.3.3 各发酵样品中细菌相关性分析 | 第35-36页 |
| 2.4 细菌群落组成主成分分析 | 第36页 |
| 2.5 讨论 | 第36-39页 |
| 第三章 高产纤维素酶菌株的分离、鉴定及其生长特性 | 第39-49页 |
| 3.1 材料与方法 | 第39-43页 |
| 3.1.1 材料 | 第39-40页 |
| 3.1.1.1 样品来源 | 第39页 |
| 3.1.1.2 培养基 | 第39页 |
| 3.1.1.3 药品及仪器 | 第39-40页 |
| 3.1.1.4 试剂 | 第40页 |
| 3.1.2 菌种的分离与纯化 | 第40页 |
| 3.1.3 滤纸的降解 | 第40页 |
| 3.1.4 粗酶液的制备 | 第40页 |
| 3.1.5 酶活力测定 | 第40-42页 |
| 3.1.5.1 葡萄糖标准曲线的制作 | 第40-41页 |
| 3.1.5.2 CMC、Cex、FPA酶活力测定 | 第41-42页 |
| 3.1.6 菌株的鉴定 | 第42页 |
| 3.1.6.1 形态观察及生理生化特性 | 第42页 |
| 3.1.6.2 分子生物学鉴定 | 第42页 |
| 3.1.7 DX-4 菌株的生长特性分析 | 第42-43页 |
| 3.1.7.1 生长曲线的制作 | 第42页 |
| 3.1.7.2 最适生长温度的测定 | 第42页 |
| 3.1.7.3 最适生长pH测定 | 第42页 |
| 3.1.7.4 耐盐性测定 | 第42-43页 |
| 3.2 结果与分析 | 第43-47页 |
| 3.2.1 菌株的初筛 | 第43-44页 |
| 3.2.2 酶活力测定 | 第44页 |
| 3.2.2.1 葡萄糖标准曲线 | 第44页 |
| 3.2.2.2 各菌株的酶活 | 第44页 |
| 3.2.3 菌株的鉴定 | 第44-46页 |
| 3.2.3.1 菌株的形态及生理生化鉴定 | 第44-45页 |
| 3.2.3.2 分子生物学鉴定 | 第45-46页 |
| 3.2.4 菌株BS-DX4的生长特性 | 第46-47页 |
| 3.2.4.1 生长曲线 | 第46页 |
| 3.2.4.2 最适生长温度 | 第46-47页 |
| 3.2.4.3 最适生长pH | 第47页 |
| 3.2.5 耐NaCl性能 | 第47页 |
| 3.3 讨论 | 第47-49页 |
| 第四章 响应面法优化枯草芽孢杆菌BS-DX4产β-1，4-内切葡聚糖酶的最佳发酵条件 | 第49-58页 |
| 4.1 材料与方法 | 第49-50页 |
| 4.1.1 实验菌株 | 第49页 |
| 4.1.2 培养基 | 第49页 |
| 4.1.3 实验仪器 | 第49页 |
| 4.1.4 粗酶液制备及酶活测定 | 第49-50页 |
| 4.1.5 单因素实验 | 第50页 |
| 4.1.6 发酵条件优化 | 第50页 |
| 4.2.结果与讨论 | 第50-57页 |
| 4.2.1 BS-DX4发酵产酶培养基优化的单因素结果 | 第50-53页 |
| 4.2.1.1 最佳碳源的筛选 | 第50-51页 |
| 4.2.1.2 最佳氮源的筛选 | 第51页 |
| 4.2.1.3 最佳发酵温度筛选 | 第51-52页 |
| 4.2.1.4 最适发酵时间的筛选 | 第52页 |
| 4.2.1.5 最佳发酵pH的筛选 | 第52-53页 |
| 4.2.1.6 最佳接种量的筛选 | 第53页 |
| 4.2.2 响应面法优化BS-DX4发酵条件 | 第53-57页 |
| 4.2.2.1 Design Expert V8.0 设计及试验结果 | 第53-54页 |
| 4.2.2.2 回归模型的建立与分析 | 第54-55页 |
| 4.2.2.3 发酵条件的响应曲面分析及优化 | 第55-56页 |
| 4.2.2.4 优化发酵参数及验证试验 | 第56-57页 |
| 4.3 讨论 | 第57-58页 |
| 第五章 β-1，4-内切葡聚糖酶基因的克隆及序列分析 | 第58-70页 |
| 5.1 材料与方法 | 第58-61页 |
| 5.1.1 材料 | 第58-59页 |
| 5.1.1.1 菌种 | 第58页 |
| 5.1.1.2 试剂 | 第58页 |
| 5.1.1.3 培养基 | 第58-59页 |
| 5.1.1.4 仪器 | 第59页 |
| 5.1.2 方法 | 第59-61页 |
| 5.1.2.1 刚果红染色法鉴定纤维素酶 | 第59页 |
| 5.1.2.2 引物设计与合成 | 第59页 |
| 5.1.2.3BS-DX4全基因组DNA提取 | 第59页 |
| 5.1.2.4 BS-DX4 β-1，4-内切葡聚糖酶的PCR扩增 | 第59-60页 |
| 5.1.2.4 BS-DX4 bEDG生物信息学分析 | 第60-61页 |
| 5.2 结果与分析 | 第61-69页 |
| 5.2.1 刚果红染色鉴定纤维素酶 | 第61页 |
| 5.2.2 bEDG扩增结果 | 第61-62页 |
| 5.2.3 BS-DX4 bEDG开放阅读框的确定 | 第62-63页 |
| 5.2.4 BS-DX4 bEDG编码蛋白的生物信息学分析 | 第63-69页 |
| 5.2.4.1 预测BS-DX4 bEDG编码蛋白的理化性质 | 第63页 |
| 5.2.4.2 预测BS-DX4 bEDG编码蛋白的亲/疏水 | 第63页 |
| 5.2.4.3 预测BS-DX4 bEDG编码蛋白的跨膜区结构 | 第63-64页 |
| 5.2.4.4 预测BS-DX4 bEDG编码蛋白的二级结构、三维结构 | 第64-65页 |
| 5.2.4.5 预测BS-DX4 bEDG编码蛋白的保守结构域 | 第65-66页 |
| 5.2.4.6 预测BS-DX4 bEDG编码蛋白的亚细胞定位 | 第66页 |
| 5.2.3.7 预测BS-DX4 bEDG编码蛋白的信号肽 | 第66-67页 |
| 5.2.4.8 预测BS-DX4 bEDG编码蛋白的模体 | 第67-68页 |
| 5.2.4.8 BS-DX4 bEDG基因与其它菌株的β-1,4 内切葡聚糖酶基因的氨基酸序列比对及进化分析 | 第68-69页 |
| 5.3 讨论 | 第69-70页 |
| 第六章 结论 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-84页 |
| 硕士期间发表学术论文 | 第84-85页 |
| 致谢 | 第85-86页 |
| 附图 | 第86-87页 |
