| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-24页 |
| ·稻瘟病抗性基因研究意义 | 第12页 |
| ·稻瘟病抗性基因克隆进展 | 第12-15页 |
| ·植物抗病基因的结构特征和抗性机制 | 第15-19页 |
| ·植物抗病基因的结构特征 | 第15-17页 |
| ·植物抗性反应的识别机制 | 第17-19页 |
| ·基因对基因假说(gene-for-gene hypothesis) | 第18页 |
| ·警卫假说(guard hypothesis) | 第18-19页 |
| ·植物MAPK 基因研究概述 | 第19-22页 |
| ·在拟南芥、烟草中MAPK 基因的研究 | 第20-21页 |
| ·在水稻中MAPK 基因的研究 | 第21-22页 |
| ·本研究的内容及意义 | 第22-24页 |
| 第二章 稻瘟病抗性基因Pi36 超量表达和RNA 干涉载体的构建及遗传转化 | 第24-54页 |
| ·引言 | 第24-25页 |
| ·实验材料 | 第25-28页 |
| ·水稻品种和载体菌株 | 第25页 |
| ·主要试剂及植物组织培养基配方 | 第25-27页 |
| ·化学试剂 | 第25-26页 |
| ·组织培养培养基配方 | 第26-27页 |
| ·PCR 引物 | 第27页 |
| ·主要仪器设备 | 第27-28页 |
| ·实验方法 | 第28-40页 |
| ·Pi36 超量表达载体构建 | 第28-32页 |
| ·Pi36 cDNA 克隆的质粒制备(碱裂解法提取质粒DNA) | 第28页 |
| ·Pi36 基因序列扩增 | 第28-29页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第29页 |
| ·PCR 产物回收 | 第29-30页 |
| ·目的片段的酶切 | 第30页 |
| ·酶切产物的纯化 | 第30页 |
| ·超量表达载体PU1301 质粒DNA 的制备 | 第30页 |
| ·载体质粒酶切、去磷酸化及其纯化 | 第30-31页 |
| ·目的片段与载体质粒DNA 的连接 | 第31页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌感受态细胞及阳性克隆鉴定 | 第31-32页 |
| ·根癌农杆菌EHA105 感受态细胞的制备、转化与鉴定 | 第32-33页 |
| ·制备农杆菌感受态细胞 | 第32-33页 |
| ·重组载体质粒DNA 电击转化农杆菌感受态细胞 | 第33页 |
| ·阳性克隆的鉴定和保存 | 第33页 |
| ·农杆菌介导的水稻遗传转化 | 第33-34页 |
| ·水稻愈伤组织的诱导及继代 | 第33页 |
| ·农杆菌的活化及悬浮 | 第33页 |
| ·愈伤组织的浸染及共培养 | 第33-34页 |
| ·愈伤组织的筛选、预分化及分化 | 第34页 |
| ·幼苗的生根和移栽 | 第34页 |
| ·转基因水稻的分子检测 | 第34-35页 |
| ·植物基因组DNA 快速小量提取 | 第34-35页 |
| ·转基因植株DNA 水平的PCR 分析 | 第35页 |
| ·转基因水稻Pi36 基因RNA 水平上的荧光定量RT-PCR 分析 | 第35-38页 |
| ·转基因水稻总RNA 的提取 | 第35-36页 |
| ·cDNA 第一链的合成 | 第36页 |
| ·cDNA 的PCR 扩增 | 第36-37页 |
| ·荧光定量RT-PCR 分析 | 第37页 |
| ·荧光定量RT-PCR 分析数据处理 | 第37-38页 |
| ·超量表达转基因水稻Pi36 相关防卫基因表达量的分析 | 第38页 |
| ·转基因水稻人工辅助接种 | 第38-39页 |
| ·真菌培养基的配制 | 第38-39页 |
| ·稻瘟病菌接种 | 第39页 |
| ·转基因水稻叶片的台盼蓝染色鉴定 | 第39页 |
| ·转基因水稻花粉育性鉴定 | 第39-40页 |
| ·实验结果 | 第40-50页 |
| ·Pi36 超量表达载体载体构建 | 第40-41页 |
| ·水稻遗传转化、转基因水稻的获得 | 第41-42页 |
| ·T0 代转基因水稻DNA 水平PCR 鉴定 | 第42页 |
| ·转基因水稻中Pi36 基因表达量的分析 | 第42-44页 |
| ·转基因植株cDNA 的RT-PCR 分析 | 第42-43页 |
| ·转基因植株荧光定量RT-PCR | 第43-44页 |
| ·超量表达转基因水稻Pi36 相关防卫基因表达量的分析 | 第44-46页 |
| ·转基因水稻表型鉴定 | 第46-49页 |
| ·Pi36 超量表达转基因水稻T1 代接种结果 | 第46-47页 |
| ·Pi36 干涉载体转基因水稻T1 代接种结果 | 第47-49页 |
| ·转基因水稻叶片的台盼蓝染色鉴定 | 第49页 |
| ·Pi36 RNAi 转基因水稻花粉育性鉴定 | 第49-50页 |
| ·讨论 | 第50-54页 |
| ·关于超量表达载体的构建 | 第50-51页 |
| ·稻瘟病抗性基因Pi36 介导的抗性反应机理及其可能的信号途径 | 第51-52页 |
| ·今后研究工作展望 | 第52-54页 |
| 第三章 水稻MAPK 基因在稻瘟病抗性反应中的表达分析 | 第54-62页 |
| ·引言 | 第54页 |
| ·实验材料 | 第54-56页 |
| ·水稻品种 | 第54-55页 |
| ·主要试剂 | 第55页 |
| ·PCR 引物 | 第55-56页 |
| ·主要实验设备 | 第56页 |
| ·实验方法 | 第56-57页 |
| ·水稻基因组DNA 提取 | 第56页 |
| ·稻瘟病菌接种及采样 | 第56页 |
| ·水稻总RNA 的提取 | 第56页 |
| ·cDNA 第一链的合成 | 第56页 |
| ·梯度PCR 扩增 | 第56-57页 |
| ·荧光定量RT-PCR 分析 | 第57页 |
| ·实验结果 | 第57-59页 |
| ·梯度PCR 扩增 | 第57-58页 |
| ·稻瘟病菌接种后MAPK 表达分析 | 第58-59页 |
| ·讨论 | 第59-62页 |
| ·MAPKs 基因在稻瘟病抗性反应信号传导中的作用 | 第59-60页 |
| ·MAPKs 基因与稻瘟病抗性基因的关系 | 第60-62页 |
| 第四章 OsMAPK2 基因超量表达与干涉载体的构建及遗传转化 | 第62-78页 |
| ·引言 | 第62-63页 |
| ·材料与方法 | 第63-64页 |
| ·水稻品种和载体菌株 | 第63页 |
| ·主要试剂及植物组织培养基配方 | 第63页 |
| ·化学试剂 | 第63页 |
| ·水稻组织培养常用培养基 | 第63页 |
| ·PCR 引物 | 第63-64页 |
| ·实验设备 | 第64页 |
| ·实验方法 | 第64-69页 |
| ·OsMAPK2 基因超量表达载体载体构建 | 第64-66页 |
| ·水稻基因组DNA 提取 | 第64页 |
| ·OsMAPK2 基因序列扩增 | 第64页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第64页 |
| ·PCR 产物回收 | 第64-65页 |
| ·目的片段的酶切 | 第65页 |
| ·酶切产物的纯化 | 第65页 |
| ·超量表达载体PU1301 质粒DNA 的制备 | 第65页 |
| ·载体质粒酶切及其回收 | 第65页 |
| ·目的片段与载体质粒DNA 的连接 | 第65页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌感受态细胞及阳性克隆鉴定 | 第65-66页 |
| ·OsMAPK2 基因干涉载体载体构建 | 第66-68页 |
| ·OsMAPK2 基因序列扩增 | 第66页 |
| ·目的基因第一重复链(正向链)与载体PMCG161 的组装 | 第66-67页 |
| ·第一重复链连接产物转化大肠杆菌感受态细胞及阳性克隆鉴定 | 第67页 |
| ·目的基因第二重复链(反向链)与载体PMCG161 的组装 | 第67-68页 |
| ·第二重复链连接产物转化大肠杆菌感受态细胞及阳性克隆鉴定 | 第68页 |
| ·根癌农杆菌EHA105 农杆菌感受态细胞的制备、转化与鉴定 | 第68页 |
| ·农杆菌介导的水稻遗传转化 | 第68页 |
| ·转基因水稻DNA 水平PCR 检测 | 第68页 |
| ·转基因水稻RNA 水平上荧光定量RT-PCR 分析 | 第68-69页 |
| ·实验结果 | 第69-74页 |
| ·OsMAPK2 基因超量表达载体构建 | 第69-70页 |
| ·OsMAPK2 基因干涉载体构建 | 第70-71页 |
| ·水稻遗传转化、转基因水稻的获得 | 第71-72页 |
| ·T0 代转基因水稻DNA 水平的PCR 鉴定 | 第72-73页 |
| ·转基因水稻中OsMAPK2 基因的表达分析 | 第73-74页 |
| ·讨论 | 第74-78页 |
| ·OsMAPK2 基因在稻瘟病抗性反应中可能的功能 | 第74-75页 |
| ·转基因介导的RNAi 技术的应用 | 第75-76页 |
| ·农杆菌介导的水稻遗传转化 | 第76-78页 |
| 参考文献 | 第78-87页 |
| 致谢 | 第87-88页 |
| 在读期间发表的论文 | 第88页 |
| 参与的科研课题及学术活动 | 第88页 |
