| 学位论文数据集 | 第3-4页 |
| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 缩略词与符号说明 | 第17-18页 |
| 第一章 绪论 | 第18-34页 |
| 1.1 丙酮酸概述 | 第18-21页 |
| 1.1.1 丙酮酸的性质与用途 | 第18-19页 |
| 1.1.2 丙酮酸的生产 | 第19-21页 |
| 1.1.2.1 化学合成法生产丙酮酸 | 第19页 |
| 1.1.2.2 生物技术法生产丙酮酸 | 第19-21页 |
| 1.2 丙酮酸的代谢途径和代谢控制策略 | 第21-27页 |
| 1.2.1 丙酮酸的代谢途径 | 第21-23页 |
| 1.2.2 丙酮酸的代谢控制策略 | 第23-27页 |
| 1.2.2.1 选育维生素营养缺陷型菌株 | 第23页 |
| 1.2.2.2 减弱丙酮酸支路代谢途径 | 第23-25页 |
| 1.2.2.3 增加ATP去路对糖酵解途径的调控 | 第25-26页 |
| 1.2.2.4 胞内NAD~+再生对糖酵解途径的调控 | 第26-27页 |
| 1.3 系统代谢工程的方法 | 第27-32页 |
| 1.3.1 初级代谢工程及基因敲除 | 第27-29页 |
| 1.3.2 应用于系统代谢工程的合成生物学方法 | 第29-31页 |
| 1.3.2.1 合成启动子 | 第29-30页 |
| 1.3.2.2 密码子优化 | 第30页 |
| 1.3.2.3 RBS计算 | 第30-31页 |
| 1.3.3 转录组分析 | 第31-32页 |
| 1.4 本课题的研究目的及意义 | 第32页 |
| 1.5 本课题的主要研究内容 | 第32-34页 |
| 第二章 产丙酮酸大肠杆菌的转录组分析 | 第34-52页 |
| 2.1 引言 | 第34-35页 |
| 2.2 实验材料 | 第35-39页 |
| 2.2.1 实验试剂与仪器 | 第35-37页 |
| 2.2.2 引物、菌株和质粒 | 第37-38页 |
| 2.2.3 培养基及主要溶液 | 第38-39页 |
| 2.3 实验方法 | 第39-43页 |
| 2.3.1 代谢物分析方法 | 第39页 |
| 2.3.2 转录组分析方法 | 第39-40页 |
| 2.3.3 基因敲除方法 | 第40-43页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第43-50页 |
| 2.4.1 YP211与野生型菌株发酵结果分析 | 第43-44页 |
| 2.4.2 YP211与野生型菌株转录组分析 | 第44-46页 |
| 2.4.3 基于转录组分析的ppsA基因删除 | 第46-49页 |
| 2.4.4 ppsA基因删除菌株发酵结果分析 | 第49-50页 |
| 2.5 本章小结 | 第50-52页 |
| 第三章 基于NADH氧化酶的NADH/NAD~+平衡调控 | 第52-64页 |
| 3.1 引言 | 第52页 |
| 3.2 实验材料 | 第52-54页 |
| 3.2.1 实验试剂与仪器 | 第52-54页 |
| 3.2.2 引物、菌株和质粒 | 第54页 |
| 3.2.3 培养基及主要溶液 | 第54页 |
| 3.3 实验方法 | 第54-57页 |
| 3.3.1 NADH氧化酶表达载体的构建 | 第54-56页 |
| 3.3.2 代谢物分析 | 第56页 |
| 3.3.3 NADH/NAD~+测定方法 | 第56-57页 |
| 3.3.4 5-L发酵罐的使用 | 第57页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第57-62页 |
| 3.4.1 构建质粒表达外源NADH氧化酶NoxE | 第57-59页 |
| 3.4.2 YP301菌株与YP211菌株发酵对比分析 | 第59-61页 |
| 3.4.3 YP301菌株的补糖发酵 | 第61-62页 |
| 3.5 本章小结 | 第62-64页 |
| 第四章 基于不同还原态碳源的NADH/NAD~+平衡调控 | 第64-72页 |
| 4.1 引言 | 第64页 |
| 4.2 实验材料 | 第64-66页 |
| 4.2.1 实验试剂与仪器 | 第65-66页 |
| 4.2.2 培养基及主要溶液 | 第66页 |
| 4.3 实验方法 | 第66页 |
| 4.3.1 代谢物分析方法 | 第66页 |
| 4.3.2 转录组分析方法 | 第66页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第66-70页 |
| 4.4.1 探究不同还原态碳源对丙酮酸生产的影响 | 第67-68页 |
| 4.4.2 不同还原态碳源的转录组分析 | 第68-70页 |
| 4.5 本章小结 | 第70-72页 |
| 第五章 产丙酮酸大肠杆菌中心碳代谢途径的改造 | 第72-92页 |
| 5.1 引言 | 第72-74页 |
| 5.2 实验材料 | 第74-77页 |
| 5.2.1 实验试剂与仪器 | 第74-75页 |
| 5.2.2 引物、菌株和质粒 | 第75-76页 |
| 5.2.3 培养基及主要溶液 | 第76-77页 |
| 5.3 实验方法 | 第77-78页 |
| 5.3.1 代谢物分析方法 | 第77页 |
| 5.3.2 ED途径关键酶表达载体构建 | 第77页 |
| 5.3.3 pfkA基因敲除方法 | 第77页 |
| 5.3.4 edd基因RBS改造方法 | 第77-78页 |
| 5.4 结果与讨论 | 第78-90页 |
| 5.4.1 ED途径表达载体构建的结果 | 第78-81页 |
| 5.4.2 ED途径表达载体对丙酮酸生产的影响 | 第81-83页 |
| 5.4.3 弱化EMP途径、强化ED途径对丙酮酸生产的影响 | 第83-86页 |
| 5.4.3.1 YP203菌株的构建 | 第83-85页 |
| 5.4.3.2 YP203的发酵结果分析 | 第85-86页 |
| 5.4.4 ED途径关键基因的RBS改造对丙酮酸发酵的影响 | 第86-90页 |
| 5.4.4.1 edd基因RBS改造菌株YP501的构建 | 第86-88页 |
| 5.4.4.2 YP501的发酵结果分析 | 第88-90页 |
| 5.5 本章小结 | 第90-92页 |
| 第六章 总结与展望 | 第92-96页 |
| 6.1 结论 | 第92-93页 |
| 6.1.1 产丙酮酸大肠杆菌的转录组分析 | 第92页 |
| 6.1.2 产丙酮酸大肠杆菌的NADH/NAD~+平衡调控 | 第92-93页 |
| 6.1.3 产丙酮酸大肠杆菌中心碳代谢改造 | 第93页 |
| 6.2 创新点 | 第93-94页 |
| 6.3 展望 | 第94-96页 |
| 参考文献 | 第96-104页 |
| 致谢 | 第104-106页 |
| 研究成果及发表的学术论文 | 第106-108页 |
| 作者及导师简介 | 第108-110页 |
| 附件 | 第110-111页 |
