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玉米大斑病菌StMSN2基因的功能研究

摘要第4-6页
abstract第6-7页
1 引言第10-15页
    1.1 玉米大斑病及其致病真菌第10页
    1.2 真核生物锌指结构转录因子概况第10-11页
    1.3 植物病原真菌中HOG-MAPK信号转导途径第11-12页
    1.4 植物病原真菌Msn2类转录因子的研究进展第12-13页
    1.5 本研究的目的和意义第13-15页
2 材料和方法第15-26页
    2.1 菌株与质粒第15页
    2.2 试剂与溶液第15-16页
    2.3 培养基第16页
    2.4 仪器与设备第16-17页
    2.5 基因结构的生物信息学分析第17页
    2.6 玉米大斑病菌StMSN2基因敲除载体的构建第17-20页
        2.6.1 全基因组DNA的提取第17-18页
        2.6.2 StMSN2基因的侧翼片段序列和潮霉素序列的PCR扩增第18页
        2.6.3 目的片段的回收、连接与测序。第18-20页
        2.6.4 StMSN2基因侧翼片段与基因敲除载体pBluescriptⅡSK(-)的拼接第20页
        2.6.5 StMSN2-pPZP100敲除载体的构建第20页
    2.7 农杆菌感受态细胞的转化第20-21页
        2.7.1 农杆菌感受态细胞的制备第20-21页
        2.7.2 StMSN2-pPZP100敲除载体转化农杆菌感受态细胞第21页
    2.8 玉米大斑病菌StMSN2基因敲除突变体的获得与验证第21-23页
        2.8.1 农杆菌介导的转化以及筛选第21-22页
        2.8.2 StMSN2基因的敲除策略第22页
        2.8.3 StMSN2基因敲除突变体的验证第22-23页
    2.9 玉米大斑病菌StMSN2基因的功能分析第23-26页
        2.9.1 菌落形态观察与生长速率测定第23页
        2.9.2 分生孢子产量的测定第23页
        2.9.3 菌丝形态的显微观察第23页
        2.9.4 黑色素产量分析第23-24页
        2.9.5 病菌细胞壁结构观察及成分测定第24-25页
        2.9.6 病菌附着胞发育观察及致病力的测定第25页
        2.9.7 突变体对不同物质高渗胁迫耐受力分析第25页
        2.9.8 StMSN2基因敲除突变体对杀菌剂的反应测定第25-26页
3 结果与分析第26-41页
    3.1 StMSN2基因的生物信息学分析第26-29页
        3.1.1 StMSN2基因在基因组中的定位第26页
        3.1.2 基因结构第26页
        3.1.3 蛋白质的理化性质第26页
        3.1.4 蛋白质的二级结构第26-27页
        3.1.5 蛋白质的保守域及功能位点第27页
        3.1.6 蛋白质的三级结构第27-28页
        3.1.7 StMSN2基因的系统发育第28-29页
    3.2 玉米大斑病菌StMSN2基因敲除载体的构建第29-30页
        3.2.1 StMSN2基因侧翼片段的PCR扩增第29页
        3.2.2 StMSN2-pBS敲除载体的酶切验证第29-30页
        3.2.3 StMSN2-pPZP100敲除载体的酶切验证第30页
    3.3 玉米大斑病菌StMSN2基因敲除突变体的获得第30-33页
        3.3.1 突变体的抗性筛选第30-31页
        3.3.2 突变体的潮霉素引物验证第31页
        3.3.3 突变体的特异引物验证第31-32页
        3.3.4 突变体的RT-PCR验证第32页
        3.3.5 突变体的Southern blotting验证第32-33页
    3.4 玉米大斑病菌StMSN2基因的功能分析第33-38页
        3.4.1 StMSN2基因对病菌生长发育的影响第33-36页
        3.4.2 StMSN2基因敲除突变体对细胞壁合成干扰物质和胞壁裂解酶的耐受性分析第36-37页
        3.4.3 StMSN2基因对玉米大斑病菌附着胞发育及致病性的影响第37-38页
    3.5 StMSN2基因敲除突变体对高渗胁迫的耐受性第38-39页
    3.6 StMSN2基因敲除突变体对杀菌剂的反应第39-41页
4 讨论第41-44页
    4.1 真菌中MSN2基因对其生长发育及致病性的调控作用第41页
    4.2 HOG-MAPK级联途径与真菌对高渗胁迫的耐受性第41-42页
    4.3 HOG-MAPK级联途径与真菌对苯基吡咯类杀菌剂的耐受性第42页
    4.4 HOG-MAPK级联途径与真菌对细胞壁合成干扰物质的耐受性第42-44页
5 结论第44-45页
参考文献第45-50页
在读期间发表的学术论文第50-51页
作者简历第51-52页
致谢第52-54页
详细摘要第54-55页

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