| 摘要 | 第4-6页 |
| abstract | 第6-7页 |
| 1 引言 | 第10-15页 |
| 1.1 玉米大斑病及其致病真菌 | 第10页 |
| 1.2 真核生物锌指结构转录因子概况 | 第10-11页 |
| 1.3 植物病原真菌中HOG-MAPK信号转导途径 | 第11-12页 |
| 1.4 植物病原真菌Msn2类转录因子的研究进展 | 第12-13页 |
| 1.5 本研究的目的和意义 | 第13-15页 |
| 2 材料和方法 | 第15-26页 |
| 2.1 菌株与质粒 | 第15页 |
| 2.2 试剂与溶液 | 第15-16页 |
| 2.3 培养基 | 第16页 |
| 2.4 仪器与设备 | 第16-17页 |
| 2.5 基因结构的生物信息学分析 | 第17页 |
| 2.6 玉米大斑病菌StMSN2基因敲除载体的构建 | 第17-20页 |
| 2.6.1 全基因组DNA的提取 | 第17-18页 |
| 2.6.2 StMSN2基因的侧翼片段序列和潮霉素序列的PCR扩增 | 第18页 |
| 2.6.3 目的片段的回收、连接与测序。 | 第18-20页 |
| 2.6.4 StMSN2基因侧翼片段与基因敲除载体pBluescriptⅡSK(-)的拼接 | 第20页 |
| 2.6.5 StMSN2-pPZP100敲除载体的构建 | 第20页 |
| 2.7 农杆菌感受态细胞的转化 | 第20-21页 |
| 2.7.1 农杆菌感受态细胞的制备 | 第20-21页 |
| 2.7.2 StMSN2-pPZP100敲除载体转化农杆菌感受态细胞 | 第21页 |
| 2.8 玉米大斑病菌StMSN2基因敲除突变体的获得与验证 | 第21-23页 |
| 2.8.1 农杆菌介导的转化以及筛选 | 第21-22页 |
| 2.8.2 StMSN2基因的敲除策略 | 第22页 |
| 2.8.3 StMSN2基因敲除突变体的验证 | 第22-23页 |
| 2.9 玉米大斑病菌StMSN2基因的功能分析 | 第23-26页 |
| 2.9.1 菌落形态观察与生长速率测定 | 第23页 |
| 2.9.2 分生孢子产量的测定 | 第23页 |
| 2.9.3 菌丝形态的显微观察 | 第23页 |
| 2.9.4 黑色素产量分析 | 第23-24页 |
| 2.9.5 病菌细胞壁结构观察及成分测定 | 第24-25页 |
| 2.9.6 病菌附着胞发育观察及致病力的测定 | 第25页 |
| 2.9.7 突变体对不同物质高渗胁迫耐受力分析 | 第25页 |
| 2.9.8 StMSN2基因敲除突变体对杀菌剂的反应测定 | 第25-26页 |
| 3 结果与分析 | 第26-41页 |
| 3.1 StMSN2基因的生物信息学分析 | 第26-29页 |
| 3.1.1 StMSN2基因在基因组中的定位 | 第26页 |
| 3.1.2 基因结构 | 第26页 |
| 3.1.3 蛋白质的理化性质 | 第26页 |
| 3.1.4 蛋白质的二级结构 | 第26-27页 |
| 3.1.5 蛋白质的保守域及功能位点 | 第27页 |
| 3.1.6 蛋白质的三级结构 | 第27-28页 |
| 3.1.7 StMSN2基因的系统发育 | 第28-29页 |
| 3.2 玉米大斑病菌StMSN2基因敲除载体的构建 | 第29-30页 |
| 3.2.1 StMSN2基因侧翼片段的PCR扩增 | 第29页 |
| 3.2.2 StMSN2-pBS敲除载体的酶切验证 | 第29-30页 |
| 3.2.3 StMSN2-pPZP100敲除载体的酶切验证 | 第30页 |
| 3.3 玉米大斑病菌StMSN2基因敲除突变体的获得 | 第30-33页 |
| 3.3.1 突变体的抗性筛选 | 第30-31页 |
| 3.3.2 突变体的潮霉素引物验证 | 第31页 |
| 3.3.3 突变体的特异引物验证 | 第31-32页 |
| 3.3.4 突变体的RT-PCR验证 | 第32页 |
| 3.3.5 突变体的Southern blotting验证 | 第32-33页 |
| 3.4 玉米大斑病菌StMSN2基因的功能分析 | 第33-38页 |
| 3.4.1 StMSN2基因对病菌生长发育的影响 | 第33-36页 |
| 3.4.2 StMSN2基因敲除突变体对细胞壁合成干扰物质和胞壁裂解酶的耐受性分析 | 第36-37页 |
| 3.4.3 StMSN2基因对玉米大斑病菌附着胞发育及致病性的影响 | 第37-38页 |
| 3.5 StMSN2基因敲除突变体对高渗胁迫的耐受性 | 第38-39页 |
| 3.6 StMSN2基因敲除突变体对杀菌剂的反应 | 第39-41页 |
| 4 讨论 | 第41-44页 |
| 4.1 真菌中MSN2基因对其生长发育及致病性的调控作用 | 第41页 |
| 4.2 HOG-MAPK级联途径与真菌对高渗胁迫的耐受性 | 第41-42页 |
| 4.3 HOG-MAPK级联途径与真菌对苯基吡咯类杀菌剂的耐受性 | 第42页 |
| 4.4 HOG-MAPK级联途径与真菌对细胞壁合成干扰物质的耐受性 | 第42-44页 |
| 5 结论 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-50页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第50-51页 |
| 作者简历 | 第51-52页 |
| 致谢 | 第52-54页 |
| 详细摘要 | 第54-55页 |
